5.1 DNA的粗提取与鉴定

1、生物大分子 2、提取生物大分子的基本思路 选用一定的物理或化学 方法分离具有不同物理或化 学性质的生物大分子 主要指蛋白质、 核酸、以及脂质

和糖类等

3、提取DNA的基本思路

利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA,去除其他成分

(一)实验材料的选取

1、材料：鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、 哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、 在液体培养基中培养的大肠杆菌。(从中选取 2~3种实验材料) 2、原则：选用DNA含量相对较高、容易提取 的生物组织。 3、合适的材料： 鸡血

①释放组织细胞中的DNA ②粗提取DNA ③将粗提取的DNA进一步纯化 ④鉴定提取物是DNA

制备鸡血细胞液…………加柠檬酸钠，静置或离心 ↓ 释放DNA ……… 加蒸馏水，同一方向搅拌 ↓ →过滤，除去细胞壁、细胞膜等。 溶解DNA ………… 加入NaCl至2mol/L,同一方 向缓慢搅拌 ↓ DNA析出 ……加蒸馏水至0.14mol/L,过滤，在 溶解到2mol/L溶液中 ↓ →除去细胞质中的大部分物质。 DNA纯化 ………与等体积95%冷却酒精混合， 析出白色丝状物 ↓ →除去核蛋白、RNA、多糖等。 DNA鉴定 ……………二苯胺，沸水浴，呈现蓝色

总结：实验原理DNADNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同 DNA与其他细胞成分在酒精中溶解度不同 DNA和蛋白质对酶、高温和洗涤剂耐受性不同 DNA与二苯胺呈现蓝色反应

的 粗 提 取 与 鉴 定

DNA粗提取

选择适宜材料

破碎细胞DNA的溶解和析出

DNA的纯化鉴定DNA

与二苯胺混合，沸水浴，呈现蓝色反应

(2)加了几次NaCl,每一次的作用是什么？ 第一次，在溶解核内DNA时，加入NaCl后充 分搅拌，加速染色质中DNA与蛋白质的分离， 使DNA充分游离并融入NaCl中 第二次，在DNA粘稠物在溶解时，加NaCl是 使DNA再溶解 第三次，是在DNA的鉴定中，目的是溶解 DNA

(3)过滤了几次，每一次的作用是什么？每一次 提取的是滤液还是过滤物？ 第一次在提取血细胞核物质时进行过滤，取得 的滤液中含有染色质，而滤出的是细胞膜、核 膜和细胞器等的破碎结构 第二次在过滤含DNA的2mol/L的NaCl溶液时， 过滤后的滤液中含有DNA 第三次在过滤0.14mol/L的NaCl溶液时，粘稠 物含有DNA,滤液中含有仍然溶解在NaCl中 的细胞中的一些成分，如蛋白质等

1. 下列关于DNA粗提取与鉴定的说法正确的是 A.氯化钠的浓度越低，对DNA的溶解度越大 B.人血也可代替鸡血进行实验 C.柠檬酸钠的主要作用是加速血细胞破裂 D.DNA不能溶于酒精 2. 在破碎鸡血细胞时，要先加入20ml的蒸馏水， 其作用是 A. DNA溶解于水 B.血细胞破裂，DNA释放 C

.稀释血液，防止凝固 D.有利于搅拌

3. 若选择的实验材料为植物细胞，破碎细胞时 要加入一定量的洗涤剂和食盐，加入食盐的目 的是 A. 利于DNA的溶解 B. 分离DNA和蛋白质 C. 溶解细胞膜 D. 溶解蛋白质

4. 在DNA粗提取实验中，向在溶解DNA的NaCl 溶液中，不断加入蒸馏水的目的是 A.有利于溶解DNA B.有利于溶解杂质 C.减少DNA的溶解度 D.减少杂质的溶解度

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