铁皮石斛原球茎多糖提取最佳工艺研究

西北农业学报 2006,15(5):240~243

ActaAgriculturaeBoreali-occidentalisSinica

铁皮石斛原球茎多糖提取最佳工艺研究

何铁光

1,2,3

*

,杨丽涛,李扬瑞,苏 江,王灿琴,韦柱杨

13124

(1.广西大学农学院,广西南宁 530005;2.广西农业科学院生物技术研究所,广西南宁 530007;3.广西作物遗传

改良生物技术重点开放实验室,广西南宁 530007;4.广西洋平石斛技术研究所,广西玉林 537000)

摘 要:对铁皮石斛悬浮培养原球茎多糖的提取、纯化条件进行优化研究,正交试验结果表明,提取的最佳工艺为80 热水中浸提2h,加水量20倍,提取3次,醇析时乙醇的浓度为80%。粗多糖脱蛋白时,氯仿/正丁醇(v/v)为1 0.4,样品/氯仿+正丁醇(v/v)为1 0.35,萃取时间采用5min最佳。关键词:铁皮石斛;原球茎;多糖分离;悬浮培养

中图分类号:Q949.71+8.43;Q946 文献标识码:A 文章编号:1004-1389(2006)05-0240-04

StudiesontheOptimumTechnologyforExtractionofPolysaccharides

fromSuspension-culturedProtocormsofDendrobiumcandidum

HETie-guang,YANGL-itao,LIYang-rui,SUJiang,

WANGCan-qin2andWEIZhu-yang4

(1.CollegeofAgronomy,GuangxiUniv.,Nanning 530005,China;2.InstituteofBiotechnology,GuangxiAcademyofAgriculturalSciences,Nanning 530007,China;3.GuangxiCropGeneticImprovementandBiotechnologyLab,Nanning 530007,China;4.GuangxiYangpingHerbaDendrobii

ScientificResearchInstitute,Yulin 537000,China)

1,2,3

1

3

1

Abstract:Conditionsoftheextractionandpurificationofpolysaccharidesfromsuspension-culturedprotocormsofDendrobiumcandidumwereoptimizedbyorthogonalexperiment.Theresultsshowedthattheoptimumtechnologyofisolationistoextractabout3timesand2hourseachtimein20times

waterat80 ,toprecipitatepolysaccharideswith80%ethanol,andtoremoveproteinswhenchloro-form/n-butanolis1 0.4,thesample/chloroform-n-butanolis1 0.35andtheabstractingtimeis5min.

Keywords:Dendrobiumcandidum;Protocorm;Polysaccharidesextraction;Suspensionculture 铁皮石斛(DendrobiumcandidumWall.exLindl.)是兰科石斛属多年生附生草本植物,石斛为常用中药,对热病伤阴、胃阴不足等病症有很好疗效;对慢性萎缩性胃炎以及心脑病患、防癌抗癌、防老抗衰等方面,石斛都能收到独特、满意的效果。近年来,随着人们对多糖功效认识的增多,已有人发现铁皮石斛多糖具有较强的抗肿瘤的生物活性,这将使石斛在医药保健行业中得到更广泛的应用。

[1,2]

铁皮石斛的种子极小、无胚乳,自然条件下需与某些真菌共生才能萌发,很难用实生苗栽培,加上长期过度开采,野生铁皮石斛濒临灭绝[3]。目前铁皮石斛试管苗的繁殖一般要经过原球茎(protocorm)阶段,而类原球茎实质上是正在生长分化的体细胞胚胎,具有植株同样的物质代谢和形态发育的潜能。由此,提出用原球茎代替全植株成为药源的可能性。至今,以直接获得药用石斛活性成分为目的的离体培养鲜见报道[4]。本试

*

收稿日期:2006-02-15 修回日期:2006-03-20

基金项目:广西农业科学院科技发展基金(2004012)。

作者简介:何铁光(1976-),男,汉族,湖南桂阳人,博士研究生,主要从事植物生物化学领域的研究。

验研究从铁皮石斛组培原球茎中提取多糖的最佳工艺条件,为工业化生产提供依据。

表2 多糖粗品纯化因素水平表Table2 Factorandlevelpolysaccharide

crudepowerpurifications

因素Factors

水平A样品/氯仿+正丁醇B氯仿/正丁醇C振荡时间Levels(v/v)Sample/(v/v)Chloroform/min

chloroform-n-butanol/n-butanolVibrationtime12

1 0.241 0.35

1 0.21 0.4

520

1 材料与方法

1.1 试验材料和仪器

试验材料 悬浮培养于1/2MS液体培养基的铁皮石解原球茎,于60 烘干后,经粉碎、干燥恒重处理后备用。

试剂 氯仿、苯酚、浓硫酸、正丁醇、乙醇、葡萄糖、冰醋酸、胃蛋白酶、考马斯亮蓝G-250、牛血清蛋白均为分析纯。

仪器 UV-1700型分光光度计(日本岛津)、索氏提取器、HH-S恒温水浴涡(江苏金坛市医疗机械厂)、ZFQ85A旋转蒸发仪(上海医械专机厂)、SHZ-200型双配套循环水式多用真空泵(河南省巩义市英峪予华机械仪器厂)、冷冻干燥机(东样技研(株)制造。

1.2 试验方法

1.2.1 多糖工艺流程 原料→称重→热水浸提→过滤→滤液醇析→离心得多糖粗品→复溶→脱蛋白→醇析→粗多糖。

1.2.2 多糖提取条件确立 采用L8(2)正交设计,试验重复2次,各处理内容见表1。

表1 多糖提取因素与水平表

Table1 Factorsandlevelofpolysaccharideextraction

因素Factors

水平A提取时间/hB提取次数D加水量/倍

C温度/ LevelsExtractionExtractionVolumeTemperature

timefrequencyofwater12

24

13

80100

1020

4

1.2.5 多糖含量测定 采用苯酚-硫酸法[8],以葡萄糖为标准品。

1.2.6 蛋白质含量测定 采用考马斯亮兰染色法,以牛清血蛋白为标准品。

1.2.7 数据处理 所有统计分析均采用SAS6.0软件和Excel软件处理,在PC机上完成。

[9]

2 结果与讨论

2.1 铁皮石斛类原球茎多糖提取条件的确立

多糖是一类由单糖分子经脱水以苷键缩合而成的天然高分子化合物,一般为非晶形固体。根据相似相溶原理,它能溶于水、酸、碱、盐溶液而不溶于醇、醚、丙酮等有机溶剂。因此,石斛用热水浸提,浸提液以乙醇沉淀即可获取多糖粗制品。本试验选用水煎煮工艺,选择提取时的时间、提取次数、温度、加水量4个因素进行正交试验,结果见表 …… 此处隐藏：4666字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……