第四章 紫外可见分光光度法C 紫外、可见分光光度法的应用

第五节 紫外、可见分光光度法的应用 紫外、一、定性分析

定性鉴别 纯度检查和杂质限量鉴定

二、有机化合物构型和构象的确定

三、定量分析

单组分的定量方法 多组分的定量方法

一、定性分析 (一)定性鉴别定性鉴别的依据→吸收光谱的特征 吸收光谱的形状 吸收峰的数目 吸收峰的位置(波长) 吸收峰的强度 相应的吸光系数

续前

1.对比吸收光谱的一致性 .

同一测定条件下， 与标准对照物谱图或标准谱图 进行对照比较

续前

2.对比吸收光谱的特征值 .λmax , max , 1cm + λsh , min ε E1% λ

续前

3.对比吸光度或吸光系数的比值：例： 药 规 VB 定 鉴 ： 典 定 12 性 别

λ278 , 361 , 550三处最大吸收 λ λA A 361 =1.70 ~1.88 , 361 = 3.15 ~ 3.45 A278 A 550

(二)计算不饱和有机化合物 吸收波长的经验规则1、伍德沃德(Woodward)规则 伍德沃德提出了计算共轭二烯、多烯烃及共轭烯酮类化合物π→ π→ π*跃迁最大吸收波长的经验规则。见讲义69页到71页 2、斯科特(Scott)规则 斯科特规则类似于伍德沃德规则，用来计算芳香族羰基的衍生 物，如苯甲醛、苯甲酸、苯甲酸酯等在乙醇中的λmax.见讲义71 页到72页。

二、有机化合物构型和构象的确定 采用紫外光谱，可以确定一些化合物的构型和构象。一般说来， 顺式异构体的最大吸收波长比反式异构体小，因此可以用紫外 光谱进行区别。 采用紫外光谱法，还可以测定某些化合物的互变异构现象。例 如，乙酰乙酸乙酯有酮式和烯醇式间的互变异构。 紫外光谱也可以用于确定构象。例如a-卤代环己酮有两种构象， 一个C-X键为直立键、另一个为平伏键。

三、定量分析(一)单组分的定量方法

定 依 ：A = EC l 量 据1.吸光系数法 2.标准曲线法 3.对照法：外标一点法

续前

1.吸光系数法(绝对法) .吸光系数法(绝对法)前 ： 求 色 提 要 单 光

过程 W(g)样/ 含 C(g / m ) 已知→求 Ci : i 稀释 → L E AA Ci [g /100m ] = L E E lA 或 i [m / L] = C ol ε lCi i%= ×100% C样

练习

例：维生素B12 的水溶液在361nm处的百分吸光系 数为207,用1cm比色池测得某维生素B12溶液的吸 光度是0.414,求该溶液的浓度。 解：

A 0.414 C= = = 0.00200g /100mL = 20.0µg / mL E l 207×1

练习

例 ： 精 密 称 取 B12 样 品 25.0mg , 用 水 溶 液 配 成 100ml。精密吸取10.00ml,又置100ml容量瓶中， 加 水 至 刻 度 。 取 此 溶 液 在 1cm 的 吸 收 池 中 ， 于 361nm处测定吸光度为0.507,求B12的百分含量？ 解：0.507 Ci = = 2.45×10 3 g /100m = 2.45×10 5 g / m L L 207 ×1

2.50×10 2 10 C样 = × = 2.50×10 5 g / m L 100 100Ci 2.45 ×10 5 B12

%= ×100%= ×100%= 98.0% 5 C样 2.50 ×10

练习HCL 5mL 吡 例：20.00m 样 啶 25ml →稀 250mL g 品 → 至

→移 10m 100m 测 = 0.591 取 L → L → A ( 知 = 764.0) →求 % 已 E i

稀 至

λ367

解：A 0.591 Ci = = = 7.92×10 4 g /100m = 7.92×10 6 g / m L L E l 764Ci 7.92×10 6 i%= ×100%= ×100%= 99.0% 2 C样 2.0×10 10 × 100 250

续前

2.标准曲线法 .前 ：固 仪 和 提 定 器 测定 件 条

A = K C A∝C过 ： 制 准 列 →分 测 A C ~ A曲 程 配 标 系 别 定 线 样 上条件→测 A样 查 C样 品 同 定 得固 条 定 件

C样 C标

=

A样 A标

C样 =

C标 × A样 A标

芦丁含量测定

分 移 0.200m / m 标 0 ~ 5m →25m 别 取 g L 样 L L 样 3.0m →25m 品 g L示例

0.710mg/25mL

续前

3.对照法：外标一点法 .对照法：

C

前 ：定 器 测 条 ； 提固 仪 和 定 件 截 为 ； 距 0 标 与 品 度 近 样 样 浓 相

Cs Ci

过 ：一 →分 测 A样和 标 程 λ 定 别 定 A A Ci = CS i AS注：当样品溶液与标准品溶液的 稀释倍数相同时 Ai mi = mS AS mi i%= ×100% m

练习

例： 维生素B12的含量测定 精密吸取B12注射液2.50mL,加水稀释至10.00mL; 另配制对照液，精密称定对照品25.00mg,加水稀 释至1000mL。在361nm处，用1cm吸收池，分别 测定吸光度为0.508和0.518,求B12 注射液注射液 的浓度以及标示量的百分含量(该B12 注射液的标 示量为100µg / mL)。 解：

1)对照法2.5 25.00 ×1000 0.508 Ci × = × Ci = 98.1µg / m L 10 1000 0.518 Ci B12标 量 = 示 % ×100%= 98.1% 标 量 示