解读《全国艾滋病检测技术规范(2009年修订版)》

解读《全国艾滋病检测技术 规范(2009年修订版)》

齐齐哈尔市疾病预防控制中心 2011.7.20

样品的采集

根据检测项目的具体要求，确定采集样品的 种类、处理、保存及运输的时限和方法，按 照临床采血技术规范的要求操作，遵守生物 安全要求。 用一次性注射器(或真空采血管)抽取一定 量静脉血，室温下自然放置1-2h待血液凝固， 血块收缩后经3000r/min离心15min,吸出血 清备用。

抗凝血的采集用加有抗凝剂的真空采血管(或一次性注射器抽取 静脉血，转移至加有抗凝剂的试管),反复轻摇， 分离血浆和血细胞备用。 应根据实验要求选用适当的抗凝剂，如CD4+/ CD8+T淋巴细胞测定可选用K3EDTA或肝素或枸 櫞酸钠；HIV病毒分离、核酸定性/定量检测可选 用K3EDTA或枸櫞酸钠。 用于核酸定性检测时，采集的抗凝全血应在 4~8h内分离PBMC和血浆，否则应在24~48h内 分离血浆和血细胞。

样品保存

用于抗体检测的血清或血浆样品，应存放于-20℃以下， 短期(1周)内进行检测的样品可存放于2-8℃。 用于抗原和核酸检测的血浆和血细胞样品应冻存于-20℃ 以下，进行病毒RNA检测的样品如需保存3个月以上应置 于-80℃。 用于CD4+/ CD8+T淋巴细胞测定的样品不能长期保存， 样品采集时间超过48h则不可检测。 艾滋病检测筛查实验室检测的筛查阳性样品应及时送确证 实验室，筛查阴性样品可根据具体需要决定保存时间，建 议至少保存1~2个月。特殊用途或专项项目的样品根据具 体要求确定保存时间。 艾滋病检测确证实验室收到的筛查阳性样品，无论确证结 果任何，均应将剩余的样品保存至少10年，特殊用途或专 项项目的样品根据具体要求确定保存时间。

筛查试验呈阳性反应样品的转送如需送上级实验室进行复检，需要核对身 份，必须补充个人信息(姓名和身份

证号码)并同时填写 HIV抗体筛报 告和 复检单 送当地艾滋病筛查中心实验室，或直接送确证实验室复检。(必要 时采集第二份血样)

样品的运送、运送条件

用于抗体检测的血清和血浆样品应在冻存条件下运 送。 用于CD4和CD8T淋巴细胞测定的样品应在室温下 (18~25℃)或4 ℃ (特殊要求时)运送。 用于病毒载量检测的样品应在-20 ℃以下运输。 DBS样品应在室温下(18~25 ℃ )运送。每一件 包装的体积以不超过50ml为宜。 严禁使用玻璃容器。 运送 血清或血浆，除特殊情况外一般不运送全血。 包装采用WHO提出的三级包装系统。

HIV抗体检测

目的 ： 监测、诊断、及血液筛查的HIV抗体检测 要点： 筛查试验阳性不能出阳性报告； 严格遵守实验室标准操作程

序； 严格按照试剂盒说明书操作； 注意防止样品间交叉污染。 HIV抗体筛查试验的方法 ELISA 快速检测(RT):明胶颗粒凝集试验(PA); 斑点EIA或斑点ELISA(dot-EIA); 斑点免疫胶体金(胶体硒)快速试验； 艾滋病唾液检测卡；其他。

确证实验检测的流程

方法：免疫印迹试验(WB)条带免疫试验，放射免疫沉淀试 验(RIPA)及免疫荧光试验(IFA)等。 试剂选择：使用HIV-1/2混合型试剂进行检测。 结果：阴性反应，报告HIV抗体阴性(—) 阳性反应，报告HIV—1抗体阳性(+) 不是阴性反应，又不满足阳性判断标准，报告HIV抗体 不确定(±) 结合流行病学资料，可以在4周后随访检测，如带型没有进展 或呈阴性反应，则报告阴性；如随访期间出现阳性反应，则报 告阳性；如随访期间带型有进展，但不满足阳性标准，应继续 随访到8周。如带型没有进展或称阴性反应则报告阴性；满足 HIV抗体阳性诊断标准则报告阳性，不满足阳性判断标准可视 情况决定是否继续随访。

检测信息的上报

各级艾滋病检测实验室所在结构每月应填 写《HIV抗体检测数及阳性人数统计报表》 并于每月10日前完成网络直报。未开展网 络直报的单位，由县级疾病预防控制结构 收集信息后统一上报。

质量控制

质量控制具体内容：指将质控品和检测标本一 起实验操作，从质控值了解分析实验过程的质 量情况。为了便于观测和概括，又使用了一些 统计学方法进行归纳和分析。 质量控制贯穿实验的整个过程 实验前的准备 实验中的操作 实验后数据的整理

内部对照质控血清 指每个试剂盒内厂方提供的一套阴性和阳 性对照血清。 外部对照质控血清 各级实验室为了监控每次检测的重复性和 稳定性以及检验试剂盒批间差异而设置的一套 阴性和阳性对照血清。

质控血清

外部对照质控血清的组成 理想的外部对照应该包括阳性对照、弱阳性 对照、临界值对照和阴性对照。但是目前各实验 室应该在每次实验时设置一个单一浓度水平的质 控品即弱阳性对照。这个弱阳性对照的值以设定 在各试剂盒Cut-off值的2—3倍为宜。

质控血清

外部对照质控血清的来源和制备 —通过向有关机构购买获得 —通过实验室制备获得 混合HIV抗体阳性或阴性人血清，3000转/分钟 离心15分钟，用0.2um生物滤膜过滤除菌后再进行 56℃30分钟加热灭活处理.弱阳性对照可以通过使用 HIV抗体阴性的正常人血清梯度稀释HIV抗体强阳性 血清并经标定后得到.弱阳性对照的OD值以该试剂盒 临界值Cut-off的2~3倍为宜。

外部对照质控血清的保存 一次制备量 …… 此处隐藏：641字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……