北京中医药大学

博士学位论文

从Toll样受体通路探讨加味桔梗汤治疗内毒素致急性肺损伤的

作用机制

姓名：郑丰杰

申请学位级别：博士

专业：中医临床基础

指导教师：李宇航

20070601

从Ｔｏｌｌ样受体通路探ｉ，ｔ加ｌ味桔梗汤治疗内毒袭敦急性肺损伤的作用帆制

英文缩略词表

英文缩写英文全称

ＡＬＩａｃｕｔｅｌｕｎｇｉｎｊｕｒｙ

ＡＲＤＳａｃｕｔｅｒｅｓｐｉｒｅｄｉｓｔｒｅｓｓｓｙｎｄｒｏｍｅｓ

ＡＰ．１ａｃｔｉｖａｔｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ－１

ＣＡＲＳｃｏｍｐｅｎｓａｔｏｒｙａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｒｅｓｐｏｎｓｅ

ｓｙｎｄｒｏｍｅ

ＣＯＸ．２ｃｙｃｌｏｏｘｙ－ｇｅｎａｓｅ２

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ＥＴ．１ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎｓ１

ＩＣＡＭｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒａｄｈｅｓｉｏｎｍｏｌｅｃｕｌｅ

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ＩｌｃＢｉｎｈｉｂｉｔｏｒｏｆｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒ－ｋａｐｐａＢ

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ＪＷＪＧＤＪｉａｗｅｉＪｉｅｇｅｎｇＤｅｃｏｃｔｉｏｎ

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ｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｓｙｎｔｈａｓｅ

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ｐａｔｈｏｎｇｅａｓｓｏｃｉａｔｅｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｐａｔｔｅｒｓ

ｐｈｏｓｐｈａｔｅ—ｂｕｆｆｅｒｅｄｓａｌｉｎｅ

ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅＡ２

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ｒｅａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎｓｐｅｃｉｅｓ

ｓｙｓｔｅｍｉｃｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｒｅｓｐｏｎｓｅｓｙｎｄｒｏｍｅ中文全称急性肺损伤急性呼吸窘迫综合征活性蛋白１代偿性抗炎反应综合征环氧化酶２弥散性血管内凝血内皮素ｌ细胞问黏附因子Ｔ．干扰素核因子ｋａｐｐａＢ抑制剂白介素一氧化氮积分光密度加味桔梗汤ＬＰＳ结合蛋白脂多糖丝裂原激活蛋白激酶丙二醛多器官功能障碍综合征髓过氧化物酶核因子ｋａｐｐａＢ一氧化氮一氧化氮合酶氧自由基血小板活化因子病原体相关分子模式磷酸枯酸缓冲液磷脂酶一２中性粒细胞活性氧全身炎症反应综合征ＭＰＯＮＦ．ｒＢＮＯＮＯＳＯＦＲＰＡＦＰＡＭＰｓＰＢＳＰＬＡ２ＰＭＮＲＯＳＳＩＲＳ

英文缩略词表

ＳＯＤ

ＴＮＦ．－ａｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅｄｉｓｍｕｔａｓｅｔｕｌｒｎｏｒｎｏｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒｄ９超氧化物岐化酶肿瘤坏死因子吨

中医学ＭｅｄｉｃｉｎｅＴＣＭ

ＶＣＡＭ

ＸＦＪＤ删ｉｔｉｏｎａｌＣＩｌｉｎｅｓｅｖａｓｃｕｌａｒｃｅｌｌａｄｈｅｓｉｏｎｍｏｌｅｃｕｌｅＸｕａｎｆｅｉＪｉｅｄｕ血管黏附因子宣肺解毒

中文摘要

中文摘要

急性肺损伤（ａｃｕｔｅｌｕｎｇｉＩｌｊｕｒｙ，ＡＬｌ）是指由心源性以外的各种肺内、外致病因素所

导致的急性、进行性、缺氧性呼吸衰竭。其发病机理错综复杂，迄今尚未完全阐明，亦无满意的治疗措施，病死率高达５０％。根据其临床表现，ＡＬｌ当属中医学“肺热证”、“喘证”、“结胸”等范畴。近年来，中医药工作者结合现代医学对ＡＬＩ发病机制的研究新进展，采用辨病与辨证相结合，从热毒论治ＡＬＩ，虽取得了一定疗效，但并未显著降低其死亡率；因此，深入研究ＡＬＩ的中医发病机制并在其指导下寻找有效方药，是其治疗研究中的新途径和优势所在。

有资料表明，引发ＡＬｌ的致病菌中，Ｇ一占检出病菌的７０％一８０％，内毒素脂多糖

（１ｉｐｏｐｏｌｙｓａｃ￡ｈａｒｉｄｅ，ＬＰＳ）是Ｇ一的主要抗原性及致病性成分，而Ｔｏｌｌ祥受体４（ｔｏｌｌ．１ｉｋｅｒｅｃｅｐｔｏｒ４．ＴＬＲ４）是ＬＰＳ的跨膜信号转导受体，因此，ＴＬＲ４介导的ＬＰＳ信号转导通路在ＡＬｌ发生发展过程中的应起重要作用。这一理论办体现了从治“人的病”到治“病的人”的治疗策略的转变，提示我们应重视中医肺生理病理与ＡＬＩ发病之间的关系。基于以上认识，本课题提出肺失宣降、邪毒壅肺、气机逆乱是ＡＬＩ的中医发病机制，而宣肺解毒法顺应肺之生理、契合病机是Ａｕ早期阶段的基本治疗原则，以此为指导思想的加味桔梗汤亦有望是治疗ＡＬＩ的有效方药。

目的

１．探讨ＴＬＲ４介导的ＬＰＳ信号转导通路在ＡＬｌ发生发展中的作用；

２．阐释中医肺生理病理与ＡＬｌ发病之间的关系，揭示肺减象理论及ＡＬＩ相关病机的现代生物学基础；

３．探讨“宣肺解毒”治疗早期ＡＵ的可行性及科学性；

４．从整体、细胞、分子水平阐明加味桔梗汤治疗ＬＰＳ致ＡＬＩ的作用机制，为临床

防治Ａｕ提供实验依据。

方法

１理论研究

基于中医肺藏象理论与ＡＬｌ发病之问的关系及仲景宣肺法证治概要，从理论上探讨“宣肺解毒”治疗早期ＡＬｌ的科学性和可行性，并进～步阐释加味桔梗汤治疗ＡＬＩ的理论依据。

２实验研究

２．１加味桔梗汤治疗ＬＰＳ致急性肺损伤大鼠的药效学研究

健康雄性ＳＤ大鼠９０只，随机分为正常组（９只）、模型组（２７只）、清热解毒组（２７只）、宣肺解毒组（２７只）。清热解毒组灌服黄芩清肺饮（由黄芩、栀子等组成），宣肺解毒组灌服加味桔梗汤（由桔梗、生甘草、黄芩、栀子等组成），其余两组灌服生理盐

２从Ｔｏｌｌ样受体通路探讨加味桔梗汤治疗内毒素致急件釉损伤的作用机制水，共６天。第７天，除正常组外，其余各组一次性股静脉注射ＬＰＳ（４．９ｍｇ／ｋｇ），正常组一次性股静脉注射等量的生理盐水，观察并记录各组大鼠症状体征改变。除正常组外，其余三组动物于造模后２ｈ、４ｈ和６ｈ随机分三批处死，其中３只麻醉后，用４％多聚甲醛经右心室灌沈后固定，制成光镜标本：６只麻醉后，快速开胸取肺，称重后投入液氮速冻。通过检测肺系数、肺含水量、肺组织匀浆髓过氧化物酶含量等来评价黄芩清肺饮及加味桔梗汤对ＬＰＳ致急性肺损伤大鼠的治疗作用。

