家畜繁殖学实验、实习指导

发布时间：2024-10-23

第一部分实验指导实验一公畜母畜生殖器官观察;实验二公畜睾丸、母畜卵巢组织学及精子发生、卵泡发育过程的观察;实验三人工授精器械的认识与假阴道的安装;实验四精液品质的肉眼检查及精子活率评定;实验五精子密度测定;实验六精子形态和畸形率的测定;实验七精子顶体染色观察;实验八稀释液配制及精液稀释;实验九家畜精液的冷冻;实验十卵母细胞的采集;实验十一 ;实验十三哺乳动物胚胎玻璃化冷冻保存.

《家畜繁殖学》实验实习指导

娜仁花李英张家新余凤玲

内蒙古农业大学自编教材

第一部分实验指导

实验一公畜母畜生殖器官观察

一、目的要求

认识各种公畜母畜生殖器官的位置、形态、大小及解剖结构特点，为更好地应用繁殖技术奠定解剖学基础。

二、材料和方法

（一）材料牛、羊、猪生殖器官各4套

（二）器械大搪瓷盘，解剖刀，剪刀，镊子，金属探针

三、内容和步骤

（一）公畜生殖器官的观察

公畜生殖器官包括：睾丸（及阴囊和精索）、附睾、输精管、尿生殖道、副性腺及阴茎。

1．睾丸家畜睾丸成对，分别位于阴囊的两个腔内，其形状均为长卵圆形。一侧有附睾附着，叫附睾缘，另一侧为游离缘。随畜种不同大小有差别。牛、羊、猪的睾丸相对比较大，以羊的睾丸为最大。马（驴）阴囊位于两股之间的腹股沟区，睾丸长轴与地面平行，附睾位于睾丸的背外缘，附睾头在前、尾在后。牛、羊阴囊较马阴囊稍靠前，位于前腹股沟区，睾丸长轴与地面垂直，附睾位于睾丸的后侧，附睾头在上尾在下。猪的阴囊位于股部之后，睾丸长轴倾斜，前低后高，附睾位于睾丸的前上缘，附睾头在前下方尾在后上方。

2．附睾位于睾丸的附着缘，分头、体、尾三部分。头膨大，由睾丸输出管相连结，睾丸输出管汇合成一条较粗而长的附睾管盘曲成附睾体和附睾尾，最后过渡为输精管。

3．精索、输精管输精管由附睾管延续而来，而后进入由睾丸系膜、血管、淋巴管、神经、睾内体提肌共同组成的精索（成锐三角形）。沿腹股沟管进入腹腔，此后即和精索内的其它部分分开，单独向后上方进入骨盆腔至膀胱背面，两侧输精管都进入尿生殖皱襞内，在此处输精管变粗，形成输精管壶腹。马（尤其是驴）的输精管壶腹发达；猪的输精管壶腹不明显；牛、羊的输精管壶腹比较明显，粗细介于马和猪之间。输精管壶腹部的实质为分支管状腺体组织，有分泌物排出。

4．副性腺

（1）精囊腺成对位于膀胱颈背面的两旁，输精管末端的两侧。与同侧的输精管形成射精管共同开口于尿生殖起始部的精阜上。马的精囊腺呈梨形囊状，向后缩小成输出管。牛、羊、猪的精囊腺都是由致密的分叶腺体组织构成，牛、羊的精囊腺比马的小，而猪的精囊腺特别发达。

（2）前列腺位于膀胱尿道开始处精囊腺之后。马的前列腺由两个侧叶和一个峡部所构成，形似蝴蝶的复管状腺，有许多排出管开口于精阜的两旁。牛和猪的前列腺分为体部和扩散部两部分。体部位于膀胱颈与骨盆尿道交界处，牛的为棱形，猪的为纽扣形。猪的体部小，而扩散部很大，包在骨盆尿道部尿道粘膜外面尿道海绵体肌间，由体部向后延伸而来，其腺管成行开口于尿生殖道内。羊的前列腺最不发达，仅有扩散部，而且为尿道肌所包围，外观看不到。

（3）尿道球腺成对位于尿生殖道骨盆部出口的外侧两旁，各有一个排出管（马有7~8个）开口于尿道内。猪的尿道球腺最为发达，为圆柱状，上面覆盖的尿道球肌很薄，所以能看出它的分叶。马的尿道球腺比猪的小，牛、羊的最小，均成球状，上面覆盖的尿道球肌较厚。

