葎草多糖的提取分离及组成性质研究_屠婕红

第31卷第8期2008年8月

Vo.l31No.8Aug.2008

北京中医药大学学报

JournalofBeijingUniversityofTraditionalChineseMedicine

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葎草多糖的提取分离及组成性质研究

屠婕红 陈伟光 盛 静 敖 雷(浙江省嘉兴学院医学院 浙江314001)

*

摘要:目的 从葎草中提取分离多糖成分,并研究其组成性质和分子量。方法 经水提醇沉、脱蛋白后的粗多糖,采用SephadexG-100和SepharoseCL-4B柱色谱分离及纯度鉴定,薄层色谱法和气相色谱法测定多糖组成,凝胶色谱法测定相对分子质量。结果 从葎草水溶性多糖提取物中分离得到3种均一多糖(HSP-1、HSP-2、HSP-3),其中HSP-1的单糖组成为核糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖,它们的摩尔比为0.35 0.32 0.13 0.13 0.29 1.00,HSP-1的平均分子质量为4.3 10。结论 HSP-1为葎草多糖的主要成分,首次从葎草全草中提取获得。关键词:葎草;多糖;提取分离;组成性质;薄层色谱;气相色谱中图分类号:R284.2

4

Extraction,separation,

*

fromHumulusscandens

compositionandpropertiesofpolysaccharide

TUJie-hong,CHENWe-iguang,SHENGJing,AOLei(MedicalSchoo,lJiaxingCollege,Zhejiang 314001)

Abstract:Objective ToextractandseparatethecompositionofpolysaccharidefromHumulusscandens,andstudyitscomposition,propertiesandmolecularweight.Methods Thecrudepolysaccharide,afterthewaterextracting-alcoholprecipitationanddeproteinization,wasseparatedandpurifiedbyusingthechromatographiccolumnsofSephadexG-100andSepharoseCL-4Brespectively.Thecomponentsofpolysaccharideweredeterminedbyusingthinlayerchromatography(TLC)andgaschromatography(GC).Therelativemolecularweightofpolysaccharidewasdeterminedbyusinggelchromatography.Results Therewere3kindsofhomogeneouspolysaccharides(HSP-1,

HSP-2andHSP-3)

separatedfromtheextractofwatersoluble

polysaccharideofHumulusscandens,amongwhichthemonosaccharideofHSP-1consistedofribose,arabinose,xylose,mannose,glucoseandgalactosewiththemolarratiobeing0.35 0.32 0.13

4

0.13 0.29 1.00.TheaveragemolecularweightofHSP-1was4.3 10.Conclusion HSP-1isthemaincomponentofpolysaccharideofHumulusscandens,whichisextractedfromwholeHumulusscandensforthefirsttime.Keywords:Humulusscandens;polysaccharide;extractionandseparation;componentsandproperties;thinlayerchromatography;gaschromatography 葎草又名拉拉秧,为桑科植物葎草Humulusscandens(Lour.)Merr.的干燥全草,具有清热解毒、利尿消瘀等功效,它资源丰富,生命力旺盛,在我国南北各地均有分布和生长,是农田和园林绿化中

[1]

的重要杂草,可能含有抗衰老成分,若能合理开发利用,将会变废为宝。针对葎草活性成分的研究少有文献报道,而多糖又是中药中抗衰老、增强免疫力的主要活性成分,本文对葎草中水溶性多糖成分进行

屠婕红,女,副教授

*嘉兴市科技局基金资助项目(No.2005AY3042)

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了提取分离,并对其主要多糖成分的组成性质作了分析研究,为进一步开发利用葎草多糖奠定了基础。1 材料1.1 仪器

气相色谱仪(岛津14C型,日本岛津公司),紫外分光光度计(UV-2401PC,日本岛津公司),自动收集仪(BSZ-100,上海沪西分析仪器厂),离心机(0412-1,上海手术器械厂),中药粉碎机(RT-08,上海淀久中药机械制造有限公司),旋转蒸发仪(RE-52AA,上海医疗器械厂),真空干燥器(DZF-1B型,上海跃进医疗器械厂),自动旋光仪(WBE-2A,上海精密科学仪器有限公司),电子分析天平(BC-210S,北京赛多利斯仪器有限公司),黏度计(NDJ-9S,上海精密仪器仪表有限公司),高效薄层色谱硅胶预制板(天津药典标准仪器厂)。

1.2 药材与试剂

实验用葎草Humulusscandens(Lour.)Merr.采自浙江省嘉兴学院梁林校区内,由嘉兴学院生药教研室陈伟光副教授鉴定,全草于阴凉处用风扇吹干,粉碎过40目筛备用。SephadexG-100,SepharoseCL-4B,葡聚糖标准品(DextranT-500、T-70、T-40、T-10)和蓝色葡聚糖2000均为Pharmacia公司产品;核糖等7种单糖对照品(进口分装,上海化学试剂公司);其他试剂均为国产分析纯。2 方法

2.1 多糖提取的正交试验

称取葎草干燥粉末10g,用95%乙醇浸泡脱脂,药渣以蒸馏水为提取溶剂,分别以提取时间(A)、提取温度(B)、提取次数(C)和液固比(D)为影响因素,按L9(3)正交设计方案进行试验。提取完成后进行过滤,合并滤液,60 减压浓缩至原来体积的1/4,浓缩液加4倍量的乙醇,冰箱放置24h,抽滤,收集多糖沉淀,减压干燥,计算提取率。每一试验平行操作2次,取平均值进行正交试验结果分析,找出最佳提取条件。见表1。

表1 L9(34)正交设计因素水平表

水平12

3

因素

A/h0.51.01.5

B/ 708090

C/次123

D/倍51015

4

按正交法确定的最佳工艺条件进行葎草多糖提取的

[2]

放大实验,得到的提取溶液,用Sevag法去蛋白,离心除去胶状沉淀(重复8次),至紫外测定在260、280nm处无蛋白质和核酸吸收峰,上清液对蒸馏水透析2d,60 减压浓缩至原来体积的1/4,浓缩液加4倍量95%乙醇使多糖沉淀析出,抽滤,沉淀用无水乙醇、丙酮反复洗涤,减压干燥,得葎草粗多糖(PolysaccharideofHumulusscandens,HSP)。称取上述葎草多糖100mg,加蒸馏水溶解,上SephadexG-100柱(2.5cm 60cm)进行色谱分离,蒸馏水洗脱,控制流速0.25mL/min,自动部分收集器5mL/管收

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集,以改良的硫酸-苯酚法跟踪检测,根据洗脱曲线收集、合并含糖部分,浓缩,减压干燥,即得。2.3 纯度鉴定

在凝胶色谱柱SepharoseCL-4B(2.5cm 60cm)上,以 …… 此处隐藏：5014字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……