２．２加昧桔梗汤治疗ＬＰＳ致急性肺损伤的机制研究

分组及造模方法等均同药效学实验。用生化法测定肺组织匀浆ＳＯＤ、ＭＤＡ及血清ＮＯ、ＮＯＳ、ｉＮＯＳ的含量；用双抗体夹心一酶联免疫吸附（ＡＢＣ．ＥＬＩＳＡ）法检测血清ＴＮＦ．ａ、］Ｌ－ｌｐ、ＩＬ－６、及ＩＬ．１０的含量：用Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ及免疫组织化学法测定肺组织ＮＦ．ｒ．Ｂ的蛋白表达；用ＲＴ－ＰＣＲ法测定肺组织ＴＬＲ４ｍＲＮＡ的表达。

结果

１理论研究

ＡＬｌ的发生发展与中医肺之生理病理密切相关：ＡＬｌ病位在肺；邪毒袭肺、肺失宣降是ＡＬＩ发生的病理基础；Ｊ下邪交争、内生之毒续生，毒邪壅肺、气机逆乱是ＡＬｌ加重的病理环节；治节失司、肺不主气是ＡＬｌ转危之关键；宣肺解毒是ＡＬｌ早期阶段的重要治疗原则；以宣肺解毒法为指导思想的加味桔梗汤顺应肺臧生理、契合病机，可有效改善ＡＬｌ时肺脏功能失调。

２实验研究

通过以上实验得到以下结果：

１．中性粒细胞于肺内“扣押”是ＬＰＳ致急性肺损伤的启动及进行阶段中的早发事件，其引起的肺血管内皮细胞、肺泡上皮细胞广泛损伤是导致肺通透性增加，肺水肿及微血栓形成的关键所在；

２．ＬＰＳ致急性肺损伤发生发展过程中存在氧化／抗氧化平衡紊乱；

３．ＬＰＳ致急性肺损伤发生发展过程中存在致炎反应／抗炎反应平衡紊乱：ＴＮＦ－ａ、ＩＬ．１Ｂ大量、快速表达是单核巨噬细胞活化的分子标志；ＩＬ．１０在ＡＬＩ早期的高表达预示着机体的免疫功能紊乱：

４．ＬＰＳ致急性肺损伤时，存在ＮＦ．ＫＢ由细胞浆向细胞核的转移，其激活在ＬＰＳ致急性肺损伤发病中起核心作用；

５．Ｔｏｌｌ样受体不仅是抵抗外邪侵袭的第一道防线，而且是机体先天免疫与继发免疫之问的桥梁。ＡＬＩ时，肺组织ＴＬＲ４ｍＲＮＡ的大量表达是加重ＡＬｌ的病理过程中急性炎症反应网络的重要扳机点之一：

６．以宣肺解毒为指导思想的加昧桔梗汤治疗ＬＰＳ致急性肺损伤的机制主要为：

（１）减少中性粒细胞在肺内的黏附和聚集，从而减少其对肺组织的浸润；

（２）促进机体产生抗氧化因予，提高机体对氧自由基的清除能力，调节氧化／抗氧化平衡；（３）显著降低ＬＰＳ致急性肺损伤大鼠血清中致炎因子ＴＮＦ．ａ、ＩＬ－ｌｌＢ及抗炎因子

中文摘要３ＩＬ－１０的含量；

（４）抑制ＬＰＳ致急性肺损伤肺组织ＮＦ．心ｐ６５由胞浆向胞核转移，阻断众多炎性因子的表达；

（５）抑制ＬＰＳ致急性肺损伤大鼠肺组织ＴＬＲ４ｍＲＮＡ基因表达，调控ＮＦ．心等转录因子的激活。

结论

综合理论及实验研究结果，得出以下结论：

１宣肺解毒治疗早期ＡＬｌ的可行性及科学性

基于中医肺藏象理论与ＡＬｌ发病之间的关系，认为ＡＬｌ病位在肺，病机关键是邪毒犯肺、肺失宣降：而全身气血津液运行输布障碍，热、瘀、毒、水（或痰、湿、饮）等病理产物骤生，壅阻肺络、气机逆乱是其发展加重的核心环节；正虚邪盛、治节失司、肺不主气是ＡＬＩ转危之关键。这一中医学发病机制提示肺生理功能在ＡＬｌ发生发展中起重要作用，并启发了治疗ＡＬＩ早期阶段的根本原则——宣肺解毒。总之，从理论上讲，早期宣肺解毒的治疗原则不但突破了过于强调热毒致病的传统理论，而且是仲景治疗肺系疾病时重在宣肺祛邪这一指导思想的继承和发扬。

２中医学肺藏象理论与ＡＬｌ相关病理环节的现代生物学基础

Ａｕ发病过程中伴氧自由基大量生成、炎症因子的过度表达、细胞凋亡等多种病理反应，其复杂性表明，ＬＰＳ致急性肺损伤存在多种病理环节，临床应采用综合疗法，多靶点治疗原则。因此，深入系统研究ＴＬＲ４介导的内毒素信号转导途径不但为临床控制急性肺损伤时瀑链式炎症反应提供切入点，而且部分揭示了中医学肺卫相关、毒邪致病及肺主治节等宏观理论与Ｔｏｌｌ样受体通路这一微观层次的病理机制之间的生物学基础，构建了ＡＬｌ发病宏观病机与微观病机之间的桥梁。

３加味桔梗汤治疗ＬＰＳ致急性肺损伤的药理学机制

肺失宣降、邪毒壅肺、气机逆乱是ＡＬＩ的核心病理环节，而邪毒是导致ＡＬＩ损伤的重要因素。因此，在ＡＬＩ早期，应宣肺解毒、截断病程；宣肺以解毒，解毒以宣肺，恢复肺脏生理功能。另外，复方中药配伍的协同作用可体现在不同病理环节、不同靶点生物学效应等方面，加味桔梗汤能显著改善ＬＰＳ所致的肺水肿，能调控致炎反应／抗炎反应、氧化／抗氧化平衡及肺组织ＴＬＲ４ｍＲＮＡ基因表达等，对这些病理生理环节的干预作用可能是加味桔梗汤治疗ＡＬｌ的药理学机制。

关键词：核因子一１（Ｂ；急性肺损伤；加味桔梗汤；Ｔｏｌｌ样受体

宣肺解毒；炎症因子

４从Ｔｏｌｌ样受体通路探讨加味丰ｉ！ｉ梗汤治疗内毒索致急性肺．Ｉ；ｉ伤的作用帆制

ＡＢＳＴＲＡＣＴ

Ａｃｕｔｅｌｕｎｇｉｎｊｕｒｙ（ａｂｂｒｅｖｉａｔｅｄ嚣ＡＬｌ）ｒｅｆｅｒｓｔｏａｃｕｔｅｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｆａｉｌｕｒｅｗｉｔｈ

ｓｔｕｂｂｏｒｎｈｙｐｏｘｅｍｉａｉｎｄｕｃｅｄｂｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐｒｅｄｉｓｐｏｓｉｎｇｆａｃｔｏｒｓｅｘｃｅｐｔｃａｒｄｉｏｇｅｎｉｃｃａｕｓｅ．Ｔｈｅｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ

ｓａｔｉｓｆａｃｔｏｒｙｏｆＡＬＩｉｓａｎｆｒａｃｔｕｏｓｉｔｙａｎｄｉｓｎｏｔｃｏｍｐｌｅｔｅｌｙｅｌｕｃｉｄａｔｅｄｂｙｎｏｗ，ＳＯｔｈｅｒｅｉｓｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｎＯｍｅ髂ｕｒｅ，ｗｈｉｃｈｃａｓｅｆａｔａｌｉｔｙｉｓ５０％．Ａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｉｔｓｃｌｉｎｉｃａｌｍａｎｉｆｅｓｔａｔｉｏｎｓ，ＡＬＩｂｅｌｏｎｇｓｔｏｔｈｅＰｙｒｅｔｉｃｐｕｌｍｏｎａｒｙｓｙｎｄｒｏｍｅ，ｔｈｅＳｙｎｄｒｏｍｅｏｆＤｙｓｐｎｅａ，ｏｒ

ｐａｓｔｆｅｗＴｈｏｒａｃｉｃＲｅｔｅｎｔｉｏｎｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅ

ｙｅａｒｓ，ａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅＭｅｄｉｃｉｎｅ（ａｂｂｒｅｖｉａｔｅｄａｓＴＣＭ）．ＩｎｔｈｅｎｅｗｒｅｓｅａｒｃｈｏｆＡＬｌａｂｏｕｔｉｔｓｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ，ＴＣＭｒｅｓｅａｒｃｈｅｒｓｅｏｍｂｉｎａｔｅｄｍｅｔｈｏｄｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｄｉａｇｎｏｓｉｓｏｆｄｉｓｅａｓｅｓｗｉｔｈ

ａｎｄｓｉｇｎｓｔｏｔｒｅａｔＡＬｌｂａｓｉｎｇ

ＡＬｌ．ＳｏｉｔＷａｓｏｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆｓｙｍｐｔｏｍｓｔｈｅｔｈｅｏｒｙｏｆＰｙｒｅｔｉｃｔｏｘｉｃｉｔｙ，ｂｕｔｎｏｔｌｏｗｅｒｅｄｔｈｅｆａｔａｌｉｔｙｏｆｔｈｅｔｈｅｎｅｃｅｓｓａｒｙｔｏｌｕｃｕｂｒａｔｅｄＴＣＭｎｏｓｏｇｅｎｅｓｉｓｏｆＡＬｌ，ａｎｄｕｓｅｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｔｏｄｉｒｅｃｔｏｕｒｔｏｆｉｎｄｏｕｔｔｈｅｅｆｆｅｃｔｉｖｅｐｒｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｎｄｄｒｕｇｓ．

Ｎｏｗ，ｄａｔａｓｉｎｄｉｃａｔｅｔｈａｔ７０％－８０％ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｂａｃｔｅｒｉａｍｃａｕｓｉｎｇＡＬｌｉｓｇｒａｍ—ｎｅｇａｔｉｖｅ

ｂａｃｔｅｒｉｕｍ，ｗｈｉｃｈｍａｊｏｒａｎｔｉｇｅｎａｎｄｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ

４（ａｂｂｒｅｖｉａｔｅｄａｓｉｓｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｔｈｅ（ａｂｂｒｅｖｉａｔｅｄａｓＬＰＳ）ａｎｄｔｈｅＴｏｌｌ－ｌｉｋｅｒｅｃｅｐｔｏｒＴＬＲ４）ｉｓｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ

ｍｅｄｉａｔｅｄｂｙ

ｕｓｓｉｇｎａｌｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎｒｅｃｅｐｔｏｒｏｆＬＰＳ．ＳｏｔｈｅＴＬＲ４ｓｈｏｕｌｄｐｌａｙｓｉｇｎａｌｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎｐａｔｈｗａｙｏｆＬＰＳｏｆＡＬＩ．Ｔｈｅａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｉｎｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｔｈｅｏｒｙａｌｓｏｍａｄｅ

ｃｈａｎｇｅｔｈｅｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓｔｒａｔｅｇｙｆｒｏｍｄｉｓｅａｓｅｓｔｏｓｉｃｋｐｅｒｓｏｎａｎｄｔｈｉｎｋｈｉｇｈｌｙｏｆｔｈｅｒｅｌａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌｆｕｎｃｔｉｏｎｓｏｆＴＣＭｌｕｎｇｗｉｔｈＡＬｌ．Ｓｏｗｅｐｒｏｐｏｓｅｄｔｈａｔｉｍｐａｉｒｍｅｎｔｏｆｄｉｓｐｅｒｓｉｎｇ

ｔｈｅａｎｄｄｅｓｃｅｎｄｉｎｇｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆｔｈｅＱｉＷａｓｔｈｅＴＣＭｌｕｎｇ，ｖｉｄｏｕｓｔｏｘｉｃａｎｔｓｔａｇｎａｔｅｄｉｎｔｈｅｌｕｎｇａｎｄｃｏｎｆｕｓｅｄａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆ

ａｓｎｏｓｏｇｅｎｅｓｉｓａｓｏｆＡＬｌ．Ａｎｄｔｈｅｎ，ｔｈｅｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｉｎｃｏｎｆｏｒｍａｎｃｅｗｉｔｈｔｈｅ

ｏｆＡＬｌ．Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ，ｔｈｅ

ａｓｐｒｉｎｃｉｐｌｅｎａｍｅｄＸｕａｎｆｅｉＪｉｅｄｕ（ａｂｂｒｅｖｉａｔｅｄＸＦＪＤ）ＷａｓｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌｆｕｎｃｔｉｏｎｓｏｆｔｈｅｌｕｎｇａｎｄｉｎｌｉｎｅｗｉｔｈｔｈｅＤｅｃｏｃｔｉｏｎｏｆＲａｄｉｘＰｌａｔｙｃｏｄｉｗｉｔｈｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓａｄｄｉｔｉｏｎ（ｏｒＪｉａｗｅｉＪｉｅｇｅｎｇＤｅｃｏｃｔｉｏｎ，ａｂｂｒｅｖｉａｔｅｄ

ａＪＷＪＧＤ）ｇｕｉｄｅｄｂｙｔｈｅＸＦＪＤｐｒｉｎｃｉｐｌｅｍａｙｂｅｈａｖｅｓａｔｉｓｆａｃｔｉｏｎｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｅｆｆｅｃｔｏｎｔｈｅ

ＡＬｌｉｎｄｕｃｅｄｂｙＬＰＳ．

ｏｂｉｅｃｔｉｖｅｓ

１．ＴｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｒｏｌｅｏｆＬＰＳ

ｎｏｓｏｇｅｎｅｓｉｓｏｆＡＬＩ

２．ＴｏｅｘｐｌａｉｎｔｈｅｒｅｌａｔｉｏｎｓｂｅｔｗｅｅｎｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙａｎｄｐａｔｈｏｌｏｇｙｏｆＬｕｎｇｗｉｔｈＡＬｌａｎｄ

ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｍｏｄｅｍｓｉｇｎａｌｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎｐａｔｈｗａｙｍｅｄｉａｔｅｄｂｙＴＬＲ４ｉｎｔｈｅｂｉｏｌｏｇｙｆｏｕｎｄａｔｉｏｎａｂｏｕｔｔｈｅｐａｔｈｏｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＡＬｌａｎｄＶｉｓｃｅｒａｌｆｉｇｕｒｅｔｈｅｏｒｙｏｆＬｕｎｇ．