5．尿生殖道、精阜尿生殖道是公畜尿和精液排出的共同管道。可分为骨盆部和阴茎部，以坐骨弓为界，在交界处管腔变窄，形成尿道峡部。阴茎部位于阴茎海绵体腹面的尿道沟内。在尿生殖道骨盆部的腹面正中线上作纵行切口，可以看到起始部尿道上壁有一圆形隆起的精阜，上有射精孔，是输精管和精囊腺的输出管共同形成的开口。前列腺的开口在其两侧，尿道球腺开口在其后。

6．阴茎阴茎由阴茎根、阴茎体和龟头组成。阴茎借助于两个阴茎脚固定于坐骨弓，从这里开始，在两股之间沿着下腹壁走向脐部，龟头位于其末端。阴茎由两个阴茎海绵体和腹面的尿道海绵体组成，为阴茎的勃起组织。马的阴茎长而粗大呈扁圆柱状，龟头膨大，其前下侧有一龟头窝，内有尿道突。牛的阴茎在阴囊之后形成“S”形弯曲，并由阴茎伸缩肌固定于阴茎根上，交配时伸直。龟头上下较扁且前端有些扭转。羊的阴茎与牛的相似，但比牛的细小，尿道突细长，呈蚯蚓状，绵羊的较长，山羊的较短，猪的“S”状弯曲在阴囊之前，其龟头呈螺旋状，上有一包皮盲囊。

（二）母畜生殖器官的观察

母畜的生殖器官包括：内生殖器官包括卵巢、输卵管、子宫、阴道和外生殖器官包括尿生殖前庭、阴唇和阴蒂。内生殖器官位于腹腔和骨盆腔内，上面为小结肠和直肠，下面为膀

胱。前下方为小结肠和大结肠。牛的左前侧为瘤胃，马的右前侧为盲肠。子宫颈以前的内生殖器官，靠子宫韧带连到腹腔背侧。子宫颈以后的各部分，靠结缔组织及脂肪固定在骨盆腔侧壁上。

1．卵巢家畜的卵巢由卵巢系膜悬吊在腹腔的腰部、肾的后方。

马：卵巢似蚕豆形或肾形，附着缘宽大，游离缘内陷形成排卵窝。根据发情周期的不同时期，卵巢的直径大小为3~7 cm不等。由于卵泡发育，卵巢的外形也随之改变，带有黄体的卵巢体积虽然增大，但外形变化不明显。卵泡排卵后，首先形成红体（血凝块），在黄体组织初形成时，呈皱襞状包着红体。然后在黄体的形成过程中，红体逐渐被吸收。老黄体的体积缩小，一端指向排卵窝。

牛：卵巢位于两侧子宫角尖端的外侧下方，耻骨前缘附近。其形状为卵圆形，比马的卵巢小（约12~16 g），中等大的母牛，卵巢平均长2~3 cm，宽1.5~2 cm，厚1~1.5 cm。排卵后多不形成红体，黄体往往凸出于卵巢表面。

羊：卵巢位于两侧子宫角尖端的外侧下方，耻骨前缘附近，形状比牛的圆而小，长1~1.5 cm，宽、厚各0.8~1.0 cm。

猪：有发达的卵巢囊，卵巢和输卵管有时包在卵巢囊内。卵巢体积和形状随着母体的成熟程度而有不同。初生仔猪卵巢形似肾脏，一般是左侧稍大，约5 mm×4 mm，右侧为3 mm×4 mm；在接近性成熟时，由于卵巢上许多的小卵泡，体积增大成2 cm×1.5 cm，形状好似桑椹；达到性成熟时，卵巢上有许多大卵泡、红体及黄体，很象一串葡萄，此时卵巢体积最大。

2．输卵管成对的弯曲管道，从卵巢附近开始延伸到子宫角尖端。输卵管的前1/3段较粗，称输卵管壶腹，是精子和卵子结合受精的部位；后2/3段变细，称为输卵管峡部。两者的连接部称为壶峡连接部。输卵管的子宫端和子宫角尖端相连接，成为宫管连接部。

马：输卵管有许多弯曲，腹腔端扩大呈漏斗状，其边缘不整齐，形成许多皱襞，称为输卵管伞，伞附着在卵巢的排卵窝旁边。卵巢囊比较发达，宫管连接部界限明显。

牛、羊：输卵管弯曲较少，伞部不发达，由于子宫角尖端细，所以输卵管和子宫角之间的界限不明显。

猪：输卵管有许多小弯曲，伞部比较大。其开口接近卵巢囊的底部。输卵管和子宫角之间界限明显。

3．子宫大部分位于腹腔，少部分位于骨盆腔，前接输卵管，后接阴道，借助于子宫阔

韧带悬于腰下。各种家畜的子宫都分为子宫角、子宫体、子宫颈三部分。也可分为两种类型：牛羊子宫角基部之间有一纵隔，将两角分开，称为分子宫；马无此隔，猪也不明显，均称为双角子宫。子宫角有大小两个弯，大弯游离，小弯供子宫阔韧带附着。

