课件

仪器分析晏 琼2010年11月 年 月

课件

第三章 分离分析技术3.1 电泳技术 3.2 层析技术 3.3 微量分析技术

课件

3.1 电泳技术电泳技术: 电泳技术 利用生物大分子在溶液中带有一定数量的净电 荷，不同的生物大分子在溶液中带有不同数目 的净电荷，它们在同一电场下，同一分离介质 的净电荷，它们在同一电场下， 中，电迁移的速度不同。根据这一特性可以对 电迁移的速度不同。 生物大分子的质量和等电点进行鉴定。 生物大分子的质量和等电点进行鉴定。

课件

3.1.1 电泳技术总论一、电泳技术发展史1809年俄国物理学家 年俄国物理学家Рейсе 首次发现电泳现象。他在湿粘土中插上 首次发现电泳现象。 年俄国物理学家 带玻璃管的正负两个电极， 带玻璃管的正负两个电极，加电压后发现正极玻璃管中原有的水层 变混浊，即带负电荷的粘土颗粒向正极移动，这就是电泳现象。 变混浊，即带负电荷的粘土颗粒向正极移动，这就是电泳现象。 1909年Michaelis 首次将胶体离子在电场中的移动称为电泳。他用不 年 首次将胶体离子在电场中的移动称为电泳。 的溶液在U 同pH 的溶液在 形管中测定了转化酶和过氧化氢酶的电泳移动和等 电点。 电点。

课件

3.1.1 电泳技术总论1937年瑞典 年瑞典Uppsala 大学的 大学的Tiselius 对电泳仪器作了改进，创造了 对电泳仪器作了改进， 年瑞典 Tiselius 电泳仪，建立了研究蛋白质的移动界面电泳方法，并首次 电泳仪，建立了研究蛋白质的移动界面电泳方法， 证明了血清是由白蛋白及α、 、 球蛋白组成的，由于Tiselius 在 证明了血清是由白蛋白及 、β、γ 球蛋白组成的，由于 电泳技术方面做出的开拓性贡献而获得了1948年的诺贝尔化学奖。 年的诺贝尔化学奖。 电泳技术方面做出的开拓性贡献而获得了 年的诺贝尔化学奖 1948年Wieland 和Fischer 重新发展了以滤纸作为支持介质的电泳 年 方法，对氨基酸的分离进行过研究。从本世纪 年代起 年代起， 方法，对氨基酸的分离进行过研究。从本世纪50年代起，特别是 1950年Durrum 用纸电泳进行了各种蛋白质的分离以后，开创了利 年 用纸电泳进行了各种蛋白质的分离以后， 用各种固体物质(如各种滤纸、醋酸纤维素薄膜、琼脂凝胶、 用各种固体物质 如各种滤纸、醋酸纤维素薄膜、琼脂凝胶、淀粉 如各种滤纸 凝胶等)作为支持介质的区带电泳方法。 凝胶等 作为支持介质的区带电泳方法。 作为支持介质的区带电泳方法

课件

3.1.1 电泳技术总论1959年Raymond 和Weintraub 利用人工合成的凝胶作为支持介质， 年 利用人工合成的凝胶作为支持介质， 创建了聚丙烯酰胺凝胶电泳，极大地提高了电泳技术的分辨率，

创建了聚丙烯酰胺凝胶电泳，极大地提高了电泳技术的分辨率，开 创了近代电泳的新时代。 创了近代电泳的新时代。 30多年来，聚丙烯酰胺凝胶电泳仍是生物化学和分子生物学中对蛋 多年来， 多年来 白质、多肽、核酸等生物大分子使用最普遍， 白质、多肽、核酸等生物大分子使用最普遍，分辨率最高的分析鉴 定技术，是检验生化物质的最高纯度： 电泳纯” 一维电泳一条 定技术，是检验生化物质的最高纯度：即”电泳纯”(一维电泳一条 带或二维电泳一个点)的标准分析鉴定方法 的标准分析鉴定方法， 带或二维电泳一个点 的标准分析鉴定方法，至今仍被人们称为是对 生物大分子进行分析鉴定的最后、最准确的手段， 生物大分子进行分析鉴定的最后、最准确的手段，即”Last Check”。 。 年代发展起来的新的毛细管电泳技术， 由80年代发展起来的新的毛细管电泳技术，是化学和生化分析鉴定 年代发展起来的新的毛细管电泳技术 技术的重要新发展，己受到人们的充分重视。 技术的重要新发展，己受到人们的充分重视。

课件

3.1.1 电泳技术总论二、电泳的基本原理电泳是指带电颗粒在电场的作用下发生迁移的过程。 电泳是指带电颗粒在电场的作用下发生迁移的过程。许多重要的 生物分子，如氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸等都具有可电离基团， 生物分子，如氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸等都具有可电离基团， 它们在某个特定的pH 值下可以带正电或负电，在电场的作用下，这 值下可以带正电或负电，在电场的作用下， 它们在某个特定的 些带电分子会向着与其所带电荷极性相反的电极方向移动。 些带电分子会向着与其所带电荷极性相反的电极方向移动。 电泳技术就是利用在电场的作用下， 电泳技术就是利用在电场的作用下，由于待分离样品中各种分子 带电性质以及分子本身大小、形状等性质的差异，使带电分子产生不 带电性质以及分子本身大小、形状等性质的差异， 同的迁移速度，从而对样品进行分离、鉴定或提纯的技术。 同的迁移速度，从而对样品进行分离、鉴定或提纯的技术。 为了更好的了解带电分子在电泳过程中是如何被分离的， 为了更好的了解带电分子在电泳过程中是如何被分离的，下面简 单介绍一下电泳的基本原理。 单介绍一下电泳的基本原理。

课件

3.1.1 电泳技术总论在两个平行电极上加一定的电压(V), 在两个平行电极上加一定的电压 ，就会在电极中间产生 电场强度(E): 电场 …… 此处隐藏：3587字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……