培养基配制及适用性检查操作规程

1目的：建立一个培养基配制操作规程，保证检验结果的准确。 2范围：适用于微生物限度检查用培养基。 3责任人：质检员、化验主管。 4内容：

4．1微生物限度检查用培养基的配制

4．1．1配制用具：蒸汽灭菌器、电炉、搪瓷缸、玻璃棒、三角瓶、棉塞、细绳、牛皮纸、天平、量筒。

4．1．2根据配制量称取干燥培养基质，置搪瓷缸中，加入规定的纯化水或琼脂等使其溶解，将搪瓷缸放到电炉上加热煮沸。

4．1．3根据培养基的配方要求调节PH值，将配好的培养基分装到若干个三角瓶中，瓶口塞好棉塞，盖上牛皮纸捆扎好，放入灭菌器中，灭菌条件为121℃高压灭菌15分钟。

4．

方法：称取使用该处方生产的符合规定的脱水缓冲液16克，加入1000ml纯化水中，微温溶解，分装，115℃高压灭菌30分钟备用。将配好的缓冲液分装到若干支试管中，直接接种法缓冲液9ml/管，试管口塞好棉塞；放入灭菌器中进行灭菌。

4．方法：称取使用该处方生产的符合规定的脱水培养基33克，加入1000ml纯化水中，加热煮沸溶解，分装，121℃高压灭菌15分钟备用。 4

方法：称取使用该处方生产的符合规定的脱水培养基30.5克，加入1000ml纯化水中，加热煮沸溶解，分装，121℃高压灭菌15分钟备用。 4

方法：称取使用该处方生产的符合规定的脱水培养基37克，加入1000ml纯化水中，加热煮沸溶解，分装，121℃高压灭菌20分钟备用。

4.1.8培养基配制注意事项：

（1） 采用干燥培养基，按说明配制，应对灭菌后的培养基pH进行校验。 （2） 配制的培养基不应有沉淀，应于溶化后趁热过滤，灭菌后使用。 （3） 培养基的分装量不得超过容器的2/3，以免灭菌时溢出。包装时，塞

子必须塞紧，以免松动或脱落造成染菌。

（4） 培养基配制后应在2小时内灭菌，避免细菌繁殖。

（5） 灭菌后的培养基应保存在2～25℃，防止污染，可在3周内用毕；保

存于密闭容器中，可在1年内使用。制备好的培养基放置时间不宜过长，以免水分散失及染菌。

（6） 宜采用水浴加热熔化琼脂培养基，勿用电炉直接熔化琼脂培养基，以

免营养成份过度受热而破坏。

（7） 已熔化的培养基应8小时内一次用完，剩余培养基不宜再用。 4.2培养基的适用性检查

4．2．1微生物限度检查中计数用培养基包括：（营养琼脂、玫瑰红钠琼脂）、控制菌检查用培养基包括胆盐乳糖培养基。 4．2．2计数培养基适用性检查试验用菌株 大肠埃希菌（Escherichia coli）[CMCC（B）44102]

金黄色葡糖球菌（Staphylococcus aureus）[CMCC（B）26003] 枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）[CMCC（B）63501] 白色念珠菌（Candida albicans）[CMCC（F）98001] 黑曲霉菌（Aspergillus niger）[CMCC（F）98003]

铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）[CMCC（B）10104]

4.2.3检查方法

4.2.3.1培养基制备 按规定程序新鲜配制营养琼脂（被检培养基和对照培养基）、玫瑰红钠培养基（被检培养基和对照培养基）、胆盐乳糖培养基，灭菌后备用。

4.2.3.2营养琼脂培养基

4.2.3.2.1方法： 取7个无菌平皿，分别接种大肠埃希菌、金黄色葡糖球菌、枯草芽孢杆菌各2皿，每皿接种1ml菌液（含菌50～100cfu），另一平皿不接种菌作为空白对照，倾注对照营养琼脂培养基，混匀，凝固后于30～35℃倒置培养48h，计数；被检培养基同法操作。

4.2.3.2.2结果判断：若被检培养基的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的70%，且菌落形态、大小应与对照培养基上的菌落一致，则判断该培养基的适用性检查符合规定。 4.2.3.3玫瑰红钠琼脂培养基

4.2.3.3.1方法： 取5个无菌平皿，分别接种白色念珠菌，黑曲霉菌各2皿，每皿接种1ml菌液（含菌50～100cfu），另一平皿不接种菌作为空白对照，倾注对照玫瑰红钠琼脂培养基，混匀，凝固后于倒置培养72h，计数；被检培养基同法操作。

4.2.3.3.2结果判断：若被检培养基的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的70%，且菌落形态、大小应与对照培养基上的菌落一致，则判断该培养基的适用性检查符合规定。 4.2.3.4胆盐乳糖培养基

4.2.3.4.1方法：新鲜配制100ml/瓶的对照胆盐乳糖培养基4瓶，121℃灭菌15min，备用。分别接种大肠埃希菌、铜绿假单胞菌以及金黄色葡糖球菌各一瓶，接种菌液量1ml（不大于100cfu），另一瓶不接种菌作为空白对照；被检培养基同法操作，置规定温度培养。

4.2.3.4.2结果判断：培养18小时，与对照培养基比较，被检培养基中试验菌应生长良好，表现为液体培养基变浑浊；培养48小时，空白培养瓶和接种金黄色葡糖球菌的培养瓶应不得浑浊。 4.2.3.5MUG培养基

4.2.3.5.1方法：新鲜配制5ml/支的对照MUG培养基，121℃灭菌15min，备用。取3支，接种大肠埃希菌2支，接种菌液0.2ml（不大于100cfu），另一支不接种菌作为空白对照，培养5小时，在366nm紫外光灯下观察结果；被检培养基同法操作，置规定温度培养。

4.2.3.5.2结果判断：空白培养管应不得浑浊，且366nm处观察无荧光；与对照培养基比较，被检培养基中试验菌应生长良好，表现为液体培养基变浑浊，366nm处应呈现荧光。若荧光不明显，则可延长至24h。 4.2.3.6麦康凯琼脂培养基

4.2.3.6.1方法：新鲜配制对照麦康凯琼脂培养基，121℃ …… 此处隐藏：962字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……