马：子宫角呈扁圆筒状。子宫角小弯在上，大弯在下，小弯上的浆膜和子宫阔韧带相连接。子宫体前端与两个子宫角交界处为子宫底。马的子宫体较其它家畜的发达。子宫粘膜上有大量纵行皱褶，充塞于子宫腔。子宫颈前接子宫体，子宫颈外口突出于阴道腔2~4 cm，构成明显的子宫颈阴道部。马的子宫颈比牛短而细，壁也较薄较软。子宫颈管的粘膜形成许多高低不等的纵形皱襞。子宫颈通常是自然关闭的，但收缩不紧，可容一指伸入，发情时开放很大。

牛、羊：子宫角弯区如绵羊角，位于骨盆腔内。经产多次的，子宫并不能完全恢复原来的形状和大小，所以经产母牛的子宫常垂入腹腔。子宫粘膜上有突起的子宫阜（成为怀孕牛、羊母体胎盘），阜上没有子宫腺，但其深部富含血管。牛和羊的子宫阜不同之点在于羊的子宫阜的中央有一凹陷。牛、羊的子宫体均比较短。牛、羊的子宫颈肌肉层发达，质地较马的坚硬，在牛的直肠检查时很容易摸到。牛的子宫颈管道内不仅有纵形皱襞，而且还有大而横行的皱襞，羊的这种皱襞更明显。不发情时管壁封闭很紧，发情时也只是稍微开放。牛子宫颈阴道部粗大粘膜有放射状皱襞，经产牛的皱襞有时肥大呈菜花状。羊子宫颈阴道部仅为上下二片或三片突出。

猪：子宫角形成很多弯曲，很似小肠。子宫体不明显，子宫粘膜也形成皱襞，充塞于子宫腔。子宫颈管内粘膜有两排交错的半圆形突起，呈连续性的放射状，中间的较大，两端的较小。子宫颈的前方与子宫体、后方与阴道均没有明显的界限，而是逐渐地过渡，因此没有子宫颈阴道部，人工授精时输精管很容易插入。

4．阴道为母畜的交配器官，又是胎儿娩出的通道。其背侧为直肠，腹侧为膀胱和尿道。阴道腔为扁平的缝隙，前端子宫颈阴道部突入其中，后端和尿生殖前庭之间以尿道外口、阴瓣为界。马的阴道长15~35 cm，牛的阴道长22~28 cm，猪的阴道长10 cm、羊约8～14 cm。阴道粘膜层为复层扁平上皮细胞，发情时发生角质化，无腺体。子宫颈阴道部周围的阴道腔称为阴道穹隆，其中猪无阴道穹隆。牛、羊交配时，精液射到阴道穹隆附近；马、猪精液则射到子宫颈或子宫内。

5．外生殖器官包括尿生殖前庭、阴唇和阴蒂。

（1）尿生殖前庭是指从阴瓣到阴门裂的部分。前庭两侧壁的粘膜下层有前庭大腺，发

情时分泌增强。

（2）阴唇、阴蒂：阴唇分左右两片而构成阴门，两片阴唇的上端及下端联合起来形成阴门上角和下角。马的阴门上角较尖，阴门下角较圆；牛、羊及猪的阴门相反，下角较尖，呈锐角，且垂至坐骨弓的下面。在阴门下角内包含有球形凸起物即阴蒂，由勃起组织（海绵体）构成，有丰富的感觉神经分布。阴蒂与雄性龟头同源。

6．子宫动脉（子宫中动脉）牛的子宫动脉位于岬部之前、最后腰椎处，与脐动脉共同起源于髂内动脉，沿子宫阔韧带走向子宫角小弯进入子宫。马的子宫动脉起于髂内动脉之前的髂外动脉，或者与髂外动脉共同起于腹主动脉，它沿子宫阔韧带的中部行走，到达子宫角小弯而进入子宫。子宫动脉向前与卵巢动脉子宫支，向后与尿生殖动脉子宫支吻合。

四、实验报告

通过观察和比较说明牛羊猪公、母生殖器官的形态、大小、相互关系和大体构造以及在活体上的位置有何特点。

实验二公畜睾丸、母畜卵巢组织学及精子发生、卵泡发育过程的观察

一、目的要求

通过观察家畜睾丸和卵巢组织切片，了解家畜睾丸、卵巢的组织结构及其形态。掌握精子的发生和卵子的发生、卵泡的发育过程及其形态，为学习家畜繁殖学及更好地掌握和应用繁殖技术奠定组织学基础。