ｄｉｓｃｕｓｓｔｈｅｆｅａｓｉｂｉｌｉｔｙｏｆｔｈｅｐｒｉｎｃｉｐｌｅｎａｍｅｄａｓ３．Ｔｏ

４．ＴｏＯｐｅｎｔｈｅｉｎｈｉｂｉｔｅｄｌｕｎｇ－ｅｎｅｒｇｙｔｏｔｒｅａｔＡＬｌ．ｔｏｄｅｔｏｘｉｆｙｎｏｎａｇｅ（ｏｒＸｕａｎＦｅｉＪｉｅｄｕ，ａｂｂｒｅｖｉａｔｅｄａｓＸＦＪＤｌｓｔｕｄｙｔｈｅｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＪ形，Ｇ＿Ｄｆｒｏｍｔｈｅｈｏｌｉｓｍ，ｃｅｌｌａｎｄ

ＡＢＳＴＲＡＣＴ５ｍｏｌｅｃｕｌａｒｌｅｖｅｌｔｏｏｆｆｅｒｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｇｒｏｕｎｄｗｏｒｋｔｏｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃａｌｌｙｐｒｅｖｅｎｔａｎｄｃｕｒｅＡＬｌ．

Ｍｅｔｈｏｄｓ

１ＬｉｔｅｒａｔｕｒｅｓＳｔｕｄｙ

ｏｎＢａｓｉｎｇｔｈｅｒｅｌａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅＦｉｓｅｅｒａｌｆｉｇｕｒｅｔｈｅｏｒｙｏｆＬｕｎｇｗｉｔｈＡＬｌａｎｄｔｈｅ

ｏｕｔｌｉｎｅｏｆＳｙｍｐｔｏｍｃｏｍｐｌｅｘａｎｄｔｒｅａｔｍｅｎｔａｂｏｕｔｔｈｅｍｅｔｈｏｄｎａｍｅｄａｓｏｐｅｎｉｎｇｔｈｅｉｎｈｉｂｉｔｅｄｌｕｎｇ－ｅｎｅｒｇｙｏｆＺｈａｎｇＺｈｏｎｇ／ｉｎｇｔｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｆｅａｓｉｂｉｌｉｔｙｏｆＸＦＪＤ，ａｎｄｄｉｓｃｕｓｓｔｈｅｔｈｅｏｒｙｆｏｕｎｄａｔｉｏｎｏｆＪＷＪＧＤｔｏ

２

２．１ｔｒｅａｔＡＬｌ，ＥｍｐｉｒｉｃａｌＳｔｕｄｙＰｈａｒｍａｅｎｄｙｎａｍｉｃｓＳｔｕｄｙｏｆＪＷＪＧＤ

９０ｍａｌｅＳｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙｒａｔｓｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙｄｉｖｉｄｅｄ

Ｑｉｎｇｒｅｉｎｔｏ４ｇｒｏｕｐｓ，９ｒａｔｓｉｎｎｏｒｍａｌｇｒｏｕｐ，２７ｒａｔｓｉｎｍｏｄｅｌｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，２７ｒａｔｓｉｎ

ＲａｔｓｉｎＪｉｅｄｕｇｒｏｕｐ，２７ｒａｔｓｉｎＸＦＪＤｇｒｏｕｐｓ ｔｈｅＱｉｎｇｒｅＪｉｅｄｕｇｒｏｕｐａｎｄＸＦＪＤｇｒｏｕｐｗｅｒｅｉｎｔｒａｇａｓｔｒｉｃａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎｗｉｔｈＨｕａｎｇｑｉｎＱｉｎｇｆｅｉＤｅｃｏｃｔｉｏｎ（ｃｏｍｐｏｓｅｄｗｉｔｈＳｃｕｔｅｌｌａｒｉａ，Ｇａｒｄｅｎｉａｆｌｏｒｉｄａ，ｅｔ以）ａｎｄＪＷＪＧＤ（ｃｏｍｐｏｓｅｄｂｙＨｕａｎｇｑｉｎＱｉｎｇｆｅｉＤｅｃｏｃｔｉｏｎａｄｄｅｄ．＾ｅｇｅｎｇＤｅｃｏｃｔｉｏｎ）ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｔｈｅｏｔｈｅｒｔｗｏｇｒｏｕｐｓｗｅｒｅｉｎｔｒａｇａｓｔｔｉｃａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎｗｉｔｈｅｑｕａｌｖｏｌｕｍｅｉｓｏｔｏｎｉｃＮａｃｈｌｏｒｉｄｅ

ＸＥＪＤｆｏｒ６ｄａｙｓ．Ｏｎｔｈｅ

ｗｅｒｅｉｎｊｅｃｔｅｄｗｉｔｈｓｅｖｅｎｔｈａｄａｙ，ｒａｔｓｉｎｔｈｅｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ，ＱｉｎｇｒｅＪｉｅｄｕｇｒｏｕｐａｎｄｖｅａａｆｅｍｏｒａｌｉ，ａｎｄｇｒｏｕｐｇｒｏｕｐｓ

ｏｆａｌｌ

ｏｎｓｉｎｇｌｅｄｏｓｅｏｆＬＰＳ（４．９ｍｇ／ｋｇ）ｂｙｔｈｅｎｏｒｍａｌｗｅｒｅｉｎｊｅｃｔｅｄｗｉｔｈｅｑｕａｌｖｏｌｕｍｅＮ．ａＲｅｒｔｈａｔ，ｏｂｓｅｒｖｉｎｇａｎｄｒｅｃｏｒｄｉｎｇｔｈｅｓｙｍｐｔｏｍｓｔｈｅｒａｔｓ．Ｒａｔｓｏｆｔｈｅｏｔｈｅｒｔｈｒｅｅｇｒｏｕｐｓｅｘｃｅｐｔｔｈｅｎｏｒｍａｌｇｒｏｕｐｗｅｒｅｋｉｌｌｅｄｒａｎｄｏｍｌｙ

２ｈ．４ｈｔｈｅａｎｄ６ｈａｆｔｅｒｉｎｊｅｃｔｅｄｗｉｔｈＬＰＳ．Ｔｈｒｅｅｒａｔｓｏｆｅａｃｈｇｒｏｕｐｗｅｒｅｉｒｒｉｇａｔｅｄｂｙｌｅｆｔｖｅｎｔｒｉｃｌｅｗｉｔｈ４％ｐａｒａｆｏｒｍｔｏｆｉｘ．ａｎｄｔｈｅｎｍａｋｉｎｇｔｈｅｍｉｎｔｏｌｉｇｈｔｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅｓａｍｐｌｅ，ｔｈｅｏｔｈｅｒ６ｒａｔｓｗｅｒｅｋｉｌｌｅｄａｆＩｅｌ＇ａｎｅｓｔｈｅｔｉｚｅｄａｎｄｏｐｅｎｔｈｅｔｈｏｒａｘ

ｔｈｅｌｉｑｕｉｄｔｏｏｂｔａｉｎｔｈｅｌｕｎｇ，ｔｈｒｏｗｉｎｇｔｈｅｌｕｎｇｉｎｔｏｎｉｔｒｏｇｅｎａｆｔｅｒｗｅｉｇｈｅｄ．ＷｅｅｖａｌｕａｔｅｄｔｈｅｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｅｆｆｅｃｔｏｆＨｕａｎｇｑｉｎＱｉｎｇｆｅｉＤｅｃｏｃｔｉｏｎａｎｄＪＷＪＧＤａｂｏｕｔＡＬｌｂｙｍｅａｓｕｒｉｎｇｔｈｅｌｕｎｇｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ，ｌｕｎｇｗａｔｅｒｃｏｎｔｅｎｔ，ＭＰＯａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｌｕｎｇｔｉｓｓｕｅｈｏｍｏｇｅｎａｔｅ．

