磁微粒甲胎蛋白(AFP)化学发光免疫检测系统的研究及临床应用

郑州大学硕士学位论文

磁微粒甲胎蛋白（AFP）化学发光免疫检测系统的研究及临床应

用

姓名：张泉申请学位级别：硕士专业：医学免疫学指导教师：杜英；秦东春

201105

摘要

磁微粒甲胎蛋白（ＡＦＰ）化学发光免疫检测系统

的研究及临床应用

硕士学位申请人：张泉推荐导师：杜英教授

秦东春‘教授

郑州大学基础医学院微生物免疫学教研室

河南郑州４５０００１

摘要

甲胎蛋白（ＡＦＰ）是迄今为止发现的原发性肝癌最灵敏、最特异的肿瘤标志物，７０—９５％的原发性肝癌患者呈现ＡＦＰ水平升高，血液中甲胎蛋白水平对于肿瘤的早期发现，病情的发展、治疗后的评价、监测复发和转移等方面都具有一定的应用价值。本论文主要进行磁微粒甲胎蛋白（ＡＦＰ）化学发光免疫检测系统的研究与临床研究，在磁微粒包被技术平台和化学发光技术平台上，结合双抗体夹心法的免疫学反应技术优势，开发出诊断试剂盒，用于人血清中甲胎蛋白的检测。

研究方法与结果：

１．甲胎蛋白定量检测试剂盒的研发：主要包括生物活性原材料的筛选，磁微粒的包被、酶结合物和校准品生产工艺研究、试剂盒反应体系研究、正常参考值的确定以及稳定性研究。

（１）磁微粒包被工艺：本试剂盒固相载体选用羧基磁微粒，包被方法确定为羧基两步；

（２）试剂盒反应体系：采用两步法反应模式，第一步：

２５９ｌ样本＋２０９ｌ

磁微粒＋５０Ｉ．ｔｌ样品稀释液，３７。Ｃ温育１５ｍｉｎ，洗涤６次；第二步：加入１００９ｌ酶

摘要

结合物，

３７。Ｃ温育１５ｍｉｎ，洗涤６次；分别加入底物Ａ、底物Ｂ各５０１．ｔｌ震荡混

匀后，避光５—１０ｍｉｎ内测定。

（３）参考值的确定：检测６１５例正常人样本，通过百分位数法确定参考值

为１０．０ｎｇ／ｍｌ。

（４）稳定性研究：对产品进行了加速稳定性和实时稳定性研究。分别于３７℃加速破坏条件下放置１０天和实际储存条件２＂－－－－８℃放置１４个月后对试剂盒进行检测，产品的各项性能指标仍能够满足产品标准的要求。将产品的效期定为２～８℃储存１２个月是安全合理的。２．甲胎蛋白定量检测试剂盒性能评价

（１）准确性：用参考物质作为样本进行检测，试剂盒准确性均值在０．９００－－－－１．１００范围内。

（２）最低检测限：最低检出限不大于１．８ｎ∥ｍｌ。

（３）剂量一反应曲线线性：在１．８～１０００ｎｇ／ｍｌ线性范围内，试剂盒的相关系数ｒ应三０．９９００

（４）精密性：用不同浓度的样本各重复检测１０次，其变异系数（ｃｖ）应不大于１０％

．（５）批间差：批问变异系数（ＣＶ）应不大于１５．０％

（６）特异性：人血清白蛋Ｉ刍（５００ｎｇ／ｍ１）、ＨＣＧ（１０００ＩＵ／ｍ１）、ＰＲＬ（５００ｎｇ／ｍ１）均无交叉反应性。

，

（７）干扰物质：５０ｍｇ／ｄｌ胆红素、８１ｍｇ／ｄｌ血红蛋白、３０００ｍｇ／ｄｌ脂质对本

试剂盒无干扰作用。

３．甲胎蛋白定量检测试剂盒（磁微粒化学发光法）的临床研究：

以已上市同品种试剂盒为对照，通过对原发性肝癌术前及术后监测、肝部良性疾病和其他肿瘤患者血清合计１１７３例临床检验样本进行对比检测，结果显示，本试剂盒与对照试剂盒相比，阴性符合率为９７．８５％，阳性符合率为９８．３２％，总符合率为９８．０４％，相关系数为Ｏ．９９７１。可以用于临床ＡＦＰ含量的检测。

结论：

本研究选择高特异性和高灵敏度的单克隆抗体包被，建立开发出磁微粒化学发光法检测ＡＦＰ系统，灵敏度、特异性、稳定性等各项主要指标可以达到国内领先水平，跻身国际先进水平行列，且操作简便快速，易实现自动化操作，能够更好地满足国内临床使用需求。

ＩＩ

摘要

关键词：甲胎蛋白；磁微粒；化学发光；单克隆抗体；生产工艺研究；临床研

究

Ａｂｓｔｒａｃｔ

ＭａｇｎｅｔｉｃｐａｒｔｉｃｌｅｓＡＦＰ（ＡＦＰ）ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ

ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙａｎｄｃｌｉｎｉｃａｌａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｓｙｓｔｅｍ

ＰｏｓｔｇｒａｄｕａｔｅＺｈａｎｇＯｕａｎ

ＴｕｔｏｒＰｒｏｆｅｓｓｏｒＤｕＹｉｎｇ

ＰｒｏｆｅｓｓｏｒＤｏｎｇｃｈｕｎＱｉｎ

ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＢａｓｉｃＭｅｄｉｃａｌ

Ｓｃｉｅｎｃｅ，ＺｈｅｎｇｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ

Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ４５０００１

Ａｂｓｔｒａｃｔ

Ａｌｐｈａ—ｆｅｔｏｐｒｏｔｅｉｎ（ＡＦＰ）ｆｏｕｎｄ

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ｐｒｉｍａｒｙｌｉｖｅｒ

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