石蜡切片的制作及HE染色

石蜡切片的制作及H.E染色

实验目的 实验原理 实验用品

方法与步骤 实验结果 实验报告

实验目的 掌握小鼠组织石蜡切片的制作过程 掌握HE染色的基本原理和染色方法

实验原理 利用光学显微镜对生物样品进行观察，需要样品必需要 一定的厚度范围内，才能保证光线的透过性。 由于生物样品多为软性材料，所以必需将其包埋在一定 的固体支持物中，常用的支持物有石蜡、火棉胶等。其 中石蜡切片是最常用的光镜样品制片技术。 苏木素(Hematoxylin)与伊红(Eosin)对比染色法( 简称H.E.对染法)是组织切片最常用的方法。这种方法 染色广泛，对组织细胞的各种成份都可着色，便于全面 观察组织构造，而且适用于各种固定液固定的材料，染 色后不易褪色可长期保存。经过HE染色细胞核被苏木素 染成蓝紫色，细胞质被伊红染色呈粉红色。

实验用品 实验器材：恒温箱、切片机、解剖器械、 载玻片、酒精灯、染色缸和烧杯等。 实验试剂： Carnoy固定液；二甲苯；各级浓度的酒精 溶液；Ehrlich苏木精染液；伊红染液 实验材料：小鼠小肠或肝组织

方法与步骤

石蜡切片样本的制作 HE染色

石蜡切片制作过程切片前的设 备试剂准备 取 材 脱 水 粘 片 脱 水 固 定 透 明 烤 片 透 明 修 块 包 埋 脱 蜡 封 片 冲 洗 修 蜡 入 水 修 切 切 片 染 色

烘干后粘 贴标签。

1、取材:断头处死小鼠，剖开腹腔，取出一部分肝组织，生理盐水冲洗， 将其修切成小块，取材要迅速且组织块尽量小(5*5*2mm)

肝脏

2.固定 肝组织切成小块，用固定液固定24小时。 固定的作用： 1: 防止自溶 2: 防止膨胀和收缩 3:使

组织块硬化便于制片 4:保持原有状态 5:防止组织块在制片

过程中损坏。6:使不同组织产生不同的折光率，对染 料不同的亲和力。

3.脱水70%的乙醇三级，每级15分钟85%的乙醇一级，每级15分 钟 95%的乙醇一级，每级15分钟

100%的乙醇三级，每级15分钟

4.透明、透蜡 100%的乙醇(1/2)+二甲苯(1/2) 5分钟

100%的乙醇(1/3)+二甲苯(2/3) 5分钟 纯二甲苯两级，每级5分钟 二甲苯(2/3)+石蜡(1/3)15分钟 二甲苯(1/2)+石蜡(1/2)15分钟 二甲苯(1/3)+石蜡(2/3)15分钟 纯石蜡三级，每级20~30分钟

5.石蜡包埋

6.切片

材料上切片机切片，用蒸馏水将切片贴于干净无油 的玻片上，在酒精灯上略烤，使切片展平，将贴好 的片子于室温老化3—7天后，即可用于染色。

7.贴片1、将单张切片，用镊子夹住蜡片的一边并提起，铺于恒 温水中(光亮的一面朝下)立即用毛笔轻轻拉展以切片无 皱褶为最好。

2、待切片在恒温水内充分摊开展平后，将载玻片垂直插 入水中轻靠切片，随即将玻片直立提起，拨正切片位置。 3、用铅笔在玻片的毛玻璃上写上标本编号，字要写得小 而清楚、端正。 4、贴好的切片置于60℃恒温箱内干燥2小时，蛋白质凝固 后即可染色。

切片到水；染色；蓝化；分化；切片再入自来水流水中使其恢复蓝色。低倍镜检查见细胞核呈蓝色、结构

清楚；细胞质或结缔组织纤维成分无色为标准。然后入蒸馏水漂洗一次；切片入50%乙醇→70%乙醇→80% 乙醇中各3~5 min;复染；放入95%乙醇中洗去多余 的红色，入无水乙醇中3~5 min;二甲苯透明，封片 ，镜检。