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方微 敢

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母酵 茵一

羲口邵江樵算出含菌数。

应

、

计数原理

定，察在一定的容积中酵母菌的个体数目，后推观然

酵母菌是一种在适宜条件下进行出芽生殖的

血球计数板是一种专门用于计算较大单细胞微 晰可见。酵母菌的生长周期短，殖速度快，实验生物的一种仪器。在血球计数板的方格网上刻有 9增在只有中间的一个大方格为计数室，微生供室条件下，液体培养基培养酵母菌，以观察酵个大方格，用可单细胞真核生物，体较大，在高倍显微镜下清个能物计数用。计数室刻度有 2种：种是 2一 5中格 x 6 1小格，另一种为 1而 6中格 x 5小格 (下图 )它们 2如，母菌逐个计数是非常网难的，以采用抽样检测法可母菌种群数量随时问变化的情况。对培养液中的酵进行估算。利用血球计数板在显微镜下直接进行测都是由 40小格组成。 0个

中间的小方格网是计数室

2 5中格 x 6小格计数板 1

l 6中格 x 5小格计数板 2

每个计数室边长为 1 m,每个计数室面积为 m则 1 mz盖上盖玻片后，玻片与盖玻片之间高度为 。 m载 01 .mm。所以每个计数室的体积为 01 m。 .m 计数时，果使用 1格x 5格规格的计数 如 6中 2小室，按对角线位，左 f、上、下、下 4个中要取：右左右格 ( 10小格 )酵母菌数。如果规格为 2即 0的 5中格 X

即载玻片与盖玻片之间高度=所加菌液的厚度。1 0 mL/ 0m __每个小格的面积。 B K 2 4 K—一 5中的

“ 5——计数室有 2 2” 5个中格。

2 .从试管中吸取出培养液进行计数之前，建议将试管轻轻震荡几次。这是为什么？ 轻轻震荡几次是为了使试管中酵母菌分布均匀，少实验误差，实验更加准确。减使 3片时为什么不直接向计数室滴加酵母液？ .制 因为滴管的 1体积远大于计数室的 0 m,滴 .m直 1接滴加会使盖玻片浮起，以需要摇匀稀释的酵母所菌液，无菌滴管吸取少量菌液，盖片边缘滴一用从小滴，菌液自行渗

入计数室。注意：数室内不能使计

1格的计数板，了取其 4个对角方位外，需 6小除还再数中央的一个中格 f 8小方格 )母菌数。注即 0的酵意：数时中格的边界足双线，以内线为边界。每计要毫升培养液中酵母菌总数=小格平均菌数 x O x每 4Ol4菌液稀释的倍数。 0X二、取样、片和观察中的几个要求制

1看懂血球计数板上板面数值的含义 .O. m m 1

有气泡，若有气泡则重新制片。

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I

4 .发现视野内酵母菌数目太多，挤成一堆，无XB— K 2 5

法进行计数，进行怎样的处理后，能进行精确应才地计数？

Im 4m【‘ 1,】 (】

l 同J

用 1 0释法处理。取一试管，入 9 L的无/稀 1另加 m菌水；分振荡培养液后，取 1充量 mL培养液；入 9加 m L无菌水的试管中，全混合后，其稀释 1。完使 0倍 稀释后， 01 L进行计数。依次进行稀释到每小取 .m格 3 5个为宜 f所计数的几个中格内的酵母细胞~或

A.球计数板的正面血 01——两嵴的表面比两个平台的表面高， . mm 5 6

生物。总数小于 30个1 0。5 .对于带芽体的酵母怎样计数？ 吹风机吹干，用 9%的乙醇或无水乙醇、酮等或 5丙有机溶剂脱水，其干燥。使三、应用和巩固

活酵母有出芽生殖现象，芽体达到母细胞大若小的一半时，可作为 2个菌体计数，芽体小于即若母细胞一半时为 1酵母细胞。个 6于正好位于中格边框的个体怎样计数？ .对 按左上原则，位于中格边框上的酵母菌一般 即只计上方线及左方线上的菌体。 7 .血球计数板使用后如何清洗？ 血球计数板使用后，用自来水浸泡，后用先然自来水冲洗，勿用硬物洗刷，后自行晾干或用切洗

镛

利用计数板可在显微镜下对微生

物细胞进行直接计数。计数板是一个特制的可在显微镜下观察的玻片，样品就滴在计数室内。计数室由 2 x1= 0 5 6 4 0个小室组成，容纳液体的总体积为

01 t。将 l .mi现 t m

L酵母菌样品加 9mL无菌水稀释， 用无菌吸管吸取少许使其自行渗入计数室，上盖盖玻片并用滤纸吸去多余菌液。

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b .:

盖玻片

计算板计数室di i

e—T。

l l

I

现观察到图中所示 ab cd e 5个中格 8、、、、 0个小室内共有酵母菌 4 0个，上述 1 L酵母茵样品 4则 m

、

镣纛 2￣0 . 1对样品重复计数 2 3 2~次，平均值 求

中约有茵体

一

个。为获得较为准确的数值，少误减

差，你认为可采取的做法是

为探究培养液中酵母菌种群数量的动态变化，、甲乙两小组同学完成了有关实验，定期采用在显微镜下观察并用血球计数器计数。血球计数器是一种专门用于计算较大单细胞微生物的一

