噬菌体抗体库技术及其应用

有用

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[16]JamiesonT,CookDN,NibbsRJ,etal.ThechemokinereceptorD6

limitstheinflammatoryresponseinvivo[J].NatImmunol,2005,6(4):403-411.

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D6hasopposingeffectsonallergicinflammationandairwayreactivity[J].AmJRespirCritCareMed,2007,175(3):243-249.[18]LiuL,GrahamGJ,DamodaranA,etal.Cuttingedge:Thesilent

chemokinereceptorD6isrequiredforgeneratingTcellresponsesthatmediateexperimentalautoimmuneomyelitis[J].JImmunol,2006,177(1):17-21.

[19]D’AmG,B.Uncouplingofinflam2

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[14]GrahamGJ,McKimmieCS.ChemokinebyD6:ablefeast?[J].TrendsIm27(-[15]MartinezdelaC,al.Increasedin2

flammationinformokinedecoyreceptorD6

文章编号:1007-8738(2010)04-0404-03

1　噬菌体抗体库的种类和技术发展

噬菌体抗体库技术是指利用分子生物学手段将外源

DNA片段插入噬菌体基因,与编码噬菌体外壳蛋白的基因相

噬菌体抗体库技术及其应用

吴懿娜,杜欣军,张伟伟,董　峰,王　硕3

(天津科技大学食品工程与生物技术学院食品营养与安全省

连接,通过侵染宿主,在噬菌体表面表达成融合蛋白的过程,经过对目标分子如蛋白、糖蛋白、病毒及小分子物质等的特异性结合筛选过程,从而富集得到针对的目标分子的噬菌体展示抗体。

1.1　噬菌体抗体库的分类　(1)根据插入基因片段的来源噬

部共建教育部重点实验室,天津300457)

[关键词]噬菌体展示;抗体库;小分子物质[中图分类号]Q789　　　[文献标识码]A

菌体抗体库可以分为免疫抗体库和非免疫体抗体库,非免疫抗体库又可以分为天然抗体库、半合成抗体库和全合成抗体库。第一个合成的噬菌体抗体库是Barbas等1992年报道将合成的一小段CDR3片段、人的49个胚系VH、一个J片段利用PCR技术与人的λ轻链连成scFv构成外源DNA插入噬菌体的外壳基因中获得的。(2)噬菌体抗体库的构建可利用的载体主要包括丝状噬菌体、Lambda噬菌体、T7噬菌体及

T4噬菌体。丝状噬菌体中M13为最常用的单链丝状噬菌体

　　目前,抗体在在临床医学研究和食品环境安全检测等方面应用广泛,随着分子生物学的不断发展,利用基因工程手段获得基因工程抗体的方法成为抗体技术研究的热点,自从

Smith于1985年第一次成功地将EcoRⅠ核酸内切酶基因插入

丝状噬菌体基因pⅢ中,并在噬菌体表面表达出了融合的蛋白,及1990年McCafferty等又在此基础上构建了库容为10

6

载体[1];T7噬菌体具有两个双链臂,外源基因可插入双臂间,经体外包装后可直接侵染大肠杆菌,获得抗体库,目前应用也较为广泛[2];T4噬菌体是一种新型噬菌体展示系统,外源基因与其小衣壳蛋白SOC基因相连表达成为融合蛋白,其病毒颗粒不需要经过宿主分泌,而是直接在宿主细胞内组装,是一种用于无法通过大肠杆菌分泌来获得抗体的羧基端展示的噬菌体展示系统;λ噬菌体的展示区域是尾部蛋白PV的C端折叠区,或其头部组装蛋白D的N端或C端,也是一种在宿主细胞内完成组装的噬菌体展示系统。

1.2　插入基因片段的类型　scFv是目前最常用的插入片段

的抗体库,并从中成功地筛选出了溶菌酶单链抗体后,噬菌体抗体库技术成为了抗体工程中的一种新兴的抗体制备的手段。我们将从技术概念与方法、应用方向及研究进展等方面对噬菌体抗体库技术进行综述。

收稿日期:2009-11-23;　接受日期:2010-01-05

基金项目:国家高技术研究发展计划(863)资助项目(2006AA10Z448);

国家自然科学基金资助项目(20905058)

作者简介:吴懿娜(1985-),女,天津人,硕士

E2mail:ynwu517@http://www.77cn.com.cn

形式,此外还存在其他结构的抗体基因,如dsFv、Fv、Fab和

有用

)2基因。F(ab’

1.3　目标抗体的筛选　工程抗体的体外成熟对医疗领域具

405

血栓疾病等。

在药物研究方面,Saha等[9]对结核病的治疗药物进行了研究,其中结核分枝杆菌是结核病的致病因之一,其中的重要蛋白之一是相对分子质量为16kDa的热休克蛋白16.3,研究者利用M13噬菌体抗体库筛选了对其亲和的抗体,为结合病的药物治疗奠定了良好的基础。Kato2Takagaki等[10]利用噬菌体抗体库对血栓形成相关的血小板上的受体位点糖蛋白6GlycoproteinVI(GPVI)与其他物质的亲和能力进行了研究,。Hyde2DeRuy2

scher等

[11]

有重要的作用,通过噬菌体抗体库的筛选是抗体体外成熟的其中一种方式,通过不断地筛选,从而促使阳性克隆不断 …… 此处隐藏：6285字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……