２．２ＭｅｃｈａｎｉｓｍＳｔｕｄｙｏｆＪＷＪＧＤ

ｗｉｔｈｔｈｅｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃｓｓｔｕｄｙ．Ｔｈｅｇｒｏｕｐｉｎｇａｎｄｍｏｄｅｌ－ｍａｄｅｍｅｔｈｏｄｓｗｅｒｅｓａｍｅ

ｔｉｓｓｕｅＵｓｉｎｇｔｈｅｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙｍｅｔｈｏｄｔｏｍｅａｓｕｒｅｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆＳＯＤａｎｄＭＤＡｏｆｌｕｎｇ

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上篇文献综述一Ｔｏｌｌ样受体与内毒素信吁转导

上篇文献综述

综述一Ｔｏｌｌ样受体与内毒素信号转导

摘要：Ｔ０ｌｌ样受体（ｔｏｌｌ．１ｉｋｅｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，ＴＬＲｓ）是新近发现的先天免疫系统中的细胞跨膜受体及模式识别受体之一，在急性炎症反应、细胞信号转导及细胞凋亡中起重要作用。ＴＬＲＳ一旦与其特异的配体结合，便可激活信号转导级联，导致ＮＦ－ｖ。Ｂ和ＡＰ．１等激活和免疫反应基因表达；ＴＬＲ４是内毒素跨膜信号转导的关键受体，这一发现使我们对内毒素信号转导通路的认识前进了一大步。本综述首先简要概述了ＴＬＲｓ的发现、分类及其免疫学意义，进一步阐释了ＴＬＲ４介导的内毒素信号转导通路并分析了其研究意义与前景。

关键词：Ｔｏｌｌ样受体；先天免疫；内毒素；信号转导

世界上的多细胞生物都生活在滋生有大量微生物的环境中，其中一些是病原微生物，多细胞生物在长期进化过程中，演化出一套复杂的抗感染系统，包括天然免疫系统和获得性免疫系统。先天免疫系统是抵御许多微生物、真菌和病毒等病原体的第一道重要防线。近年研究发现，Ｔｏｌｌ样受体在先天免疫中发挥主导作用，可识别病原相关分子模式（ｐａｔｈｏｇｅｎａｓｓｏｃｉａｔｅｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｐａｔｔｅｒｓ，ＰＡＭＰｓ），介导多种免疫细胞，激活ＮＦ－ｖ．．Ｂ、ＭＡＰＫ等表达免疫调节相关蛋白，从而发挥免疫调节作用。由于ＴＬＲｓ既能调节先天性免疫，又能直接参与启动获得性免疫反应，因此对免疫系统有重要的影响，这将成为治疗包括败血病、自身免疫性疾病及癌症等多种疾病的新靶点。

ｌＴｏｌｌ蛋白——价导天然免疫的古老家族成员

最早发现Ｔｏｌｌ蛋白时，认为它是一种参与果蝇早期胚胎发育过程的必需蛋白成分，若该蛋白缺失，相应的背腹部体轴细胞则不能发育，胚胎将缺少中胚层及整个神经系统而死亡。上世纪９０年代中期，又发现１＇ｏｌｌ蛋白在果蝇幼虫及成虫的天然免疫应答中亦扮演重要角色：Ｔｏｕ蛋白信号途径的活化，可促使果蝇的幼／成虫分泌各种抗微生物感染的多肽；在成体果蝇，Ｔｏｌｌ与配体结合能激活胞浆内的转录因子ｄｏｒｓａｌ，诱导针对微生物病原体的宿主防御反应，ｄｏｒｓａｌ及抑制物ｃａｃｔｕｓ与哺乳动物转录因子ＮＦ．ｒ，Ｂ及抑制物ＩＩｃＢ有同源性，激活ｄｏｒｓａｌ／ＮＦ．诏途径的果蝇／哺乳动物细胞跨膜受体Ｔｏｎ和ｌＬ．１ｒ的胞浆结构域也高度保守【ｌ】，因此，Ｔｏｌｌ．ｄｏｒｓａｌ途径是历经数亿年演化而仍然保存的宿主防御机制。尽管哺乳动物和果蝇的物种亲缘关系十分遥远，其细胞仍有可能保留Ｔｏｌｌ蛋白。于是，众多学者对此进行了孜孜不倦的探索。１９７７年，Ｊａｎｅｗａｙ和Ｍｅｄｚｈｉｔｏｖ等１２】发现了第一个存在于人细胞表面的Ｔｏｌｌ样蛋白，并指出它对机体免疫特别是感染免疫的重要性。迄今为止，已克隆出１２种哺乳类Ｔｏｌｌ样受体，每一种受体能够识别化学结构不同的ＰＡＭＰｓ，并能直接启动有效的抗感染机制，介导重要的免疫调节作用。

从ＴｏＩｌ样受体通路探ｉ，Ｉ自ｎ味桔梗汤治疗内毒索致急性肺损伤的作用机制

２Ｔｏｌｌ样受体的免疫学意义

２．１识别病原微生物的跨膜受体家族

人们曾担心，病原体不断地进化、突变会不会使天然免疫识别的有效性逐步减弱呢？然而，ＴＬＲｓ的发现则彻底改变了这一看法。与Ｔ、Ｂ细胞抗原受体对表位高度特异的，个性化识别相反，人及哺乳动物Ｔｏｌｌ系统识别病原微生物的“共性”。如革兰氏阴性菌（Ｇ一菌）种类繁多，它们之间的成份差别很大，但内毒素脂多糖（１ｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ，ＬＰＳ）为Ｇ一菌胞壁所共有，它包括有种闻差异的多糖和相同的脂质Ａ，ＴＬＲ４仅针对公有的脂质Ａ进行识别，并可激活多种细胞免疫。由于脂质Ａ是所有Ｇ一菌共有的特质结构，并且在多细胞生命体中不存在，因此，对哺乳动物而言，脂质Ａ就成为Ｇ一菌的标志。Ｔｏｌｌ系统在对具体某种Ｇ一菌起反应时，超越了它的个性特征，而只是把它当作一类对机体有害的微生物对待。这种具有脂质Ａ类似性质的物质，即存在于细胞壁，为多种微生物所共有的一类分子结构称之为病原相关分子相关结构ＰＡＭＰｓ【３】，其化学性质多属糖脂化合物，一般不为多细胞生物体所有。迄今发现的Ｔｏｌｌ系统配体都属于ＰＡＭＰｓ，如Ｇ＋菌的肽聚糖，磷壁酸，分支菌属的阿拉伯甘露糖脂（ＬＡＭ）以及细菌及其它微生物脂蛋白中的脂肪酰化基团，这都属ＴＬＲ２配体，再加上Ｇ一菌的ＬＰＳ，则涵盖了多数对人体致病的微生物类别。

研究发现，Ｔｏｌｌ样受体是一类重要的模式识别受体，能识别相应的ＰＡＭＰｓ，引起炎性介质的释放，抗原提呈细胞表达ＣＤ８０等，并最终激活获得性免疫系统。由此可见，哺乳动物Ｔｏｌｌ样受体的一项重要生理功能就是通过识别病原体所携带的特有信息（如ＰＡＭＰｓ），感知病原微生物的存在并及时对之免疫炎症反应。而且，这种作用并不局限于细胞膜。有研究表明在微生物与宿主细胞相互作用的最初一段时间，Ｔｏｌｌ样受体似乎是在跟踪着病原体，在小鼠巨噬细胞吞噬金黄色葡萄球菌的全过程中分散于细胞膜表面的ＴＬＲ２跟随细菌从细胞膜转移并富集到吞噬体质膜上，直至数分钟才消剐４１。所以，Ｔｏｌｌ受体是机体发现并抵御许多微生物、真菌和病毒等病原体的第一道重要防线；不仅如此，通过Ｔｏｌｌ样受体产生的免疫炎症反应也是机体获得性免疫的前哨。