二、材料和方法

（一）材料公畜睾丸，母畜卵巢组织切片及挂图

（二）器械显微镜

三、内容和步骤

（一）公畜睾丸的组织学观察

教师先结合挂图进行讲解，使学生对公畜睾丸、母畜卵巢组织学结构及精子发生、卵泡发育过程有了初步的了解。然后再用显微镜观察睾丸、卵巢组织切片。

1．低倍镜观察

（1）被膜由浆膜和白膜构成。外层浆膜为一较薄的固有鞘膜，其下为致密弹性结缔组

织构成的白膜，其中富有血管。白膜下为实质部分，即睾丸的功能层。内层白膜

（2）睾丸纵隔和中隔睾丸纵隔是白膜由睾丸的一端伸向睾丸实质的结缔组织索。睾丸中隔是纵隔向四周发出许多放射状的结缔组织小梁伸向白膜构成。

（3）睾丸小叶睾丸中隔将睾丸实质分成许多小叶，小叶的尖端朝向中央，小叶的基部朝向睾丸的表面。每个小叶由2~3条盘曲的曲精细管及血管和间质细胞组成。曲精细管在各小叶的尖端先各自汇合成直精细管，穿入睾丸纵隔结缔组织内，形成弯曲的导管网，称为睾丸网（马无此结构），为精细管的收集管道。睾丸网又分出12～15条睾丸输出管，汇入附睾头形成附睾管。

2．高倍镜观察

睾丸小叶的结构由曲精细管及其间质细胞构成。此外，还有血管、淋巴管等。

（1）间质细胞体积较大，分布于曲精细管之间，近似卵圆形或多角形，核大而圆。具有分泌雄激素的功能。

（2）曲精细管的结构曲精细管的管壁自外向内由同心圆状排列的结缔组织、基膜和复层生殖上皮构成。生殖上皮细胞主要由足细胞和生精细胞两种细胞构成。

（3）足细胞又称Sertoli细胞、支持细胞、营养细胞。体积较大而细长，数量较少，属体细胞。呈辐射状排列在曲精细管中，分散在各期生殖细胞之间，其底部附着在曲精细管的基膜上，游离端朝向管腔，常有许多精子镶嵌在上面。该细胞高低不等，界限不清，细胞核较大，位于细胞的基部，着色较浅，具有明显的核仁，但不显示分裂现象。由于它的顶端有数个精子伸入胞浆内，故一般认为此种细胞是对生精细胞起着支持、营养、保护等作用。足细胞失去功能，精子便不能成熟。

（4）生精细胞数量比较多，成群的分布在足细胞之间，大致排列成3~7层。根据不同发育阶段的形态特点又可分为：精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精细胞和精子。

①精原细胞位于最基层，紧贴基膜。细胞体积较小，呈圆形，常有分裂现象，是精子生成的干细胞。细胞质比较清亮，细胞核大而圆，富含染色质，因而着色较深。

②初级精母细胞位于精原细胞上面，排成几层，常显示有分裂现象。细胞体积较大，呈圆形，细胞核呈球形，富有染色质，故着色较深。分裂时，因染色体所处不同的活动时期而呈线状、棒状或粒状。在最初阶段与精原细胞不易区别。随着细胞离开基膜向管腔移动，同时胞浆不断增多，胞体不断变大，具有明显的胞核。

③次级精母细胞位于初级精母细胞的内侧，体积较小，细胞呈圆形。细胞核为球形，

染色质细粒状。由于该细胞很快分裂为两个精子细胞，因而在切片上很难找到它。

④精子细胞位于次级精母细胞内侧，靠近曲精细管的管腔，常排列成数层。并且多密集在足细胞游离端的周围，细胞体积更小，胞浆少，核呈球形，着色深。

⑤精子位于或靠近曲精细管的管腔内。有明显的头和尾，呈蝌蚪状。头部含有核物质，染色很深，常深入足细胞的顶部胞浆中。尾部朝向管腔。精子发育成熟后脱离曲精细管的管壁，游离在管腔中，随后进入附睾。精子是一种独特的细胞，不含细胞质。成熟后还有前进运动的能力。

3．精子发生过程精子发生过程可分为明显的两个时期。第一时期，精原细胞经一系列分裂形成精子细胞。第二时期，精子细胞变形成为精子。精子发生整个过程的完成需要近两个月的时间。

（二）母畜卵巢的组织学观察

1．低倍镜观察

在低倍镜下找出卵巢表面上皮和白膜，区分卵巢的皮质部和髓质部。

（1）表面上皮位于卵巢皮质的最外层，在幼年家畜为单层柱状或立方上皮细胞所组成，随着年龄增大，这些细胞变成扁平细胞。马卵巢表面上皮仅分布于排卵窝。其余部分被浆膜覆盖。

