灰枣离体叶片高效再生体系建立的研究

时间：2025-03-09

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河南农业大学

硕士学位论文

灰枣离体叶片高效再生体系建立的研究

姓名：喻晓敏

申请学位级别：硕士

专业：森林培育

指导教师：冯建灿

20090601

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｝ｉ，ｆ南农业人学２００９届硕：￡学位论文摘要

摘要

枣（ＺｉｚｙｐｈｕｓｊｕｊｕｂａＭｉｌｌ．）为鼠李科枣属植物，是我国第一大干果树种和最具代表性的民族果树之一。灰枣耐干旱、瘠薄和盐碱，抗干热风，结果早，是优良的鲜食和制干兼川型品种，但其也存在病虫害严重，落花落果严重等缺陷。离体叶片再生技术是果树细胞水平的诱变育种、变异筛选、嵌合体分离及基冈转移等方面的基础，目前已有氏勤小枣、沾化冬枣、骏枣、毛叶枣等十儿个品种的枣叶片再生体系建立成功，但朱见有关灰枣离体叶片再生体系建立的报道。

本论文以灰枣为试材，分别通过愈伤组织分化不定芽、直接再生不定芽、不定根分化不定芽三种途径，研究各种冈素如外植体条件、基本培养基类型、激素种类和浓度、光照条件、添加物等对灰枣不定芽再生过程的影响，优化箨种条件，以期建立一个适合灰枣的高效、稳定再生体系。主要实验结论如下：

（１）灰枣叶片愈伤组织的诱导宜选择组培苗叶片为外植体；苗笨中部叶片的愈伤组织诱导率高于苇顶部和．卜．部的叶片愈伤组织诱导率，以第３．５片深绿色，平展，人而厚的ｎＩ‘片为佳；接种前不伤叶缘、乖直于主脉横切３．５刀，与纵切和不切相比，愈伤组织诱导率可提高剑６５．４４％；接种方向对叶片愈伤组织的诱导影响不显并；暗培养可加速愈伤组织发生进徉，适宜的暗培养时间为１４ｄ。叶片愈伤组织诱导的最适培养基为１／２ＭＳ附加６－ＢＡ０．５ｍＩｇ／ｕ，２，４－Ｄ２．０ｍ∥Ｌ，ＡｇＮ０３Ｏ．５ｍｇ／Ｌ，愈伤组织诱导率可达到９６．６７％。由叶片诱导的愈伤组织，只有黄绿色，致密的愈伤组织在分化培养基上培养３代（５周转接一次，为一代）后才可分化出芽，将其切成０．５ｃｍ２人小接种’丁分化培养基，在ＭＳ附加６－ＢＡ３．０ｍｇ／Ｌ和ＩＢＡ０．２ｍｇ／Ｌ培养基上分化率为１３．７７％，且一个愈伤组织块上只能分化出一个芽；在ＭＳ附加ＺＴ２．０ｍ∥Ｌ和ＩＢＡ０．１ｍ∥Ｌ培养基上能分化山丛生芽，分化率可达３７．３４％。

（２）ｒｒＩ’片直接再生不定芽的最适培养基为ＷＰＭ＋ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ＋ＴＤＺ０．５ｍｇ／Ｌ；最佳外植体为灰枣组培苗中部平展，火而厚ｎ１‘片；不定芽多在近叶柄处发生，再生率比近叶尖处高５９．７４％；以近轴面接触培养基接种较以远轴面接触培养基接种的再生率高１６．８ｌ％；提高蔗糖浓度到４０９／Ｌ可降低再生芽的玻璃化程度；适当时间的暗培养可以提高灰枣叶片再生能力，以１０ｄ的暗培养处理最佳；添加ＡｇＮ０３０．５ｍｇ／Ｌ叶片再生率可提高剑８２．２５％，平均每叶片再生芽数为２．６４个。

（３）灰枣组培苗叶片不定根诱导的最佳培养基为Ｉ／２ＭＳ附加ＮＡＡ０．３ｍｇ／ｅ和ＩＢＡ２．０ｍｇ／Ｌ，诱导率为９２．９５％，诱导的不定根乳白色，粗壮。将不定根切成０．５ｃｍ的小段接种ｙ－ＷＰＭ附加ＴＤＺＩ．０ｍｇ／Ｌ和ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ的分化培养基上，分化率可达４４．５１％，平均每不定根再生芽数２．０８个。．２．

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河南农业人学２００９屈顾Ｊｊ学位论文摘要

（４）将分别通过愈伤组织再生、直接再生和不定根再生三种途径诱导的不定芽接种剑继代增殖培养基ＭＳ＋６－ＢＡ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ０．５ｍｇ／Ｌ，培养至３５ｄ，增殖系数为３．０６。

（５）将继代增殖的再生曲．切成２ｃｍ左右的拳段接种在生根壮苗培养基上诱导生根，最佳的生根培养基为１／２ＭＳ＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ，培养４０ｄ的生根率达９５．５６％，再生茸基部仅有极少量的愈伤组织产生，发生的根粗壮，质鲑较好。

关键词灰枣，叶片，不定芽，离体再生．３．

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河南农业人学２００９届硕ｌ：学位论义英文摘要Ｓｔｕｄｙｏｎｔｈｅｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔｏｆｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｆｏｒｉｎｖｉｔｒｏｌｅａｖｅｓｏｆ

Ｚｉｚｙｐｈｕｓｊｕｊｕｂａ‘Ｈｕｉｚａｏ’

Ｓｕｐｅｒｖｉｓｏｒ：Ｐｒｏｆ．ＦｅｎｇＪｉａｎｃａｎ

ＭａｓｔｅｒＣａｎｄｉｄａｔｅ：ＹｕＸｉａｏｍｉｎ

ＡＢＳＴＲＡＣＴＪｕｊｕｂｅ（ＺｉｚｙｐｈｕｓｊｕｊｕｂａＭｉｌｌ．）ｉｓ

ａｏｎｅｏｆｔｈｅｍｏｓｔｉｍｐｏｒｔａｎｔａｎｄｉｎＣｈｉｎａｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅｆｒｕｉｔｔｒｅｅｓｉｎＣｈｉｎａ．‘Ｈｕｉｚａｏ’ｉｓｃｕｌｔｉｖａｔｅｄｖａｒｉｅｔｙｏｆｊｕｊｕｂｅ