实验一ABO及Rh血型鉴定2013.3

时间：2025-07-13

血型

实验一ABO血型鉴定和Rh血型鉴定临床检验诊断学实验室

血型

实

验

内

容

一、5%红细胞悬液的配制二、ABO血型鉴定(试管法、纸片法) 三、Rh血型鉴定

血型

一、5%红细胞悬液的配制原理：使用一定量的稀释液(生理盐水)稀释压积红细胞，遵循抗原抗体结合的量比关系，

获出最佳结果。器材: 小试管(玻璃及塑料皆可)、加样枪、

试管架、离心机、记号笔、显微镜。试剂: 生理盐水。

标本:

抗凝或非抗凝静脉血。

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操

作

1、全血2ml 1000g离心5min,吸取分离上清至另一干净试管(备用); 2、压积加生理盐水约2~3ml,充分摇匀或吸管轻轻吹打混匀，再次离心去掉上清液； 3、重复离心(1000g,60s)洗涤红细胞3次，去掉上清液制备压积红细胞； 4、取1滴压积红细胞于1支干净的小试管中，在其中加入 19滴生理盐水，用小吸管轻轻吹打混匀，就是5%的红细胞悬液。

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二、ABO鉴定目的：掌握ABO正反定型的原理、方法。原理：红细胞凝集试验，通过正、反定型鉴定ABO 血型。正定型：用已知血型特异性抗体(抗-A、抗-B) 来测定红细胞上有无相应的抗原；反定型：用已知血型试剂红细胞测定血清中有无相应的抗体。

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器材:

记号笔、小玻璃试管、滴管、试管架、

离心机、鉴定纸板、显微镜。

试剂:1. ABO血型抗体：抗A、抗B(-A、-B);

2.试剂红细胞：3%~5%Ac、Bc及Oc。3. 生理盐水。

标本:

抗凝或非抗凝静脉血。

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操作(试管法) (1)标记试管：正定型：取洁净小试管2支，分别标明-A、-B;反定型：取3支小试管，标记Ac、Bc、 Oc。 (2)配5%悬浮红细胞：取静脉血2滴于小试管中，加 2ml生理盐水，混匀，1000g离心60s,弃上清；重复3 次。取管底1滴压积加19滴生理盐水，即为5%悬红。 (3)加样：正定型管中分别加入1滴试剂和1滴悬红，反定型管中分别加入2滴血清和1滴试剂红细胞。 (4)离心：1000g离心15秒。 (5)结果：轻摇试管,观察有无凝集或溶血现象。

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红细胞凝集强度判断标准 4+ 红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。 3+ 红细胞凝集成大小块，血清清晰。 2+ 红细胞凝块分散成许多小块，血清清晰。 l+ 肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。 ±镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞。 mf 混合凝集外观(mixed field)指镜下可见少数红细胞凝集，而极大多数红细胞仍呈分散分布。 - 表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。

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试管法结果判定

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判断标准表l ABO血型正反定型结果受检血清+试剂红细胞 (反定型) Ac Bc Oc - + + - + - + - - - - - 试剂血清+受检红细胞 (正定型) -A -B 受检血型 + - - + - +

- + A B O AB

血型

操作：玻片法(鉴定纸板)

(1)洁净玻片(鉴定纸板)一张。标-A、-B,分别用滴管滴

加抗-A、抗-B试剂1滴，再加受检者10%红细胞悬液l滴，混匀。

(2)另取洁净玻片(或鉴定纸板)一张。标Ac、Bc、Oc,各 (3)室温轻转动玻片(或鉴定纸板) ,使血清与细胞充分混玻片试验时可用低倍镜观察结果。

加受检血清2滴，再分别滴加Ac、Bc、Oc悬红1滴。

匀，约2min肉眼观察凝集(溶血)反应。