（2）白膜位于表面上皮之下的一薄层致密结缔组织。

（3）皮质部位于白膜下面、卵巢的外周部分（马的则位于卵巢中央靠近排卵窝处）。由许多大小不等的发育卵泡和闭锁卵泡、少量黄体以及较致密的结缔组织所构成。占卵巢的大部分，与髓质无明显界限。由于皮质部含有卵泡和产生卵巢激素的细胞，故也称“功能层”。

（4）髓质部位于卵巢中央（马则在卵巢周围）。内含有许多细小的血管、神经和富有弹性纤维的疏松结缔组织。

2．高倍镜观察

（1）卵泡发育的观察

每个卵泡都由位于中央的卵母细胞和围绕在卵母细胞周围的卵泡细胞所组成。有的卵泡在发育过程中可能退化而形成闭锁卵泡。卵泡可根据发育程度不同而分成下列五期。

①原始卵泡卵原细胞有丝分裂增殖停止，形成初级卵母细胞。初级卵母细胞进入第一次减数分裂不久休止在前期的双线期。初级卵母细胞位于中央，周围包有一层扁平的卵泡（颗粒）细胞。卵母细胞的体积比较大，中央有一圆形的泡状核，核内染色质稀少，着色较浅，

核仁明显。卵泡细胞体积小，核扁圆形，着色深。所有的原始卵泡在出生前就形成了。它处于贮备状态未进入生长。常常在皮质外层外周成群的出现。据估计，一头出生牛犊卵巢中央有大约75 000个原始卵泡。

②初级卵泡初级卵母细胞迅速生长，外有一层立方形的颗粒细胞包围。此时，卵母细胞已有透明带形成，并由卵泡颗粒细胞长出绒毛渗透到透明带内，为卵母细胞提供营养。

③次级卵泡初级卵泡经过发育和生长，即成为次级卵泡。卵母细胞体积基本不变，但外围的卵泡颗粒细胞生长。卵母细胞由多层颗细胞所包围。其外有卵泡膜形成。

④三级卵泡卵泡体积增大。颗粒细胞之间有液体形成并将它们分开形成卵泡腔。小卵泡腔合并成为大卵泡腔。初级卵母细胞逐渐发育增大，胞浆中卵黄颗粒增多。透明带为较均一的厚层蛋白质膜，卵泡细胞层增厚。

⑤成熟卵泡也叫Graafian卵泡。三级卵泡进一步成熟，形成充满卵泡液的水泡，卵泡突出于卵巢表面。卵泡体积很大，卵泡腔扩大。此时初级卵母细胞长大成熟，核呈空泡状，染色质很少，核仁明显。胞浆内富有卵黄颗粒。排卵前即恢复并完成第一次减数分裂，结果形成大小不等的两个细胞，大的细胞为次级卵母细胞，小的叫第一极体。透明带变厚。极体呈卵圆形，位于透明带与次级卵母细胞之间的卵黄周隙，只有核质构成，以后逐渐退化。Graafian卵泡的卵泡壁由几个功能细胞层构成。最外层为有较多纤维细胞层的外膜，向内为内膜层。这两种细胞层由毛细血管网提供血液。外膜与内膜层分界明显，常合称为卵泡膜。内膜增厚，内膜细胞肥大，呈圆形或多角形，类脂质颗粒增多，细胞核为椭圆形。在内膜层下面有一层基膜，将内膜与最内层细胞即颗粒细胞层分开。基膜阻止血管系统进入颗粒细胞层。随着卵泡腔扩大，颗粒细胞层变薄，包围卵泡腔。颗粒细胞排列整齐。有时可见到细胞分裂。

此外，卵丘位于卵泡腔的一侧，卵丘和其它颗粒细胞包裹卵母细胞。与卵母细胞直接接触的颗粒细胞呈辐射状排列，称作放射冠。排卵开始时，放射冠细胞与周围的卵泡壁颗粒细胞之间开始出现裂隙，彼此的联系疏松。

牛、羊、猪的卵泡在排卵前（马排卵后）完成第一次减数分裂，形成次级卵母细胞。随即开始第二次减数分裂，然后休止在中期（M）。受精过程才使第二次减数分裂恢复并完成，结果产生合子（受精卵）及第二极体。因此，牛、羊、猪、马等家畜没有真正的卵子存在。

