HIV实验室检测研究进展和发展趋势

文献

　2003年10卷3期—65—

综述编译

HIV实验室检测研究进展和发展趋势

中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防与控制中心(北京100050)

魏　民综述　邵一鸣审校

[摘　要]　随着分子生物学技术的飞速发展,人类免疫缺陷病毒(HIV)的实验室检测技术也在不断更新。本

文着重阐述了HIV血清学第四代检测试剂盒的特点,应用抗体亲和力技术估计发病率,荧光实时定量PCR技术的应用以及基因芯片技术的发展趋势。

　　自从发现了人类免疫缺陷病毒(HIV)以来,人们就一直在想办法检测HIV,作为实验室诊断HIV感染的一个重要根据。断,IV体,间接地诊断IVV。近年来,,HIV的实验室检测也正发生着日新月异的变化。从聚合酶链反应(PCR)技术应用于HIV的检测,到荧光实时定量PCR的应用,再到基因芯片的应用,每一步变化,都给人们带来惊喜,都使人们对未来检测HIV的前景,以及最终控制艾滋病充满信心。现就近年来HIV实验室检测的研究进展和发展趋势综述如下。1　血清学试验1.1　血清学试验的发展

板,,,。第四代试剂,则在第三代p24抗原的检测,把HIV抗原和抗p24的抗体同时包被反应板,同

时检测血清中的HIV抗体和p24抗原,进一步缩短“窗口期”。与第三代试剂相比,第四代试剂检测窗口期大约平均缩短了4～5天。这里需要指出的是,国内外对“窗口期”的定义稍有不同,国内文献中,一般“窗口期”是指HIV感染到抗体阳转的一段时间,而英文文献中“窗口期”是指虽有HIV感染,但实验室检测为阴性的一段时间。本文采用英文文献的定义。第四代试剂已于1998年在欧洲注册使用。现在国际市场主要的第四代试剂有:VIDASHIVDUO(法国BioMerieux公司产),MurexHIVAg AbCombination(美国Abbott公司德国分部产),Enzymun2TestHIVCombi(美国Roche公司

血清学试验分为初筛和确认试验。最常用的初筛试验和确认试验分别是酶联免疫吸附试

验(ELISA)和免疫印迹试验(WB)。初筛用的第二代、第三代ELISA试剂在经过了第一代、

后,已经发展到第四代检测试剂[1～5]。1985年,美国批准使用第一代ELISA检测试剂,第一代

试剂主要以病毒裂解物或部分纯化的病毒抗原包被反应板,以检测血清中的抗体。由于包被的抗原不很纯,假阳性率较高,结果不令人满意。1990年,第二代试剂应运而生,该试剂使用基

德国分部产),EnzygnostHIVIntegral(德国

DadeBehring公司产)和Genscreen

PlusHIV

[3～5]

。Ag2Ab(美国Bio2Rad公司法国分部产)目前在美国,第四代试剂并未批准使用,不能销售,所以美国的一些公司在欧洲生产和销售第四代试剂。

第四代试剂在缩短窗口期的同时,我们也应该注意到,由于同时把抗原和抗体包被在反应板上,存在互相干扰的可能,检测的敏感性和

特异性可能都会受到影响。一般来讲,第四代试

因工程方法得到的重组抗原和合成肽包被反应

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剂检测p24抗原的敏感度(20～>100pg ml),不如单独检测p24抗原试剂的敏感度高

[3～5]

(3.5～10pg 。在Meier[6]发现的一个ml)HIV急性感染的病例中,病人有临床症状的第2、6、7、8、9、10、11、13、14天分别采血进行检测,第三代检测试剂(Genscreen,Bio2Rad)直到第13天才检测阳性,而第四代试剂(VIDASHIVDUO)第2～9天样品的检测结果全部阳

国外医学病毒学分册　

重组抗原和合成肽的。不同厂家的WB试剂相

差很大。有报告说[2]WB的特异性不是很好,只有97.8%,也就是说有大约2%的假阳性率。所以做WB之前,应先使用初筛试剂进行初筛。另外,文献报道大约4%～20%的样品经过“不确定”。相HIV初筛复检阳性后,WB结果为当数量的“不确定”样品与p24条带有关。一种

可能的解释是,病人感染了核心抗原类似的非致病逆转录病毒。尽管WB的特异性不十分令人满意,WBHIV确认试验。

HIV,、

性,说明第四代试剂检测窗口期确实缩短了。但

是,有趣的是,使用上述第四代试剂第10、11天的检测结果为阴性,直到第13天的结果才又转阳。文章中把转阴的时期,称为“第二窗口期”。“第二窗口期”存在的原因是由于急性HIV感染病人病程中,存在从血清p24抗原降低到抗体升高的时期,检测限时,发生在HIbi和

而当Weber[7]EnzygnostIV。

应用VIDASIDUOUltra和MurexHIVAg Abcombination试剂检测上述病人血清时,没有发现“第二窗口期”。VIDASHIVDUOUltra和MurexHIVAg Abcombination试剂的p24抗原检测限分别是3pg ml和5pg ml。因此,从文献报道看,使用敏感的检测试剂,可以避免“第二窗口期”的出现。这一点也提醒我们,在选择国外的第四代试剂时应如何选择。我国国内的生产厂家在研制第四代试剂时也应注意提高敏感度,避免“第二窗口期”的出现。

最近的两份第四代试剂评估论文表明

[4]

VIDASHIVDUOUltra和CobasCoreHIV

[5]

Combi与同类产品相比,具有较好的特异性

,;,朝PA(被动颗粒、斑点印迹(dotim2Determine、

unoassy)等简便快速方法。最近,美国食品和药品监督管理局(FDA)又批准了用于HIV快速检测的试剂OraQuickRapidHIV21An2

只需要tibodyTest,由美国OraSure公司生产。

一滴血,可以在20分钟内得到结果,特异性可以达到99.6%(http: www.fda.gov)。1.2　应用抗体亲和力检测技术区别新近感染

和既往感染

在流行病学上,有一个概念,称为“发病率”(incidencerate),是指一定时期内 …… 此处隐藏：5681字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……