熊撩

因为平均每个小格的菌体数=

4 08= .( )体积是 01 m/0,以，母细 4/0 55个， .r S 0所 a 4酵

种仪器，它的形状如图 A所示，的规格有两种，它种叫希利格式 (6 2 1 x 5型 )另一种叫汤麦式 (5 , 2x

胞个￣, L每小格平均菌数 x O x 0X释倍数= r=/ m 4 O l稀55 4 161= .x 0。可采用重复取样求平均值的 . x 0x 0 22 1 x方法获得较为准确的数值，少误差。减

一

1 6型 )图 B所示。如

汤麦式

希利格式

O.m m 1

XB— 2 K一 5

■■】400 m / a r SHANGHAI

图 A血球计数板外观图(视图、视图 )侧俯 已知每毫升培养液中酵母菌细胞的计算公式为：

图 B血球计数板数室放大图

酵细个=母胞数L

鑫

蒙警

。5毫 7

《细胞密度

劈略材1 0或汤麦式 ( 5 1 0 2 x 6型 )8 ( )出芽生殖 (无性，0 4或

两组同学根据计算数据绘制出本组酵母菌细胞数目变化曲线图 .图 C所示。如

生殖 ) A组的培养温度 ( p或有更多的培养液 )或 H

更适合酵母菌的繁殖，环境阻力小后取样

( )摇匀培养液 5

培养后期的样液应稀释后再计数

镧 3某生物兴趣小组开展探究实验，课题是：培养液中酵母茵种群数量与时间的变化关系”

“。

实验材料：种和无菌马铃薯培养液、管、菌试血球计数板 ( m￣ 2r 2 a mm方格 )滴管、微镜等。、显酵母菌的显微计数方法：根据上述内容，答下列问题：回

①血球计数板：是带有微小方格刻度的玻璃。 , 。 片，于在显微镜下对血细胞、生物的计数。用微

( )上述计算公式中，的含义是 1 b值出如图 A所示的血球计数器，盖好清洁的装满整个计数室，若观察到有气泡，应

( )两组同学在计数时，原液稀释成样液， 2将取吸取混合均匀的样液注入血球计数器的计数室内，( )你在做该实验时，选择血球计数板的规格 3

②将含有酵母茵的培养液滴在计数板上，一计数个小方格内的酵母菌数量，以此为根据，算试管中再估 的酵母菌总数。连续观察 7d并记录每天的数值。,根据以上叙述回答下列问题：

( )根据所学知识，课题的实验假设是：始 1该开在资源和空间无限多的环境中，酵母菌呈“”增 J型

和相应的计算酵母菌细胞个数时的 a分别是值c )一——————

长，着时间的推移，于随由“” S型增长。

酵母茵呈

()图 C中， 4甲组与乙组酵母茵中数量达到的

最大值时培养液中酵母菌的增殖方式以

( )在吸取培养液制片前，要轻轻震荡几次试 2管，目的是。如果一个小格内酵母菌过…

一

—

—

为主，分析甲组曲线该数值比乙组大的原因可能是[)——~—— ..一—————————,———————————

多，以数清，当采取的措施是难应

。

( )若某个同学在整个实验过程中，直接从静 5

对于压在中格界线上的酵母菌，当怎样计数？应——

一

置的培养瓶中取培养原液计数。我们说他的做法是错误的，正确的方法是和。

()——…~——

( )请设计表格处理实验的数据。 3 ( )在该实验的基础上，根据你对影响酵母菌 4的课题：-、

进纛撬每小格的体积是 O1 m￣ m￣种群生长的因素的推测，一步确定一个探究实验 .m 1 a r 1 m= . m,个计数室由 4 0个小

格组成，以 a r 01 m, 一 0所每毫升培养液是中酵母菌总数=小格平均菌数×每。

饕裹

() 1环境中资源和空间逐渐变

4 0 14菌液稀释的倍数。片时， 0 x 0x制因为滴管的 1 得有限(滴空间和营养不足，内斗争加剧等 ) ()使种 2体积远大于计数室的 01 l3从盖片边缘滴一小酵母菌分布均匀增加稀释倍数读左边和上边的 .mn, 需 滴，菌液自行渗入计数室，有气泡则重新制片。使若菌体 () 3

计数室的规格有两种，一种叫希利格式 (6 2 ) 1x 5型，另一种叫汤麦式 (5 1 2 x 6型 )具体实验过程必定是，其中的一种。酵母菌数量最大，明是在适宜条件 表下进行出芽生殖，并且用液体培养基培养酵母菌， 种群的增长受培养基的成分、气、度、碱度等 空温酸

、\

时间 (\ 1 2 3 4 5 6 7/ i\ 12

次数

因素的影响。当培养到后期时，原液中的酵母密度会变得很高，使计数室中酵母细胞太多，挤成一堆， 无法进行计数，此时需要适当稀释。,、

3

.

平均值 ( )酵母茵的种群数量与营养物质 ( p溶 4或 H、解氧、温度等 )变化关系的

≯,◆膏餐素 ()酵母菌原液稀释倍数二 1( )盖玻片重新制片 ( )希利格式 (6 2 2 3 1 x5型 ),

5 8