闭锁卵泡：初级卵泡退化后，一般不留痕迹。但生长卵泡退化时，卵母细胞萎缩，透明带皱缩塌陷，卵泡液被吸收，卵泡壁凹陷，以后结缔组织侵入泡内。

（2）黄体形成过程

排卵后的卵泡转变成富有血管的内分泌器官。牛、羊、猪的黄体位于卵巢皮质浅层突出于表面。马的黄体则完全埋藏在卵巢深部。根据黄体发育阶段而分成下列几期：

①血体期卵泡破裂后，血液流入卵泡腔内，形成血凝块，也叫红体期。

②增生期当破裂卵泡伤口愈合，黄体细胞增生，外观呈黄色。黄体细胞一部分来源于卵泡颗粒细胞，多分布于黄体中心，着色浅，呈多角形，体积较大，胞质出现类脂质颗粒，球形细胞核明显。另一部分来源于内膜细胞，多分布在黄体边缘或颗粒黄体细胞之间，体积小，核及胞质着色较深。

③血管盛开期血管与结缔组织伸入黄体中心，形成花彩状，黄体细胞清晰可见。 ④成熟期黄体增大到最高峰，黄体内各种结构明显。

⑤白体期黄体退化、萎缩，变成白色的痕迹。

四、实验报告

1．绘出并注明睾丸曲精细管及其所含细胞的构造图。

2．绘出并注明卵巢组织结构及卵泡发育各阶段示意图。

实验三人工授精器械的认识与假阴道的安装

一、目的和要求

1．熟悉人工授精所用的采精和输精器械，了解其用途及使用方法。

2．练习安装假阴道。

二、材料和仪器设备

（一）采精器材牛羊猪马的采精用假阴道，牛羊电刺激采精棒，猪手握法采精用的橡胶手套

（二）输精器材牛羊猪马输精器，阴道开张器，额灯和手电筒

（三）辅助器材高压灭菌器，酒精灯，长柄钳，镊子，玻璃棒，棒状温度计

（四）药品灭菌凡士林，75％和95％酒精棉球，滑石粉，来苏儿，洗衣粉

三、方法和步骤

先由老师讲解人工授精器材的构造、各部分名称和用途，并作假阴道安装的示范。然后

学生分组观察并作假阴道的安装练习。

（一）人工授精器材的认识

1．假阴道为长筒状，由外壳、内胎和集精杯（管）三个主要部分组成。其粗细和长短因畜种而异，不同国家不同时期的设计形式也不尽相同。

（1）外壳牛、羊和猪的假阴道外壳一般为硬橡胶或塑料制成的圆筒，中部装有可吹气、注水和排水的开关。猪用假阴道则在此处连接一个可向假阴道内打气的双链球，以调节压力。马的假阴道的外壳由镀锌铁皮或金属制成，分头、颈和体三部分。筒体的中部装有把柄，其侧面有吹气和注水、排水孔，并有封闭塞或橡胶带。

（2）内胎由优质橡胶制成的胶筒，目前有些国家将其内胎面制成粗糙面，以增强采精时对阴茎的刺激，利于采精。

（3）集精杯（管）牛、羊用双层的棕色集精杯（苏式）或有刻度的离心管（美式）。马用黑色橡皮杯（苏式）。猪用棕色有刻度的广口瓶。当用手握法对公猪进行采精时，只需备一只乳胶手套和收集精液的容器即可。集精杯（管）可借橡皮圈直接固定于假阴道的一端或借橡胶漏斗与假阴道连接。

2．输精器苏式牛、羊输精器为一长颈玻璃注射器。目前常用的为金属或塑料制成的输精管，其后连接一个橡皮球。冷冻细管精液输精则使用金属制成的输精枪。对牛羊等家畜的输精需借助阴道开张器和额灯或手电筒照明进行。开张器的种类和大小因畜种而异。

（二）假阴道的准备

1．假阴道外壳及内胎的检查

（1）检查假阴道外壳两端是否光滑，外壳有否裂隙或开焊之处（特别是马用外壳）。

（2）检查内胎是否漏水。可将内胎注满水，用两手握紧两端，并扭转内胎施以压力，观察胎壁有无破损漏水之处，如发现应及时修补或更换。公猪的手握法采精用的乳胶手套在用前也应检查。

2．采精器材的清洗

（1）外壳、内胎、集精杯（管）等用具用后可用热的洗衣粉水清洗。内胎的油污必须洗净。

（2）以清水冲净洗衣粉，待自然干燥后即可使用。

3．内胎的安装将内胎放入外壳，内胎露出外壳两端的部分长短应相等。而后将其翻转在外壳外，内胎应平整，不应扭曲，再以橡皮圈加以固定。

4．消毒先以长柄钳夹取75%的酒精棉球擦拭内胎和集精杯，再以95%的酒精棉球充分擦拭。采精前，最好用稀释液冲洗1~2次。

5．集精杯（管）的的安装牛、羊、猪的集精杯（管）可借助特制的保定套或橡皮漏斗与假阴道连接。

6．注水通过注水孔向假阴道内、外壁之间注入50~55℃温水，使其能在采精时保持38~42℃，注水总量约为内、外壁间容积的1/3~1/2。

7．涂润滑剂用消毒好的玻璃棒，取灭菌凡士林少许，均匀的涂于内胎的表面，涂抹深度为假阴道长度的1/2左右，润滑剂不宜过多、过厚，以免混入精液中，降低精液品质。当用手握法给公猪采精时不须使用润滑剂。