２．２天然免疫和获得性免疫的过渡桥梁

人及哺乳动物的Ｔｏｌｌ样受体不仅识别病原体，而且通过胞浆ＴＨ功能区向胞内传递信号，激活ＮＦ－ｒ，Ｂ、ＡＰ．１等转录因子从而激活多种细胞，启动一系列免疫炎症反应，清除病原微生物。这些效应包括产生多种能扩大免疫炎性反应，增强杀菌作用的细胞因子，已报道的有ＩＬ．１、ＩＬ．６、ＩＬ．８、ＩＬ．１２、ＴＮＦ．ａ等１３卅。此外，多种微生物脂蛋白还能通过巨噬细胞的Ｔｏｌｌ样受体激活，诱导一氧化氮合成酶（ＮＯＳ）的转录，产生ＮＯ，并触发胞内杀菌机：Ｎｔｎ。例如：在个体水平，Ｃ３Ｈ／ＨｅＪ小鼠极易患Ｇ一菌败血症，是因为它的ＴＬＲ４基因发生点突变，导致ＴＬＲ４ＴＨ结构域第７１２位的脯氨酸被组氨酸所取代，阻断了胞内信号转导，从而无法有效激活细胞防御机制所致【７＇８】。越柬越多的研究表明，Ｔｏｌｌ样受体介导的吞噬细胞激活是天然免疫的重要形式，在感染早期发挥保护性作用。

虽然天然免疫是多细胞生物抵抗病原微生物的第一道快捷而有效的防线，同时也参与获得性免疫反应的激活，在生物体的免疫应答中起重要作用。然而天然免疫反应是一

上籍文献综述一Ｔｏｌｌ样受体与内毒索信蟹转导１３把“双刃剑”，其过度激活产生的大量炎症因子对机体反而有损害作用。如博氏疏螺旋体是莱姆病的病原体，研究表明其脂蛋白Ｐａｍ３ｃｙｓ基团激活的ＴＬＲ２能促进莱姆关节炎的炎症反应１９】；内毒素休克患者受持续大量Ｇ一菌或ＬＰＳ作用，体内ＩＬｌ、ＴＮＦ－ｕ和ｌＬ８等炎性因子释放水平短时问内急剧升高，产生“炎症瀑饰”效应，可引起急性肺损伤、急性呼吸窘迫综合征以及多器官功能衰竭，直到死亡；相反，Ｔｏｌｌ样受体发生改变的动物如Ｃ３删ｅＪ和Ｃ５７ＢＬ／ｌＯＳｃＣｒ品系小鼠，其细胞表面ＬＰＳ受体（现已明确是ＴＬＲ４）在关键位点发生突变或基因缺失，便可酣受高剂量ＬＰＳ攻击【６．９ｌ。这一理论不但对临床探讨先天免疫性疾病提供新的理论依据，亦为严重感染性疾病如内毒素性休克、全身炎症反应综合征（ｓｙｓｔｅｍｉｃｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｒｅｓｐｏｎｓｅｓｙｎｄｒｏｍｅ，ＳＩＲＳ）及多器官功能障碍综合征（ｍｕｌｔｉｐｌｅｏｒｇａｎｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎｓｙｎｄｒｏｍｅ，ＭＯＤＳ）等的防治提供了新的思路和着眼点。３ＴＬＲ４介导的内毒素信号转导

ＬＰＳ的特点与致病性

细菌内毒素存在于Ｇ一的胞壁外膜，ＬＰＳ是内毒素的主要成分。ＬＰＳ分子量约在ｌＯ３．１万－－２０万。包括。一特异性侧链、核心区和脂质Ａ三个成分，其中脂质Ａ在不同Ｇ一菌株中结构相同，在引起ＡＬｌ中起关键性始动作用【Ⅲ。流行病学资料表明，革兰阴性菌是急性肺损伤、急性呼吸窘迫综合征（ａｃｕｔｅｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｄｉｓｔｒｅｓｓｓｙｎｄｒｏｍｅ，ＡＲＤＳ）、脓毒症、脓毒性休克的主要致病因素之一￡¨一７１；因此，在基础及临床研究中，通常应用ＬＰＳ复制感染性损伤动物模型【ｌｓｌ。

ＬＰＳ具有激活免疫应答的能力，可使免疫细胞活化，分泌细胞因子。ＬＰＳ所引起的病理过程分整体和细胞两个方面［１６，１７ｌ：在整体水平ＬＰＳ可激活补体级联反应，导致凝血系统活化、纤维蛋白形成增加，凝血系统功能障碍等等，这些改变均可导致临床患者发生弥散性血管内凝血（ｄｉｓｓｅｍｉｎａｔｅｄｉｎｔｒａｖａｓｃｕｌａｒｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ．ＤＩＣ）；在细胞水平ＬＰＳ可刺激一些效应细胞产生活性因子，即ＬＰＳ在肌体内激活单核／巨噬细胞、中性粒细胞、内皮细胞、其他多种组织的实质细胞及补体系统，先后诱导大量ＴＮＦ－ａ、ＩＬ－Ｉ、ＩＬ－２、ＩＬ６、ＩＬ８、ｌＬ．１２等细胞因子和黏附分子及ＮＯ等炎性介质产生和释放，引起内皮细胞损伤和屏障功能（即通透性）改变，导致全身性炎症反应综合征和脓毒症发生，严重者可导致低血压、中毒性休克、ＤＩＣ、ＡＲＤＳ、ＭＯＤＳ，甚至死亡。

大量临床资料表明：某些抗生素不但不能抑制内毒素的生物学活性ｆＩ９】，而且在杀死细菌的同时，死亡的细菌破裂的细胞壁释放出大量内毒素【２０“２４］，使治疗该类疾病的难度增加。而ＬＰＳ跨膜信号转导是引起细胞效应的关键，所以ＬＰＳ的信号转导途径将成为治疗严重的感染性疾病的新的突破点。

３．２ＴｕＨ是ＬＰＳ的受体或信号转导分子

１９８６年，Ｕｌｅｖｉｔｃｈ实验室发现并克隆了ＬＰＳ结合蛋白（ＬＰＳｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ，ＬＢＰ）

【２５ｌ；１９９０年，又发现ＣＤｌ４是ＬＰＳ的受体，并由此认为ＣＤｌ４和ＬＢＰ在ＬＰＳ的效应机制中具有重要作用［２６，２７１。ＣＤｌ４与ＬＰＳ结合似乎是通过ＬＢＰ将ＬＰＳ转运给ＣＤｌ４来实现的。这样就有两种作用模式：ＣＤｌ４阳性细胞如：巨噬细胞，中性粒细胞等，ＬＰＳ与ＬＢＰ

