DNA的粗提取与鉴定课件

实验材料的选取材料：鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、 香蕉、鸡血、 香蕉 猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培养 基中培养的大肠杆菌。 原则上，凡是含有DNA的生物材料都可以 考虑，但是，选用DNA含量相对较高的生 物组织，成功的可能性更大

鸡是真核生物，真核生物的DNA主要在染 色体上。 鸟类的血细胞核大，DNA多 不需要破除细胞壁 问题：鸡血细胞液在取材之后，到实验前， 是否需要特殊处理吗？ 柠檬酸钠抗凝

一、提取血细胞核物质(动物)问题：鸡血细胞虽然没有细胞壁，但是 依然有细胞膜 有细胞膜，以你所学的知识，有什 有细胞膜 么比较简便但是可行的方法可以破碎细 破碎细 胞膜？ 胞膜？

讨论：为什么 加入蒸馏水能 使鸡血细胞破 裂？

动物细胞——利用细胞的渗透压 来破碎细胞。

植物材料，还可以通过加入一定 量的蒸馏水来涨破细胞呢？

一、提取血细胞核物质(植物) 洗涤剂的作用： 洗涤剂也分为亲水基团和 亲脂基团，可以与细胞膜 中的蛋白质结合，使之溶 解，进而瓦解细胞膜。 食盐的作用： 食盐中主要含有NaCl,有 利于DNA的溶解。

问题：这时的滤液可能含有哪些细胞 成分？ 主要有DNA、RNA、核蛋白、多糖 核蛋白、 核蛋白 多糖等 我们应该如何将DNA单独分离出来？

DNA溶解在浓度较高的 溶解在浓度较高的NaCl溶液溶液中 溶解在浓度较高的 溶液溶液中

在 NaCl DNA的溶解性 DNA的溶解性 溶液浓度低于 0 . 14 当氯化钠的物质的量浓度为 mol/L 时 ， DNA 的溶解度随 mol/ DNA的溶解度 2 mol / L 时 ， DNA 的溶解度 DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不 DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不 NaCl溶液浓度的增加而逐渐 NaCl溶液浓度的增加而逐渐 最大， 最大 ， 浓度为 mol/Lmol/ mol/L时 ， 降低 ； 在 0 . 14 0. 14 mol/ 时 同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解， 利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解， DNA的溶解度最低 的溶解度最低。 L 时溶解度最小； NaCl溶 ， DNA 的溶解度最低 。 利 DNA溶解度最小 DNA 溶解度最小 ； 当 NaCl 溶 用这一原理， 可以使DNA 用这一原理 ， 可以使 DNA在 而使杂质沉淀， 而使杂质沉淀，或者相反 ， DNA 的 液浓度继续增加时， DNA 在 液浓度继续增加时 DNA的 盐溶液中溶解或析出 溶解度又逐渐增大。 溶解度又逐渐增大。

①根据DNA在NaCl溶液中的溶 根据DNA在NaCl溶液中的溶 ②如何通过控制NaCl溶液的浓 如何通过控制NaCl溶液的浓 解度曲线图， 解度曲线图 ， 思考在什么浓 度使DNADNA 的溶 解 度

最 小 ？ 度使 DNA在盐溶液中溶解或析 在盐溶液中溶解或析 度下 ， D NA的溶 出？ NaCl溶液中的溶解度是 DNA在 DNA在NaCl溶液中的溶解度是 如何变化的？ 如何变化的？

用高浓度的盐溶液溶解 用高浓度的盐溶液溶解DNA,能 ， 除去在高盐中不能溶解的杂质； 除去在高盐中不能溶解的杂质；用 低盐浓度使DNA析出，能除去溶 析出， 低盐浓度使 析出 解在低盐溶液中的杂质。 解在低盐溶液中的杂质

二、溶解细胞核内的DNA 将物质的量浓度为2mol/L的氯化钠 溶液加入到滤液中，并用玻璃棒沿 沿 一个方向不停地轻轻搅拌，使其混 一个方向不停地轻轻搅拌 合均匀，这时DNA在溶液中呈溶解 状态。

三、析出含DNA的粘稠物 缓慢贴壁加入蒸馏水，并用玻璃棒沿 沿 一个方向不停地轻轻搅拌，以利于 一个方向不停地轻轻搅拌 DNA分子的附着和缠绕。同时应注意 控制加水量，使NaCl溶液的终浓度为 0.1~0.2mol/L,直到溶液中丝状物不 再增加时为止。

四、滤取含DNA的粘稠物 用放有多层纱布 多层纱布的漏斗，过滤上一步 多层纱布 中的溶液至1000mL的烧杯中，含DNA 的粘稠物被留在纱布上。

五、将DNA的黏稠物再溶解 取一个50mL的烧杯，向烧杯内注入物 质的量浓度为2mol/L的氯化钠溶液 20mL,用钝头镊子 钝头镊子将纱布上的黏稠物 钝头镊子 夹至氯化钠溶液中，用玻璃棒沿一个 沿一个 方向不停地轻轻搅拌，使黏稠物尽可 方向不停地轻轻搅拌 能多地溶解于溶液中。

六、过滤含有DNA的氯化钠溶液 取一个100mL的烧杯，用放有两层纱 布的漏斗，过滤上一步中的溶液，取 其滤液，DNA溶于滤液中。