红细胞计数和血红蛋白测定

红细胞计数和血红蛋白测定

概述：血液由血浆和血细胞两部分组成。通 过循环系统与全身各个组织器官密切联系 参与机体各项生理功能活动，维持机体正 常新陈代谢和内环境平衡。在病理情况下， 血液系统疾病除直接累及血液外，也可以 影响全身组织器官，而各组织器官的病变 也可直接或间接地引起学液发生变化，临 床上较多的检验项目是通过血液标本的检 验来了解机体的变化。

血常规检查(Blood Routine Examination) 红细胞计数(RBC)· 血红蛋白测定(Hb) 白细胞计数(WBC) 白细胞分类计数(Differential Count,DC) 血常规检查对各系统疾病的诊断和鉴别可以提供

许多重要信息，是临床医学检验中最常用，最重要的基本内容。

红细胞计数与Hb测定名称 红细胞计数 缩写 Rbc 英文全称 Red Blood Cell Hemoglobin

血红蛋白测定 Hb

一、红细胞基础理论(一)RBC来源、生成、寿命及衰亡红细胞系祖细胞 早幼、中幼和

(BFU-E和FU-E)骨髓造血干细胞 (CFU-S) 促红细胞生成素 (Erythropoietion,EPO) 骨髓原红细胞

晚幼各发育阶段3~5次分裂

网织红细胞

成熟红细胞

从骨髓益出至外周血的全过程约需5天时间 一个原红细胞最终可生成8~16个成熟红细胞 红细胞的生存时间为120天 珠蛋白 参与再造血 衰亡的RBC 铁 胆红素 ， 参与胆红素代谢

(二) RBC的生理机能(见课件) (三)Hb的组成及结构珠蛋白(含两对肽链) 血红蛋白 (Hb) 亚铁血红素(Fe+4个卟啉)

α2β2(成人主要 Hb,简称 HbA占 90%) α链(141AA)

珠蛋白β链(146AA)

组合形式

α2δ2(成人次要 Hb, HbA2占 1~3%)α2γ2(胎儿主要 Hb, HbF 占2%以 下)

二、红细胞计数(一)原理：

用等渗稀释液将血液稀释一定倍数(用已校 准的一次性微量采血管或Hb吸管，吸取全血20ul 加到3.8ml稀释液内混匀),滴入血细胞计数盘内， 然后于显微镜下计数一定范围内的RBC数，经过 换算即可求得每升血液中的红细胞数。

(二)试剂 枸橼酸钠(2Na3C6H5O7· 2O),3克 11H 甲醛(40%) 1ml 以上溶解后加蒸馏水 100ml 此配方克服了传统的Hayem液的缺点。 (三)操作 见课件

(四)参考值 RBC(×1012/L) 男： 女： 4.0~5.5 3.5~5.0 Hb(g/L) 120~160 110~150

新生儿： 6.0~7.0

170~200

(五)临床意义升高：相对升高——与脱水有关(吐、泻、汗、尿、灼、

癌)绝对升高——与乏氧有关 生理性(高原、胎儿、新生儿、运动、精神因素)

病理性(心肺疾患、真性红细胞增多症)降低：生理性降低——妊娠、婴幼儿、老年人 病理性降低——生成降低、原料不足、造血障碍、

丢失增多(失血)、破坏增多(溶

血)由于各种病因导致周围血红细胞减少，即病理性贫 血其贫血的病因学分类见第9页“表2-1”

三、血红蛋白测定

(一)血红蛋白测定方法 改良沙利(Sahli)氏法

托尔克维斯脱(Tallgvist)氏法 光电比色法 硫酸铜溶液比重法 酸化(碱化)光电比色法 氰化高铁血红蛋白(HiCN)测定法

十二烷基硫酸钠血红蛋白(SDS-Hb)测定 法 碱羟高铁血红素(AHD-575)法 上机分析

(二)氰化高铁血红蛋白(HiCN)法

原理： 血红蛋白被高铁氰化钾[K3Fe(CN)6]氧 化成高铁血红蛋白(Hi)再与氰离子(CN-) 结合，生成稳定的氰化高铁血红蛋(hemiglobin Cyanide,简称HiCN)。氰化高铁血 红蛋白在波长540nm处有吸收峰，可用校准 的高精度分光光度计进行直接定量测定。或 用HiCN参考液进行比色测定。

试剂：常用的Hb转化液为文齐氏液(见实习指导)静臵

操作：血液20ul+转化液5ml———比色

5分钟计算： 64458 Hb(g/L)=测定吸光度(A)×————×251

44×1000=A×367.7 64458是目前国际公认的血红蛋白平均分子量

44是1965年国际血液学标准化委员会(ICSH)公布的血红蛋白摩尔吸光度。 251是稀释倍数

(三)注意事项： 必须以HiCN法为标准，绘制标准曲线 HiCN试剂不能贮存于塑料瓶中，应放40C冰箱 不能图工作方便不顾质量管理要求 遇到白细胞数过多或异常球蛋白增高的血标本，

HiCN比色液会出现浑浊，可离心取上清夜或向比色液中加少许NaCL(约0.25g)或碳酸钾(0.1g) 氰化钾是剧毒品，应妥善保管，配试剂时要按剧毒

品管理程序操作 若用分光光度计作精度定量测定，分光光度计的波 长和吸光度需校正，带宽应小于1nm,比色杯光径

1.00cm,允许误差为0.5%定温度200C~250C。

(0.995~1.005cm),测