液相色谱仪日常维护及常见故障

液相色谱仪日常维护及常见故障

液相色谱仪日常维护及常见故障分析

主讲：王太松

液相色谱仪日常维护及常见故障

一、液相色谱仪日常维护及注意事项1 流动相 2 脱气机(在线) 3 泵(单元、二元、四元) 4 进样器(手动、自动) 5色谱柱 6 检测器(VWD/DAD/FLD/RID…)

液相色谱仪日常维护及常见故障

1 流动相所用溶剂应为HPLC级，水应为二次超纯水； 所用溶剂应经过过滤。过滤水应使用水相滤膜，过滤有机相应使用有 机相滤膜，不能混用，也不要用错。每一张滤膜只能用一次，不能重 复使用。 如果没有在线脱气机，所用溶剂应经过超声脱气。 水易滋生藻类，避免直接照射，过滤后的水最好使用不要超过两天。 如果条件允许可向溶剂中加入0.001-0.0001M的叠氮化钠。 注意溶剂的相容性，避免使用不相容的溶剂。 避免使用强酸、强碱或有机氯等腐蚀性溶剂。 在溶剂瓶中的溶剂过滤头可能会堵塞，必要时小心拿下用强酸(35% 硝酸)浸泡1小时，用水冲洗，但不要使用超声处理。

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名称 乙酸 丙酮 乙睛 苯 丁醇 四氯化碳 氯仿 环己烷 环戊烷 二氯乙烷 二氯甲烷 二甲基甲酰胺 二甲基亚砜 二氧六 乙酸乙酯 乙醇 乙醚 庚烷 正己烷 甲醇 甲乙酮 1-辛烷 戊烷 1-丙醇 2-丙醚 三氯乙烷 四氢呋喃 甲苯 三氯甲烷 水二甲苯

溶剂的相溶性Immiscible Miscible

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溶剂信息避免使用下列对不锈钢有腐蚀性的溶剂： 避免使用下列对不锈钢有腐蚀性的溶剂：卤化物碱金属溶液和相应的酸溶液。 高浓度的无机酸例如：硝酸和硫酸。 能够形成卤素自由基或酸的氯化试剂及其混合物。 含有过氧化物的色谱级醚必须用氧化铝干燥剂。 在有机溶剂中的有机酸溶液。 含有强络合剂的溶液。 四氯化碳和异丙醇或THF混合液。

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溶剂截止波长溶 剂 乙 水 环 己 烷 己 甲 乙 乙 烷 醇 醇 醚 睛 UV截止波长(nm) 190 190 195 200 210 210 220 220 240 265 280(220) 285 所以在使用紫外检测器时 ，所用波长应至少比所用 溶剂的截止波长大20nm以 上。 在使用紫外检测器时，所 用波长与所用溶剂的截止 波长接近(或低于截止波 长)时，容易产生噪音干 扰，从而影响检测结果。

二氯甲烷 氯 仿

四氯化碳 四氢呋喃 甲 苯

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生色团和最大吸收波长生色团 羰基(酮) 羰基醛 羧基 酰胺 次乙基 亚次乙基 睛 硝基 分子式 RR‘C=O RHC=O RCOOH RCONH2 RCH=CHR RC=CR RC=N RNO2 实 丙酮 乙醛 醋酸 乙酰胺 乙烯 乙炔 乙睛 硝基甲烷 例 最大吸收波长(nm) 271 293 271 208 193 173 <160 271

溶剂、PH、温度等都会影响生色团的 最大吸收峰的强度和位置。

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溶剂过滤不干净的溶剂或在溶剂瓶中长菌的溶剂会阻塞溶剂过滤器，降低泵的操作性能。 遵从下列建议可以提高性能，延长溶剂过滤器的寿命：

使用无菌溶剂瓶避免溶剂长菌。 用滤

膜过滤溶剂去除微生物。 每两天更换或过滤溶剂。 避免溶剂瓶直接日照。 向溶剂中加入0.0001-0.001M的叠氮化钠。

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选择合适的滤膜聚四氟乙烯滤膜：适用于所有溶剂，酸和盐，并无任何可溶物。 醋酸纤维滤膜：适用于水基溶剂，不适用于有机溶剂，推荐用于蛋 白质和其相关的样品。 尼龙66滤膜：适用于绝大多数有机溶剂和水溶液，可用于强酸、 70%乙醇、二氯甲烷、不适用于DMF二甲基甲酰胺。 再生纤维素滤膜：具有蛋白质吸收低，同样适用于水溶性样品和有 机溶剂。 注意：1,每张滤膜只能用一次。 2,水相和有机相不要搞混。

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柱塞清洗附件Seal WashHPLC使用缓冲溶液Buffer时，由于缓冲盐溶液存在高压 盐析现象，析出的细小盐粒会损伤蓝宝石柱塞杆和密封 垫，从而造成漏液等故障现象，因而建议选配柱塞清洗 附件Seal Wash。 缓冲盐浓度大于0.01mol时，强烈建议选配在线的柱塞 清洗附件Seal Wash。 清洗液配置：90%水+10%异丙醇溶液，流速为2-3滴 /min。该混合液可抑制菌类生长和降低水的表面张力。 清洗液虹吸流出，不能干涸。

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2 脱气机

目的排除溶解在流动相中的氧气和 氮气

脱气方法： 氦气脱气 回流加热脱气 真空脱气 超声脱气

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在线真空脱气机

12 ml Solenoid valve

为保证脱气机的良好使用性能， 在下述情况下需要用注射器抽 洗脱气机管路，每个通道使用 不低于30ml的异丙醇。 1,新的脱气机或新的管路； 2,更换了溶剂，尤其是缓冲盐与 有机相之间、两个不相容流动 相之间的互换时； 3,输液泵关闭了一段时间，或使 用挥发性溶剂混合物。 4,完成上述操作后，打开清洗阀， 用大流量冲洗，5ml/min。

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3泵出口球阀BOV 阻尼器/压力传感器

主动输入阀AV 梯度比例阀

清洗阀Purge Valve

柱塞杆Piston

溶剂瓶

泵驱动

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二元泵工作原理Purge valve Damper Mixer

Waste Inlet valve

Outlet valve Inlet valve

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