土壤脲酶的测定方法
时间:2025-07-11
时间:2025-07-11
一、脲酶测定(比色法)
脲酶是对尿素转化起关键作用的酶,它的酶促反应产物是可供植物利用的氮源,它的活性可以用来表示土壤供氮能力。
1、试剂配制:
(1) pH6.7柠檬酸盐溶液:取368g柠檬酸溶于600mL蒸馏水中,另取295g
氢氧化钾溶于水,再将两种溶液合并,用1N氢氧化钠将pH调至6.7,并用水稀释至2L。
(2) 苯酚钠溶液:称取62.5g苯酚溶于少量乙醇中,加2mL甲醇和18.5mL
丙酮,后用乙醇稀释至100mL(A液),保存再冰箱中。称取27g氢氧
化钠溶于100mL水中(B液),保存于冰箱中。使用前,取A、B两液
各20mL混和,并用蒸馏水稀释至100mL备用。
(3) 次氯酸钠溶液:用水稀释制剂至活性氯的浓度为0.9%,溶液稳定。
(4) 10%尿素溶液:10g尿素溶于100mL水中。
(5) N的标准溶液:精确称取0.4717g硫酸铵溶于水稀释至1L,则得1mL
含0.1mgN的标液,再将此液稀释10倍制成氮工作液(0.01mg/mL)。
2、操作步骤
称取5g土置于50mL容量瓶中,加1mL甲苯处理,加塞塞紧轻摇15min;往瓶中加入5mL10%尿素液和10mL的柠檬酸盐缓冲液(pH6.7),仔细混匀。在37℃恒温箱中培养24h。然后用热至38℃的蒸馏水稀释至刻度(甲苯应浮在刻度以上),摇荡,将悬液过滤。取滤液1mL置于50mL容量瓶中,用蒸馏水稀释至10mL,然后加入4mL苯酚钠溶液,并立即加入3mL次氯酸钠溶液,加入每一试剂后,立即将混合物摇匀,20min后,将混合物稀释至刻度,在波长578nm处测定吸光值。脲酶活性以样品所得的吸光值减去对照样品吸光值之差,根据标准曲线求出氨态氮量。
标准曲线绘制:分别取0、1、3、5、7、9、11、13mL氮工作液置于50mL容量瓶中,加蒸馏水至20mL,再加4mL苯酚钠溶液和3mL次氯酸钠溶液,随加随摇匀,20min后显色,定容。1h内再分光光度计上于578nm处比色。
3、结果计算
以24小时后1g土壤中NH3-N的质量(mg)表示脲酶活性(Ure)
Ure=a·V·n/m
式中:a为由标准曲线求得的NH3-N浓度(mg/mL);V为显色液体积(50mL);n
为分取倍数;m为烘干土重(g)。