重组CHO细胞HBsAg纯化工艺的优化

cho

维普资讯 http://www.77cn.com.cn

第 1 3卷第 6期：4 4 20 03年 1 2月

生

物

技

术

V0 . 3. 1 1 No. 4 6: 4

B O I HN0I Ir EC oC

De . 0 3 e2 0

回归方程：=1 .7 Y 9 1x+6 o F检验法检验回归方程H当零假设 H: o b=0成立时，计统量 F S ( -2 F 1 n一2。总偏差平方和 S=L y 2 2=—/￣ n ) (, ) T y=14

自由度 c=n=9回归平方和 S=b v=1 .7×4 .4=一1; l L l 91 95 997f 4 ., R=1剩余平方和 S —S=14; E= l 2 2—99 7=22.f t 4. 9 3E,

=f一=8 T

F=

=

=2 .9x=0 0, F分布表¨, 5 9,a .5查 1】得

一一浦一桃一难一 一一问一一在方等蝴醍式的成 回：归不珊 单位的稳定物效价的线的依据。如20 . 5 01 1 6.

前所述，估计效价的准确与否，是检测生物效价的关键，依但水分估计往往有误差，而主组分总量的测定应用仪器分析法， 快速、便，方且计算采用不加校正因子的面积归一化法，此，因 可根据二者的线性相关关系，以主组分总量来估计效价。 第二，可作为有效进行质量控制的方法。检测中如发现异常，不符合相关关系，迅速查找原因，时调整检测条件，可及 使标准品与供试品相应剂量所致反映程度接近，同时与生产、 技术部门沟通，讨异常情况出现原因，取相应措施，到探采起质量监控的目的。 下面选取几组数据，明上述推断的适用性，表 3说见。

8￣S/E=￣2 2 3 8=60 y=/Ef/ 9 ./ .4 I= 10 Y= 10 40 l 6 0代『

入上述不等式方程并解之，自变量 x的取值范围 (0 5 8 .得 7 . 1

效价结果极不稳定，而根据相关关系，用主组分总量估计效应价，当 x在预测区间内时，值全部落在要求范围内，估计则 Y且效价更接近实测结果。 因条件所限，以上推论只是笔者从实践中总结出的经验、 数值，虽具有统计学意义，难免存在一定片面性、限性。但局 目前，只做为内部质量预测

和控制的手段，一步推广应用，进 尚需专门实验验证。参考文献：

[]民生，凯生 . 1殷殷实用抗感染药物学[ .京：民卫生出版社， M]北人 [] 2中国药典 .二部[]20 . S . 0附录 l . 0 2

[] 3中国药典 .二部[]20 . S . 0附录 3 . 0 2

4质量监督检验检疫总局质量司 .]质量专业理论与实务[]北京： M.中

重组 C HO细胞 HB A s g纯化工艺的优化李德娟，万革，丽剑，波，睿，智宇，丽娟，巍陈赵江赵王谷何,

(长春生物制品研究所，吉林长春 10 6 ) 30 2摘要：目的：优化重组 C O细胞 I H I g化工艺。方法： mA纯由乙肝病毒 S基因转化的中国仓鼠卵巢 ( H细胞培养收液，初 c 0)经步提纯、密度梯度离心、凝胶过滤层析可得到哪 s g品。结果： A纯通过凝胶过滤层析收取哪 s g性峰，制哪 s g活性峰的收 A活控 A量，把哪& g活性峰的下降段再收集起来重新层析，并 A改进后可使 I A m￣g的总回收率达到 6%以上，且牛血清蛋白残余量达 0而到 1 r,以下， s g纯度 9%以上。结论：组 C O细胞 HBA纯化工艺改进后，咖& g产量及质量上均有明显提高。 OI gⅢ; A 7重 H s￣使 A在 关键词：因工程 H a g凝胶过滤层析； B A基 BA; H s g回收率中图分类号" Q 6 T 44文献标识码： A文章编号：04—3 l 2 O )6—0 4 10 1X(O S 0 0 4—0 3

o pUm i i he Re o b na " zng t c m i nt CH O Bs rfc to H Ag Pu iia i nU e— ia C匝 D u n, H a n— g, H A— i n, t 1 e Z O I J ea . a(∞ m stt fBo gcl rd c, QI I tueo il ia Pout O￣neu 3 02,R ni o s gh n10 6 P C)

A d: bet e T pidetem to f eo bnn HO HBA u f ao . t s T eC I est nf m d b B 由m O jc v:oo t z h e do cm i tC s gp_ cf nMel: h lO cl r s r e yH V S— gn i n h r a

4 i i md l a o ee w r cl rd teolcl r spma Rcn i & gW Ste u f db m n m u a rc i t n dni e u ue, e uue u e t o tn HB A S npr e ya moi sl t pei t o, esy印 Iel唧 l e t h l t m a￣l h i i u fe pa i t dI it 0I f, gI la o,n ueHB A a ba e .h af n tnvlm a dut n y teH h g o m B￣aae,n erm ie e ft t n adp r s gw soti d T ef coal o ew sajs dma￣。 t A l ew sd vsd adt a d ri i n ri o u e h vu . h e n HB A ek w s eoee,n s gpa a cvr ad印pidogI la o ou gi. sl:1 t cvr f a A ol ahu m a 0 . . r d l|t e ft t ncl aa Reut 1l t a r oeyo H s gcu r c pt e ri i mn n s e o le de oⅡ t n6% R h

eiul a 1m W Sl st n1 g . a A ui 8 oe hn9% . o c to:h eoeyo};A S cesd adteq a t sda ls 3 a s a 0I, H s gp ryw s r ta 7 C n h￣ n T eR cvr fⅡ& gW Si r e,n uly c fe1 e h l t m n a h i o哪 sgw smpoe i hn os . f A a rvds i mu aeul yKe y w s R c mb n n I: e o ia tI] g Ce￣t i h o tg a h Re o e y o s -￣A;,l mt c r mao r p y: c v r fnB Ag o

从重组 C O细胞培养收液中提纯哪& g是制备基因工程 H A乙肝疫苗的关键技术之一。CI l O细胞表达的哪& g分泌于培 A养液中，凝胶过滤层析任务是去除大分子杂质和牛血清蛋白， 获取哪& g纯品。通过控制哪& g活性峰的收量， A A以及将哪&g A活性峰的下降段收集起来，新层析的方法，使 H .重可 B s g的回收率达 6%以上，时提高了产品质量。 A 0同

l材料和方法1 1材料 .

1 1 1从重组 C O细胞培养收液中经硫酸铵沉淀、次溴化 .. H二钾超速离心纯化收集的含衄 s g A的样品，由本室提供。 1 12磷酸二氢钠 ( ..分析纯 )磷酸氢二钠 (,分析纯 )购自北京，化工厂。

司。 115高速离心机： ek a _ H。 .. B cm nJ . S 2 12方法 . 12 1哪& g的层析纯化 .. A 12 1 1层析前预处理 .. .将溴化钾超速离心收集的含 I s s的样品以平板超滤器 m A进行超滤，小分子滤到膜下，磷酸盐缓冲液洗三次，样使用使品的终体积为 4 0 l然后以 …… 此处隐藏：7749字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……