１４从Ｔｏｌｌ样受体通路探讨加味桔梗汤治疗内毒索敛急性肺损伤的作用机制结合再与膜ＣＤｌ４相互作用后细胞即被激活。相反，ＣＤｌ４阴性细胞如；内皮细胞等，首先ＬＰＳ、ＬＢＰ和可溶性ＣＤｌ４结合成复合物后再通过一些未知的受体来激活细胞。但由于ＣＤｌ４与多种传递信号的跨膜受体不同，缺乏跨膜区和胞浆内段，因此不能直接和胞内进行信号交流。人们推测，ＬＰＳ受体属于“多构件受体”，包括至少两种以上的蛋白质；ｃＤｌ４是主要的配基结合元件，而其他蛋白质则作为跨膜受体而介导ＬＰＳ与ＣＤｌ４结合后的跨膜信号转导１２８２９１。Ｐｏｌｔｏｒａｋ［３０】通过对ＬＰＳ位点位于２．６Ｍｂ物理大小的遗传问隔区域高密度测序，发现仅有一个基因被鉴定即基因编码ＴＬＲ４。同时Ｐｏｌｔｏｒａｋ等【３ｌｊ从Ｃ３Ｈ，’ＨｅＪ和ｃ３ＨｍｅＮ小鼠中克隆了ＴＬＲ４ｃＤＮＡ，并发现Ｃ３Ｈ／ＨｅＪＴＬＲ４基因第三个外显子有点突变存在，使ＴＬＲ４受体胞内区不易变化的脯氨酸残基由组氨酸所代替。在Ｃ５７ＢＬ／１０ＳｃＣｒ小鼠，ＴＬＲ４位点也发现有缺失突变。因此，有理由认为Ｃ３Ｈ／ＨｅＪ和Ｃ５７ＢＬｌｌ０ＳｃＣｒ鼠对ＬＰＳ耐受是由于ＴＬＲ４基因突变所致，ＴＬＲ４是人们长期寻找的ＬＰＳ受体，这些研究是ＬＰＳ研究领域中的一个重要里程碑。

３．３ＴＬＲ４的下游信号转导

３．３．１激活ＮＦ． ①的信号过程

ＮＦ．ｒＢ是一类ＤＮＡ转录调控蛋白，是一种具有多向性转录调节的蛋白，能与多种基因启动予部位的ｒ．Ｂ位点发生特异性结合并增强基因转录，其活性上调可致包括ＴＮＦ．ａ、ＩＬ．１、ＣＩＮＣ等在内的一百多种与细胞免疫反应有关的物质的生成增多。静息状态下，ＮＦ．ＫＢ与其抑制因子（ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｏｆＮＦ．ｒ，Ｂ，ＩＫＢ）结合在一起，形成没有活性的三聚体，存在于细胞质中。在ＴＮＦ－ａ、白介素、细菌、病毒、ＬＰＳ、支原体脂蛋白、有丝分裂原、过氧化物、蛋白激酶ｃ激活物及紫外线辐射等内外源性因素的刺激下，诱导Ｉ姻ｓ降解和ＮＦ—ｒ，Ｂ激活，启动基因转录，合成ｍＲＮＡ，由ｍＲＮＡ翻译成蛋白质，调节多种基因的转录ｌｊ“。

总之，如下图所示：ＴＬＲ４介导的ＬＰＳ信号转导过程是ＬＰＳ首先与ＬＢＰ、ＣＤｌ４构成ＬＰＳ．ＬＢＰ．ＣＤｌ４复合物后与人单核吞噬细胞ＴＬＲ４结合触发胞内级联信号传导反应，首先在ＴＬＲ４胞浆区段与一个叫做衔接子（ａｄａｐｔｅｒ）的蛋白ＭｙＤ８８相互作用，然后依次激活ＩＬ．１受体相关激酶（ＩＲＡＫ）、肿瘤坏死因子受体相关因子．６（ＴＲＡＦ６）、ＮＦ．ＫＢ诱导激酶（ＮＩＫ）和ｑＢ．ＩＫＢ激酶，最终使ｂｏＢ激酶磷酸化而降解，激活的ＮＦ．ｒ．Ｂ移入核内，启动免疫和炎症反应基因转录激活。

３．３．２ＴＬＲ４与ＭＡＰＫ信号通路

丝裂原激活蛋白激酶（ｍｉｔｏｇｅｎ－ａｃｔｉｖａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅ，ＭＡＰＫ）是细胞内重要的信号分子。Ｗｅｉｎｓｔｅｉｎ等【３３】发现ＬＰＳ刺激巨噬细胞导致胞内多个蛋白质磷酸化，其中两个磷酸化蛋白质被确认为是ＭＡＰＫ超家族成员：ＥＲＫＩ和ＥＲＫ２。除ＥＲＫ外，ｐ３８ＭＡＰＫ也能在ＬＰＳ的作用下发生磷酸化。有研究发现，ＬＰＳ刺激肺巨噬细胞后，ｐ３８ＭＡＰＫ会迅速发生核移位，通过转录因子磷酸化诱导ＴＮＦ．ａ的基因转录。以上研究提示；在ＬＰＳ通过ＴＬＲ４传递信号的通路中，ＭＡＰＫ也参与了该信号传递过程。但遗憾的是目前仍不清楚ＬＰＳ通过ＴＬＲ４将信号转导至胞内并导致各条ＭＡＰＫ通路激活的确切机制，ＴＬＲ４作为介导ＬＰＳ信号的一个重要分子，其对ＭＡＰＫ的调控机制已引起广泛的关注，相信这方面研究不久将可能取得重要进展。

上篇文献综述一Ｔｏｌｌ样受体与内毒索信号转导

ＴＬＲ４介导的ＬＰＳ信号转导通路

４展望

借助天然免疫的研究成果，ＴＬＲ４的发现和研究使人们在ＬＰＳ的作用机理研究方面取得了突破性进展。目前己阐明：ＬＢＰ与ＬＰＳ结合并将其转运到ＣＤｌ４上，然后通过ＴＬＲ４将信号转导至细胞内。但现在对这些作用的理解还非常肤浅，尚不能完全理解这些分子之间是怎么相互作用的，其作用的确切机制是什么，还有其他分子或其他因素参与吗？而且现在的结论多数是建立在体外转染实验的基础上，获得非转染条件下这些分子之问的作用方式仍是所面临的课题，仍有许多问题还有待解决。因此，未来研究可能会在以下几方面丌展工作：

①目前，我们大多认为内源性ＬＰＳ信号转导仅仅通过ＴＬＲ４，但也不排除ＬＰＳ利用其他受体进行信号转导的可能。最近，有报道发现ＴＬＲｌ，ＴＬＲ９亦参与了ＬＰＳ的细胞

激活［３４，３５１，提示应对其他Ｔｏｌｌ家族成员在ＬＰＳ信号转导中的作用如ＴＬＲ２等及其与ＴＬＲ４

１６从Ｔｏｌｌ样受体通路探讨加味桔梗汤治疗内毒索致急性肺损伤的作用机制的关系进行深入研究；

（至）ＴＬＲ４是否仅仅参与ＬＰＳ的识别和信号转导，也不排除参与其他微生物的识别和信号转导的可能，这方面仍需作进一步的探讨；

③ＬＰＳ通过ＴＬＲ４传递信号的确切机制，可能会成为新近研究的热点。如：ＴＬＲ４的膜受体复合物的鉴定，ＴＬＲ４的胞内作用目标，ＬＰＳ通过ＴＬＲ４激活ＭＡＰＫ信号通路的确切机制，信号通路Ｉ’日Ｊ的相互关系等；

