两株柑橘采后致病真菌的分离及生物学特性

王 华，陶能国*，王长锋

（湘潭大学化工学院，湖南，湘潭 411105）

摘 要：从自然发病的宫川果实上分离得到两株致病真菌（PL,PQ），致病力检测结果显示，接种PL的柑橘果实发病到全部腐烂需7d，而接种PQ的柑橘果实则需13d,结合形态学特征确定两株致病真菌（PL,PQ）为指状青霉(Penicillium digitatum)和意大利青霉(Penicillium italicum)。基础生物学特性结果表明，指状青霉菌致死温度为70℃，菌丝体生长最适温度为25℃，最适pH=7；意大利青霉的致死温度为80℃，菌丝体生长的最适温度为20℃，最适pH=10。

关键词：柑橘；指状青霉；意大利青霉；生物学特性

中图分类号：S435 文献标识码：A 文章编号：

Isolation of two citrus postharvest pathogens and their biological characteristics

WANG Hua, TAO Neng-guo *, WANG Chang-feng

(College of Chemical Engineering, Xiangtan University, Xiangtan, Hunan 41105, China)

Abstract: We isolated the fungals from symptomatic oranges of Gongchuan in Hunan province. The pathogenicity of two Penicillium showed that the pathogenicity of PL is more strong than PQ ,only needed 7d and 13d , respectively .We identified them by morpHological characters analysis. The result showed that 2 typical pathogenic strains of Penicillium (PL, PQ) were identified as P. italicum and P. digitatum. .The research about biological charactersistics showed that : the lethal temperature and optimum temperature of P. digitatum was about 70℃ and 25℃, and the optimum pH=7. The lethal temperature and optimum temperature of P. italicum was about 80℃ and 20℃ ; and the optimum pH=10.

Key Word：Citrus; Penicillium species; biological charactersistics

柑橘属于芸香科（Rutaceae）柑橘属（Citrus）植物，是一种植面积比较广的农作物，遍及100多个国家（Smilanick）。我国是世界上种植面积最大的国家之一。由于柑橘的产地和消费区存在一定的距离，在贮存以及运输过程中很容易腐烂，所以每年因烂果损失在10%之间，严重的时候高达30%以上（陆宁海）。其中以真菌引起的侵染性病害是导致采后柑橘果实腐烂的主要原因，常见的有青霉病、绿霉病、黑腐病、蒂腐病、炭疽病、酸腐病等（孙萍）。由青霉菌引起青霉病和绿霉病最为严重（WURYATMO）。环境适宜的情况下，青霉菌可在田间侵染果实发病，或采后由健康果实携带进入销售市场或贮藏库，导致采后病害的大量发生，严重影响果实品质和商品价值（陆宁海）。

本研究从自然发病的宫川果实上分离得到两株青霉菌，采用形态学结合致病力检测的方法对筛选的菌种进行鉴定，并做一些基础生物学研究。为今后研究柑橘采后致病菌的防治提供理论基础。 收稿日期：

基金项目：国家自然科学基金（30901010）

通信作者：陶能国（1979-），男，湖南浏阳人，副教授，博士，主要从事柑橘贮藏与保鲜研究。E-mail：nengguotao@http://www.77cn.com.cn

1 材料方法

1.1 致病真菌的分离与形态学鉴定

将自然发病果实表皮用清水洗净，取约 3 mm×5 mm 的病组织数块，用 7 5% 乙醇消毒1 0 S ，再用0.1%的 HgCl2消毒4～6 mi n取出，用无菌水冲洗3次后，将病组织移于马铃薯葡萄糖琼脂( P D

A) 平板在2 8℃下培养，分离纯化得到供试菌株，备用。

将已经纯化好的病原菌在PDA培养基上划线培养三天，观察病原菌菌落形态，采用周德庆[2]的载片培养方法，将病原菌点接到滴有PDA培养基的载玻片上，放于培养皿中，每个培养皿中垫有一片湿润的滤纸片（灭菌）保湿，25℃培养箱中培养五天，显微镜下观察形态特征，参照真菌形态学鉴定手册[3]鉴定分离所得病原菌的种类。

1.2 致病力的检测

选取无机械损伤，无病虫害以及大小均一成熟度相同的宫川果实，用2%的NaClO溶液浸泡2min，后用清水清洗3次，室温环境下自然干燥。无菌操作台内用灭菌刀在果实的腰部刺4mm2的伤口，同时接种10 μL的菌悬液（1×107CFU/mL），接种果置于大的保鲜盒里，保持相对湿度95%左右，各处理10个果实，重复3次，每天记录发病情况。

1.3 致病真菌生物学特性观察

1.3.1 致病真菌最适温度的测定

将四株青霉菌接种到PDA培养基上，培养三天后，取直径为6mm的菌苔，将菌苔放置新的平板中，分别于15℃，20℃，25℃，28℃，30℃，35℃，37℃培养箱中，培养3天，用直尺记录菌丝体的直径。

1.3.2 致病真菌致死温度的测定

将PDA斜面上培养3天的病原菌制成浓度为1×104 CFU/mL的孢子悬浮液，然后取1 mL悬浮液分装于有9 mL无菌水的不同试管中，将试管分别放置-20℃，0℃，20℃，40℃，60℃，80℃，100℃下处理10min（待温度上升到预定值时开始计时）。之后用吸管取50μL孢子悬浮液到PDA培养基上涂平板，25℃下倒置培养，观察病原菌的菌落生长情况。

根据结果在60℃-80℃以5℃为梯度，进行进一步研究。

1.3.3 致病真菌最适pH的测定

将PDA培养基的pH从pH=2开始，以1个单位为梯度递增，直到pH=12。取培养3天后的直径为6mm菌苔，置于不同pH的培养基中，25℃下倒置培养3d。观察菌落直径生长情况。

1.4 数据分析

采用常规的分析方法来标注标准偏差，数据分析采用SPSS16.0统计分析软件，ANOVA来分析显著性差异（p<0.05）

2 结果分析

2.1 致病真菌的分离及致病力的检测

从自然发病的柑橘果 …… 此处隐藏：4258字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……