8．调节假阴道内腔的压力从注气孔吹入或打入（猪）空气，根据不同家畜和个体的要求调整内腔压力。方法是用二连充气球由注气孔注气调压，假阴道人口处内胎呈“Y”字型。

9．假阴道内腔温度的测量把消毒的温度计插入假阴道内腔，待温度不变时再读数，一般40℃左右为宜，马可稍高，也要根据不同个体的要求作适当调整。

10．用一块褶成四折的消毒纱布盖住假阴道入口，以防灰尘落入，即可准备采精。

（三）输精器材的准备

金属和玻璃制成的输精管、输精枪，最好用高压蒸汽消毒，在输精前最好将输精管用稀释液冲洗1~2次。

细管冷冻精液的输精器一般由金属外壳和里面的推杆组成。使用前金属外套应进行消毒，前端的金属套不能连续使用。使用时将细管的一端剪去，棉栓一端插在输精枪的推杆上，借助推杆推动细管中的棉栓即可将精液推出。

若采用开张器法输精，需对开张器先进行严格消毒方可使用。

四、实验报告

试述公羊假阴道的组成及安装时的注意事项。

实验四精液品质的肉眼检查及精子活率评定

一、目的和要求

熟悉肉眼检查精液品质的方法；掌握评定精子活力的方法及评价指标；验证外界因素对精子运动及生存能力的影响；掌握死活精子染色和制作抹片的方法。

二、材料和仪器

（一）精液牛、羊、猪或兔等任一种动物的精液

（二）器械显微镜，显微镜保温箱（或显微镜恒温台），载玻片，盖玻片，搪瓷盘，温度计，滴管，擦镜纸，纱布，有刻度试管，计数器

（三）药品 5%伊红和1%苯胺黑

三、内容和方法

（一）精液的肉眼检查

1.射精量将采得的精液倒入有刻度试管或集精杯中，测其容量。各种家畜的射精量请参考教材。如果精液量过多或过少时，分析其原因。

2.色泽和气味家畜的精液通常乳白色或灰白色，因畜种的不同而又浓淡的区别。马、猪的精液稀薄，呈灰白色；牛、羊的精液浓密，呈乳白色。家畜精液无味或略有腥味。

3.云雾状的观察取原精液一滴于在载玻片上不加盖玻片，用低倍镜观察精液滴的边缘部分。可见牛羊的敬业翻腾滚动的云雾状态；猪马的精液无此现象。

（二）评定精子的活率

采精后立刻在25℃左右的实验室内进行评定精子的活率，最好在37℃保温箱内或加热的载物台上进行。在评定精子活率的同时也可以测定精子的密度。用玻璃棒蘸取一滴原精液或经稀释的精液（马、猪精液的精子密度低，不须稀释；而牛、羊精液的密度大，须用0.9%氯化钠溶液稀释，其温度须与精液密度相近）滴在洁净的载玻片上，盖上洁净的盖玻片，其间充满精液，不存留气泡。也可滴在盖玻片上翻放于凹玻片的凹窝上。置于显微镜下，放大250~400倍检查。注意显微镜的载物台须放平，最好是在暗视野中观察。

精子活动有三种类型：直线前进运动、旋转运动和原地摆动。评价精子活率是根据直线前进运动精子数的多少而定。

目前评定精子活率等级的方法有两种：

十级制——在显微镜视野中估算直线前进运动精子所占全部精子的百分数。直线前进运动的精子为100%者评为1.0级，90%者为0.9级，以此类推。

五级制——全部精子都呈直线前进运动，属于“5”级；绝大多数呈直线前进运动（约80%）为“4”级；前进运动精子略多于半数者（约60%）为“3”级；不及半数者为“2”级；呈直线前进运动的精子数目极少者属“1”级。