④以ＴＬＲ４为作用靶点，阻断ＬＰＳ信号转导途径，也是该领域的研究热点。在ｌ临床工作中，ＴＬＲ４将成为Ｇ一感染性疾病治疗的新靶点：首先，可以研制抗ＴＬＲ４的单克隆抗体阻断ＬＰＳ信号转导；其次，可构建ＴＬＲ４缺陷基因并转染诸如巨噬细胞、中性粒细胞等炎症反应细胞，这亦可能是治疗Ｇ一所致脓毒症的一项有效措施；最后，可通过诸如酵母双杂交系统等新技术，发现一些能与ＴＬＲ４相互作用的多肽，如果该多肽能抑制ＴＬＲ４的信号转导，这将对Ｇ一所致脓毒症等疾病的治疗提供全新有力的理论基础。

上篇文献综述一Ｔｏｌｌ样受体与内毒索信号转导１７

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ｔｏｂｒａｍｙｃｉｎｉｎＦＪ．Ａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔｓｏｆｔｈｅａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓｃｅｆｌａｚｉｄｉｍｅａｎｄｐｏｒｃｉｎｅｅｎｄｏｔｏｘｉｎｓｈｏｃｋ：ａｒｅｔｈｅｙｒｅａｌｌｙａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ［Ｊ］，Ｃｒ／ｔ

Ｃａｒｅ，２００４，８（２）：１４０

［２１ＪＧｏｓｃｉｎｓｋｉＧ，ＬｉｐｃｓｅｙＭ，ＥｒｉｋｓｓｏｎＭ，ｅｔａＬＥｎｄｏｔｏｘｉｎｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎａｎｄａｎｔｉ

ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔｓｏｆｔｏｂｒａｎａｙｃｉｎａｎｄｃｅｆｌａｚｉｄｉｍｅｉｎｐｏｒｃｉｎｅｅｎｄｏｔｏｘｉｎｓｈｏｃｋ［Ｊ］．Ｃｒｉｔ

Ｃａｒｅ，２００４，８（１）：３５

【２２】ＹａｍａｍｏｔｏＡ，ＳａｋａｉＴ，ＯｅｈｉａｉＭ，ｅｌａ１．Ａｕｇｍｅｎｔｉｎｇｅｆｆｅｃｔｏｆ

ｃａｕｓｅａａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓｏｎｅｎｄｏｔｏｘｉｕａｃｔｉｖｉｔｙｍａｙｓａｆｅｔｙｐｒｏｂｌｅｍ［Ｊ］．ＭｉｃｒｏｂｉｏｌＩｍｍｕｎｏｌ，２００４，４８（２）：９７

【２３】ＧｏｓｃｉｎｓｋｉＧ，ＬｉｐｃｓｅｙＭ，ＥｒｉｋｓｓｏｎＭ，ｅｌ

ｉｎａ１．Ａｎｔｉ—ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔｓｏｆｔｈｅａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓｅｎｄｏｔｏｘｉｎｓｈｏｃｋ：ａｒｅｔｈｅｙｒｅａｌｌｙａｎｔｉｃｅｆｌａｚｉｄｉｍｅａｎｄｔｏｂｒａｍｙｃｉｎｐｏｒｃｉｎｅ

—ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ７．Ａｕｔｈｏｒｓ’ｒｅｓｐｏｎｓｅ［Ｊ］．ＣｒｉｔＣａｒｅ，２００４，８（２）：１４１

【２４］周红，郑江，王浴生．感染性疾病治疗中抗生素诱导的内毒素释放研究进展［Ｊ】．解放军

药学学报，２００３，１９（１）：５９

［２５】ＴｏｂｉａｓＰＳ，ＳｏｌｄａｎＫ

ｒａｂｂｉｔＵｌｅｖｉｔｃｈＩＬｌ．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎｏｆａｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ－ｂｉｎｄｉｎｇａｃｕｔｅｐｈａｓｅｒｅａｃｔａｎｔｆｒｏｍＳｅｒｕｍ［Ｊ］．ＪＥｘｐＭｅｄ，１９８６，１６４（３）：７７７～７９３

ＰＳ，ｅｔａ１．ＣＤｌ４，ａｒｅｃｅｐｔｏｒｆｏｒｃｏｍｐｌｅｘｅｓｏｆ［２６】ＷｒｉｇｈｔＳＤ，ＲａｍｏｓＲＡ，Ｔｏｂｉａｓ

ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅａｎｄＬＰＳｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９０，２４９（４９７５）：１４３１～１４３３

【２７】ＳｃｈｕｍａｎｎＲＲ，ＬｅｏｎｇＳＲ，ＦｌａｇｇｓＧＷ，ｅｔａＬＳｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆ

ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９０，２４９（４９７５）：１４２９－１４３１

［２８】ＵｌｅｖｉｔｅｈＩＬＩ，ＴｏｂｉａｓＰＳ．Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎｏｆｅｎｄｏｔｏｘｉｎｂｙｃｅｌｌｓｌｅａｄｉｎｇｔｏｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ

ｓｉｇｎａｌｉｎｇ［Ｊ］．Ｃｕｒｔ

ｆ２９］ＤｏｗｎｅｙＯｐｉｎＩｍｍｕｎｏｌ，１９９４，６（１）：１２５～１３０ＪＳ，ＨｕｎＪ．Ｃｅｌｌｕｌａｒａｃｔｉｖａｔｉｏｎｍｅｃｈａｎｉｓｍｉｎｓｅｐｔｉｃｓｈｅｃｋ［Ｊ】．Ｆｒｏｎｔ

Ｂｉｏｓｃｉ，１９９８，３：ｄ４６８，－－４７６

【３０】ＰｏｌｔｏｒａｋＡ，ＳｍｉｍｏｖａｌＩ，Ｈｅ）（，ｅｌａ１．Ｇｅｎｅｔｉｃ

ａｓａａｎｄｐｈｙｓｉｃａｌｍａｐｐｉｎｇｏｆｔｈｅＬＰＳｌｏｃｕｓ：ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ

ＢｌｏｏｄＣｅｔｔｓｏｆｔｈｅｔｏｌｌ一４ｒｅｃｅｐｔｏｒｃａｎｄｉｄａｔｅｇｅｎｅｉｎｔｈｅｃｒｉｔｉｃａｌｒｅｇｉｏｎ［Ｊ］．ＭｏｌＤｉｓ，１９９８。２４（３）：３４０－－３５５

ＬＰＳｓｉｇｎａｌｉｎｇｉｎＣ３Ｈ／ＨｅＪ【３ｌ】ＰｏｌｔｏｒａｋＡ，Ｈｅ）（，ＳｍｉｍｏｖａＩ，“ａ１．Ｄｅｆｅｃｔｉｖｅ

Ｃ５７ＢＬ／１０ＳｃＣｒｍｉｃｅ：ｍｕｔａｔｉｏｎｓｉｎＴＬＲ４ａｎｄｇｅｎｅ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９８，２８２（５３９６）：２０８５～２０８８

ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎｒｅｃｅｐｔｏｒｓ

Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，２００５，７３（３）：【３２】ＪｅｙａｓｅｅｌａｎＳ，ＣｈｕＨＷｊＹｏｕｎｇＳＫ，ｅｔａ１．ＤｉｓｔｉｎｃｔｒｏｌｅｓｏｆｐａｔｔｅｒｎＣＤｌ４ａｎｄｔｏｌｌ—ｌｉｋｅｒｅｃｅｐｔｏｒ４ｉｎａｃｕｔｅｌｕｎｇ

１７５４—１７６３ｉｎｊｕｒｙ［Ｊ］．Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎａｎｄ

［３３｝姜勇，刘爱华，黄巧冰．ｐ３８ＭＡＰＫ参与ＬＰＳ诱导ＲＡＷ细胞ＴＮＦ—ａ基因表达的调控【Ｊ】．