致内含子、启动子和间隔序列不同进而产生多态性。1.1SRAP的引物特点

SRAP技术的基本原理是通过一对引物对ORFprimer）长17bp，5'端进行扩增。其中正向引物（F-的核心序列为14bp，由10bp无任何特异的填充序

［3］

列（一般是TGAGTCCAAA，少数为TGAGTCCTTT）和CCGG组成，随后为3'端的3个选择性碱基，选择

RAPD、AFLP和SSR等标记技术比较，的RFLP、

SRAP具有适用范围广泛、多数显性、多态性高、非等位检测及能检测20－100个位点，提供较高的样品信息量，可以对整个基因组进行检测，操作简便，重复、稳定、可靠性高及费用低等优点

［10］

。

2

2.1

SRAP技术在园林植物遗传育种中的研

究进展

遗传多样性分析及亲缘关系的研究

性碱基的变化与相同核心序列组合成一套正向引

primer）长18bp，物。而反向引物（R-其中核心序列由11bp填充序列（GACTGCGTACG）和特异序列

AATT组成，3'端仍为3个选择性碱基。正向引物中的CCGG序列可与ORF区域中的外显子特异性结合，反向引物中的AATT序列特异结合于富含AT区的内含子和启动子。这样正反向引物结合可以同时对外显子、内含子和启动子区域进行特异性扩增，并且因为个体不同及物种的内含子、启动子和间隔序

［4］列不同而产生多态性。

1.2SRAP扩增程序及检测方法

遗传多样性反映了种内不同种群之间或一个种

［11］

群内不同个体间的遗传变异。遗传多样性分析可以为研究物种起源、品种分类、亲本选配和品种保护等提供重要的科学依据，是收集、保护和有效利用有利于培育出更优良的品种。种质资源的技术基础，

SRAP分子标记技术可以有效地分大量证据表明，

［12］

析园林植物遗传多样性。蹇黎等利用SRAP技

37个中国术对51个寒兰品种类型（14个日本寒兰、

寒兰）进行了亲缘关系分析，用11个SRAP引物组

SRAP技术采用复性变温法扩增，扩增程序一

［2］

般有两种：一种是由Li等创立，即：94℃预变性5min；94℃变性1min，35℃复性1min（也有用33℃［5］），72℃延伸1min，5个循环；94℃变性1min，50℃复性1min（也有用53℃），72℃延伸1min，35个循环；最后72℃延伸5－10min；4℃保存。前5个循环采用35℃退火温度有利于引物与靶序列更好的结合，随后的35个循环采用50℃退火温度以保证扩增产物以指数方式扩增。另一种由Budak等［6］提出，其他条件不变，只是整个反应过程退火温度一直是47℃。这两种方法都能得到重复、稳定性较好的扩增产物，因此可根据不同试验材料和不同试验目的，进行适当调整和优化，以期达到最好的试验效果。SRAP的扩增产物一般用4%－6%的聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，可以用同位素或银染技术检测，也可以用1.8%－2.0%的琼脂糖凝胶

［2，3，8］

。分析多态性，但分辨率较低

SRAP操作简单，采用含17－18个碱基的正反向引物及50℃的退火温度，确保了扩增产物的稳定

［2］

［5］

合共扩增出586条带纹，其中504条多态性带纹，多

态率为86.01%，有效揭示了材料间的遗传关系。用19个SRAP引物组合对文心兰的33个品种基因组DNA进行扩增，结果显示，文心兰种周艳霞等

质具有丰富的遗传多样性，同时也说明了SRAP标记可有效应用于文心兰种质资源的遗传多样性研

［14］

究。李梅等利用SRAP分子标记研究了桂花（OsmanthusfragransLour．）88个品种和1个野生种间的亲缘关系，得出品种群体间遗传分化程度高的结论。SRAP技术在开发野生种质资源方面也起到

［15］

了重要的作用。袁菊红等对中国13个省24份野生石蒜（Lycorisradiata）94个样品进行了SRAP扩增，发现石蒜的野生种质资源遗传多样性非常丰富，种源间遗传分化显著。樊洪泓等利用SRAP和RAPD两种分子标记技术对石斛的9个品种进行了遗传多样性研究，表明SRAP聚类结果与传统的基于形态特征建立的分类结果较为一致，同时说明SRAP标记在石斛的遗传多样性与亲缘关系的研究

［17］

中，表现出了极大的优越性。Han等利用25对SRAP引物对发生芽突变的两个牡丹中国栽培品种

［16］

［13］

电泳

［7］

性

，并且还可以通过改变引物3'端的3个碱基得

到更多的引物，加上正反向引物可以自由组合，提高了引物的使用率，大大降低成本。与目前广泛应用

［9］

和两个牡丹日本栽培品种的亲缘关系进行了分析，

结果证明，中国栽培品种和日本栽培品种在遗传性上差别很大，并且表明了SRAP标记在分子水平上