（六）利用重组大肠杆菌生产人胰岛素 基因工程 法的战略：

A链和B链分别表达法

人胰岛素原表达法

A链和B链同时表达法

分泌型表达法

1）A链和B链分别表达法：

基因工程菌的构建战略：化学合成 A链和B链基因

表达产物的后处理：分离纯化 Cys体外氧化和重折叠

生产技术评价：

A链和B链上共存在6个Cys残基，体外二硫键的正确配对率低，仅10-20%，成本高达$100/g以上。

2）人胰岛素原表达法：

基因工程菌的构建战略：

重组人胰岛素原表达产物的后处理：

B链中第 22位的 Arg由于良好折叠的原因，对胰蛋白酶不敏感。

生产技术评价：

工艺比A、B链分别表达法繁琐，要使用两种高纯度的酶制剂。

但由于C肽的存在，胰岛素原能形成良好的空间构象，3对二硫键的正确配对率高，达80%以上，生产成本仅$50/g。

3）A链和B链同时表达法：

化学合成A、B链编码序列特异性裂解

体外折叠

重组人胰岛素

上述三种基因工程菌的构建均采用胰岛素或胰岛素原编码序列与E.coli的?-半乳糖苷酶(?-Gal) 基因拼接的方法。

产生的融合型重组蛋白表达率高、稳定性强，但不能分泌，以包涵体形式存在于胞质中。

4）分泌型表达法：

-內酰胺酶能被E.coli分泌到胞外，将胰岛素或胰岛素原编码序列与?-內酰胺酶基因拼接，获得的工程菌可高效稳定表达分泌型融合蛋白，为后续分离纯化减少了工序。 目前主要采用人胰岛素原表达法生产人胰岛素。