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实验报告

课程名称： 营养与食品卫生学 指导老师： 焦晶晶 成绩：__________________ 实验名称： 维生素B2负荷尿试验与应用 实验类型： 应用型

一、实验目的和要求（必填） 二、实验内容和原理（必填）

三、主要仪器设备（必填） 四、操作方法和实验步骤

五、实验数据记录和处理 六、实验结果与分析（必填）

七、讨论、心得

一、实验目的和要求

1、通过负荷尿试验测定尿中核黄素排出量，评价人体核黄素营养状况。

2、掌握荧光分析法的基本原理及方法。

3、熟悉荧光分光光度计的使用方法。

二、实验原理

1、核黄素为荧光化合物，在紫外线下发黄绿色荧光，在稀溶液中荧光强度与核黄素浓度成正比。

2、核黄素可被低亚硫酸钠还原而失去荧光，故测定还原前后的荧光强度可去除干扰性荧光物质的影响。

3、核黄素属于水溶性维生素，易从尿中排出体外，在满足人体组织方面的需要后，多余的都将从尿中排出。在服用大剂量核黄素后，若人体组织中核黄素充足，则尿中排出核黄素含量高；若人体中缺乏核黄素，则给予的核黄素将大量被组织利用，尿中排出量少。因此人体核黄素营养水平可在通过负荷尿试验检测，24小时负荷尿核黄素排出量在200μg及以上视为人体核黄素营养水平充足，200μg以下视为不足。

三、仪器与试剂

1、荧光光度计

2、酸性水：浓硫酸0.3ml加蒸馏水至200ml。

3、核黄素标准储备液：精密称取25mg核黄素于1000ml容量瓶中，用酸性水稀释至刻度，移植棕色瓶内，冷藏备用。

4、核黄素标准应用液：吸取上液4ml，用酸性水稀释至100ml，临用时配置。

5、低亚硫酸钠。

四、操作方法和实验步骤

1、取尿样1ml加酸性水19ml于一具塞试管内，混匀，在激发波长420mm和发射波长530mm处测定荧光强度，记作读数A。再取10mg低亚硫酸钠直接加入比色杯内，摇匀，立即测定荧光强度，记作读数B。

2、取尿样1.0ml加核黄素标准应用液1.5ml，加酸性水17.5ml于一具塞试管内，混匀，在激发波长420mm和发射波长530mm处测定荧光强度，记作读数C。

3、计算尿中核黄素含量：

尿中核黄素含量（μg）

A B 内标核黄素浓度（μg/mL) 尿液总量（mL） C A

五、实验数据记录和处理

表一 测定值及计算结果

A

9.5 B 0.2 C 12.2 尿液总量（mL） 310.5 尿中核黄素含量（μg） 80.2

表二 尿中核黄素含量

组别

1 2

3

4

5

6

平均 尿中核黄素含量（μg） 87.4 131.4 77.3 67.0 80.2 137.8 96.9

六、实验结果与分析

1、测定该尿样中核黄素含量为96.9μg，小于200μg，说明此人体内核黄素缺乏。

七、讨论

1、本次试验结果示该24h负荷尿尿样中核黄素含量低于正常，分析原因如下：（1）此人体内核黄素缺乏，导致给予的核黄素被大量利用，尿中排出量减少；（2）本次试验本应需要在暗室中进行，但在实际操作中并未做到避光，可能造成样本中核黄素见光分解，测定值偏低；（3）本次试验过程中，所用荧光光度计只有两台，导致测定不够及时，测定值偏低。

2、本次试验中，对于同一份样本，各组测定的核黄素含量相差较大，分析原因如下：（1）采用的荧光光度计准确度不一致，可能对结果造成影响；（2）由于操作者不是同一人，操作过程可能出现不一致的情况，造成测定结果的差异。