姓名：郭沈杰 年级专业：2012级生物科学 同组者：蔡萍萍 学号：12050011012

实验六 维生素C的定量测定（2，6-二氯酚靛酚滴定法）

一、实验目的

掌握2，6-二氯酚靛酚法测定维生素C的原理和方法。

二、实验原理

维生素C又称抗坏血酸（ascorbic acid）。在1928年，从牛的肾上腺皮质中提取出的结

晶物质，证明对治疗和预防坏血病有特殊功效，因此称为抗坏血酸。

还原型抗坏血酸能还原染料2，6-二氯酚靛酚钠盐。本身则氧化成脱氢抗坏血酸。在酸性溶液中，2，6-二氯酚靛酚呈红色，被还原后变为无色。

因此可用2，6-二氯酚靛酚滴定样品中的还原型抗坏血酸。当抗坏血酸全部被氧化后，稍多加一些染料，使滴定液呈淡红色，即为终点。若无其它杂质干扰，样品提取液所还原的标准染料量与样品中所含的还原型抗坏血酸量呈正比。

三、实验仪器

1、新鲜水果 2、电子分析天平 3、吸管 4、容量瓶 5、滴定装置

6、锥形瓶 7、研钵 8、漏斗

四、实验试剂

1、2%草酸溶液：草酸2g，溶于100ml蒸馏水。 2、1%草酸溶液：草酸1g，溶于100ml蒸馏水。

3、标准维生素C液：准确称取10.0mg维生素C，溶于1%草酸溶液，并稀释至100ml，贮于棕色瓶中，冷藏，最好临用时配制。此溶液浓度0.1mg/ml.

4、0.1%2，6-二氯酚靛酚溶液：称取500mg2，6-二氯靛酚溶于300ml含有104mg碳酸氢钠的热水中，冷却，加蒸馏水并稀释至500ml，滤去不溶物，贮于棕色瓶中，冷藏。每次临用时，以标准抗坏血酸液标定。

五、实验步骤

（一）样品中抗坏血酸的提取：

1、将水果用水洗干净，用滤纸吸取表面水分。

2、称取5.0g，加2%草酸试剂10ml置研钵中研成浆状。

3、称取浆状物5.0g，倒入50ml容量瓶中，用2%草酸溶液稀释并定容，混匀，静止10分钟，过滤（最初数毫升滤液弃去），滤液备用。 （二）滴定：

1、标准液的滴定：准确吸取标准抗坏血酸溶液1.0ml于100ml锥形瓶中，加9ml1%草酸溶液，用2，6-二氯靛酚滴定至淡红色。滴定终点要保持15秒钟。用所用2，6-二氯靛酚的体积算出1ml染料相当于多少毫克抗坏血酸。

2、样品液的滴定：准确吸取滤液两份，每份10ml，分别放入两个100ml锥形瓶中，滴定方法同上。 注意事项：

1、滴定过程宜迅速，一般不超过2min。

2、滴定所用染料一般不应少于1ml或多于4ml，如果样品中含抗坏血酸太高或太低时，可酌量增减样液。

3、研磨时要尽量研磨成浆状物。

六、实验结果

将新鲜水果捣成浆状

滴定前稀释：

实验结果计算：

1、按下式计算100样品中含抗血酸的毫克数

m=V*T/W*100 2、V=滴定时所用染料数

3、T=每毫升染料氧化抗血酸质量 T=1mg

4、W=10ml样液相当于含样品的质量数

W 5g

5g10ml1000

1000 mg

5g 10ml 1g/ml50ml3

5、计算100mg样品中含抗坏血酸的毫克数：

m

V T0.453ml 1mg/ml

100 100mg 0.1359mg

1000W

mg3

七、实验分析

（1）本实验为定量实验，采用滴定的方法，用染料2，6-二氯酚靛酚钠盐滴定含有维生素C的样液。维生素C能够还原染料2，6-二氯酚靛酚钠盐，且染料2，6-二氯酚靛酚钠盐在酸性环境中显红色，还原后无色。这样到达滴定终点时，染料2，6-二氯酚靛酚钠盐恰好反应完全，在多加一滴，就会显红色。因此，当溶液稍显红色且不退色时，即到达滴定终点。 （2）在实验过程中，存在许多导致实验误差的地方。 一是研磨时，如果研磨不充分，会产生实验误差。

二是浆液的称量和转移，由于转移时部分液体会留在研钵中，会产生实验误差。 三是过滤时，由于研磨不充分，会有许多固体沉淀物中的维生素C未被提取出来，这些沉淀将会留在滤纸上，会有一部分维生素C损失掉，此外算得的W值中未将滤纸上残存的样品除去，使得算出的W值偏大。

四是滴定时，需要一滴一滴进行滴定，且要边滴边摇锥形瓶，滴定终点需要仔细判别，但也存在滴定过量和不足（变红后没有继续保持，停止滴定，过一段时间后红色消失，没有到达实验终点）的情况，会产生实验误差。

此为还有因滴定时间和染料用量的多少产生的误差。

八、实验思考

1.注意事项：

①2，6-二氯酚靛酚钠盐溶液要节约使用。多余的，洁净的要回收。 ②此滴定管为微量滴定管，最大刻度为2ml。 ③滴定过程宜迅速，最好不要超过2min

2. 2,6-二氯酚靛酚滴定法测定Vc含量的优缺点?

答：2,6-二氯酚靛酚滴定法简单易行，但药品价格昂贵。同时，由于许多瓜果都含有花青素、叶绿素等色素物质，其某些瓜果Vc提取液若有较深颜色，则可导致使用2,6-二氯酚靛酚滴定法测Vc含量时滴定终点不易辨认，因此2,6-二氯酚靛酚滴定法适宜滴定柑橘、苹果等花青素含量较低的果品。 3.此实验测定误差的可能来源?

答：滴定终点的判定；Vc在提取过程中的氧化分解；提取液中含有的其他色素或物质对标定有影响等。