精子活率是精液品质评定的重要指标。受精能力与直线前进运动精子数的多少密切相关。新鲜精液的活率大于70%、冷冻精液解冻后的活率大于30%时，方可用于人工授精。

（三）外界因素对精子活率的影响

1．温度

（1）将采得的原精液在载玻片上滴一滴，先放在37℃ 显微镜下观察其活率，然后放在高温45~50℃下2分钟观察精子活率的变化。

（2）将新采得的精液立即检查其活率后随即移入0~5℃温度下放2~3分钟，然后把温度回升至37~38℃后再检查精子活率，注意降温前后精子活率变化情况。

2．渗透压观察原精液的活率后，分别在三滴原精液内分别加入1％氯化钠溶液、3％氯化钠溶液和蒸馏水，观察其活率及形态有何变化。

3．振荡取1~2 ml稀释过的精液放入小试管中，检查其活率后，用手上下剧烈振动2~3分钟，再观察其活率有何变化。

4. 光照取1~2 ml稀释过的精液放入小试管中，检查其活率后，经阳光直射10分钟后观察精子活率的变化。

5．化学药品取3滴精液于载玻片上，用滴管分别滴入 2％煤酚皂液、1/1000新洁尔灭液和 75％酒精，观察其精子活率及形态有何变化。

（四）死活精子百分率测定

活精子头部是不易着色的，镜检时，精子头部是透明、无色的。而死精子则因伊红渗入细胞质，使整个精子头部呈红色。苯胺黑为背景染色，使着色的精子头部可见。

1.将5%的伊红和1%的苯胺黑按1:1混匀，分装于1~2ml容量的试管中（加入试管容量的1/2），并在37℃水浴中加温，随后加入原精液1~3滴，摇匀后再放回水浴中，3分钟后立即取出待用。也可将染液预热后，将伊红、精液及苯胺黑按照1：1：1~2的比例及顺序滴入预热的凹玻片中混匀染色。

2.从以上混合液中用火柴棍沾上一小滴于载玻片的一端，用另一载玻片进行推动制成抹片，待干燥后，高倍镜镜检（400倍）。抹片时，最好在35~40℃的条件下制作，而且制作过程要快。也可将制好的抹片放在37~38℃保温箱内干燥30~60秒。

3.在高倍镜下数200或500个精子，其中分别数出死、活精子各占的百分率。活精子百分率总是要比精子活率高。

四、实验报告

将实验结果填入下表内。

实验五精子密度测定

一、目的和要求

掌握检查精子密度的几种方法。要求学生熟练掌握血细胞计数方法，它是目前许多简单而实用方法的基础。

二、材料和仪器

（一）材料牛、羊、猪或兔等任何一种家畜的新鲜精液

（二）器材显微镜，血吸管，红细胞和白细胞吸管，血细胞计数室，载玻片，盖玻片，200 µl枪头，细乳胶管，5 ml试管，1 ml 移液枪及枪头

（三）药品 3%氯化钠，乙醚，95%乙醇，去离子水

三、内容和步骤

精子密度也称为精子浓度，指每毫升精液中所含的精子数。精子密度的大小直接关系到精液稀释倍数和输精量的有效精子数，也是评定精液品质的重要指标之一。评定方法一般有目测法和计数法。

（一）目测法与检查活率的方法相同，往往与观察活率同时进行，只是精液不作稀释。

具体操作是取1小滴原精液在清洁载玻片上，加上盖玻片，使精液分散成均匀一薄层，无气泡存留，精液也不外流或不溢于盖玻片上，置于400~600倍显微镜下观察。根据精子密度的大小粗略分为密、中、稀三个等级。

“密”指整个视野内充满精子，几乎看不到精子间的空隙和单个精子的运动。

“中”指视野内精子之间相当于一个精子长度的明显空隙，可见到单个精子的活动。 “稀”指视野内精子之间的空隙很大，能容纳2个或2个以上精子。

这种评定方法带有一定的主观性，误差较大。另外，由于各种家畜精子密度相异较大，很难统一制定一个标准。此法只在基层人工授精站常用。

表1 各种公畜精子密度三级标准

牛

羊

猪、马密（亿/ml） 10~20 25以上 2以上中（亿/ml） 8~10 20~25 1~2 稀（亿/ml） 8以下 20以下 1以下

（二）计数法

1.血吸管计算

（1）清洗器械

吸乙醚

白稠布擦干净备用

（2）精液稀释

①用l ml移液枪吸3％ NaCl 0.2 ml或2 ml，放入小试管中，用血吸管吸出10 µl或20 µl NaCl(根据稀释倍数确定)抛掉。

②用血吸管将精液吸至刻度10 µl或20 µl处。

③用纱布擦去吸管尖端所附的精液。

④用姆指按住试管口，振荡2~3分钟使其均匀混合。

（3）精子的计数

①将擦洗干净的血细胞计数室放于显微镜的载物台上，盖上盖玻片。

②将试管中稀释好的精液滴一滴于计数室上面的盖玻片的边缘，使精液自动渗进计数室内。注意不要使精液溢出于盖玻片之外，并不可使精液不够而计数室内有现气泡或干燥之处，如有这些现象应重做。

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