两种多糖甲基化方法的比较

第41卷第2期

2012年4月上海师范大学学报（自然科学版）JournalofShanghaiNormalUniversity（NaturalSciences）Vol．41，No．2Apr．，2012

两种多糖甲基化方法的比较

沈竞，王元凤，魏新林*

（上海师范大学生命与环境科学学院，上海200234）

摘要：对两种常见的多糖甲基化实验方法与结果做一个比较，结果显示：出同种等量的多糖

在一次甲基化反应的前提下再结合改进后的甲基化方法比经典甲基化方法对多糖的甲基化要

更充分，并由此从两种反应的反应历程对此实验结果进行解释．通过对反应历程的研究发现，

改进后的甲基化方法反应中没有水生成，是多糖甲基化较为彻底的关键原因．由此表明由改进

所以改进后的甲基后的甲基化方法在多糖的一次甲基化成功率要比用经典甲基化方法的高，

化方法可以被运用在多糖结构的研究领域中．

关键词：Hakomori法；Needs法；反应历程

中图分类号：Q949．35文献标识码：A5137（2012）02-0160-05文章编号：1000-

0引言

甲基化方法是多糖化学结构分析中的重要实验手段．甲基化分析方法的原理就是将多糖中的羟基

还原以及乙酰化后运用现代分析仪器GC－MS测得其降解后所得的部分完全甲基化后通过将其水解、

甲基化Alditol乙酸酯的种类以此来确定多糖化学结构中的糖苷键类型．所以多糖上的羟基能否完全甲

［1－2］．基化关系着能否准确确定多糖上的糖苷键类型及其分布方式

Ciucanu法、Hakomori法、Purdie法与Kuhn法等［6－7］．这些不甲基化的方法有很多，比如Needs法、

同的甲基化方法都有各自的优缺点．例如Needs法操作简单，试剂易得，但是耗时多．Hakomori法耗时少，但是对实验者实验操作要求较高．本文作者主要对经典甲基化方法与本文改进后的甲基化方法在实验方法以及实验效果上做一个对比．

1材料与方法

现取40mg茶树花多糖TFPS1分成等量的两份，分别用上述两种甲基化方法对其分别进行甲基化反应一次．先将实验分为两组，实验一用经典甲基化方法进行TFPS1的甲基化反应，实验二用改进后的甲基化方法进行TFPS1的甲基化反应．

1．1材料

茶树花是山茶科植物茶树的花器官．茶树花多糖的制备过程如下：茶树花采自河南信阳，先用沸水提取得茶树花粗多糖，粗多糖经DEAESepharoseFastFlow离子交换柱层析得到一组分TFPS1．TFPS1是茶树花多糖其中的一种多糖组分，它为一种易溶于DMSO中的中性多糖，将它作为研究对象．

11-09收稿日期：2011-

12ZZ125）；上海市启明星跟踪计划（11QH1401800）基金项目：上海市教委科研创新重点项目（11ZZ121，

作者简介：沈

*通信作者竞（1984－），男，上海师范大学生命与环境科学学院硕士研究生；王元凤（1974－），女，上海师范大学生命与环境科学学院副教授；魏新林（1971－），男，上海师范大学生命与环境科学学院教授．

1．2仪器和试剂

NICOLET5700型红外光谱仪，美国尼高力公司．

CH3I（A．R．）、DMSO（A．R．）、NaH（60%）、NaOH（A．R．）、P2O5（A．R．）、CHCl3（A．R．）等均购自国药集团化学试剂有限公司．

甲基化方法

（1）Needs法［3］是多糖甲基化方法中的经典方法，在当今多糖结构研究领域中运用最广，影响很1．3大．此方法以操作简单著称．具体实验步骤如下：

①称取20mg茶树花多糖TFPS1于反应瓶中，放置P2O5真空干燥过夜．然后置于50mL的平底烧瓶中，加入6mLDMSO，磁力搅拌12h，直至多糖样品完全溶解．

②然后加入干燥的研磨过的NaOH粉末40mg，室温搅拌30min使其溶解．

③然后改用冰浴，待反应瓶中的溶液完全冰冻后，在氮气保护下逐滴加入4mL碘甲烷（约30min）．搅拌下反应体系解冻，并逐渐澄清，直至成为黄色溶液．

④恢复至室温后，继续磁力搅拌反应30min，然后用蒸馏水透析24h，减压浓缩后冷冻干燥．得到甲基化多糖衍生物．

⑤重复此方法3次可得完全甲基化多糖．然后将甲基化多糖进行IR分析，观察IR谱中羟基峰是否完全消失．

（2）本甲基化方法是在Hakomori方法［4－5］基础上稍加改进的．具体实验步骤如下：

①多糖溶解．称取20mg已经用P2O5真空干燥过的茶树花多糖TFPS1，然后将其溶解于6mL无水DMSO中，磁力搅拌12h，至DMSO中无絮状物为止．最后所得澄清的糖样DMSO溶液．

②DMSO碳负离子的制备．另称取60mg经用石油醚多次洗涤过的NaH固体，将其溶解于另一6mL无水DMSO中，充氮气隔绝氧气，在60℃下磁力搅拌1h，至混合物变为墨绿色与氢气停止逸出时停止搅拌．

③多糖羟基去质子反应．将（2）中所得的反应液加入（1）中所得澄清的糖样DMSO溶液中，在常温

最后反应液由墨绿色变为红棕色．下磁力搅拌2h，

④多糖羟基氧负离子与碘甲烷的亲核取代反应．用注射器抽取4mL碘甲烷在氮气保护下逐滴滴入（3）中所得的红棕色溶液中．溶液由红棕色逐渐变为黄色．将黄色溶液密封后放置于冰箱中反应2h，然后在室温下避光，磁力搅拌反应10h，反应完毕后加少量蒸馏水到上述反应液中中止反应．

⑤甲基化多糖的分离提纯．将混合物取出放置在透析袋中用蒸馏水透析24h，一日换3次蒸馏水．将透析液取出，加入适量氯仿，用分液漏斗进行萃取．溶液分为上 …… 此处隐藏：3823字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……