食品微生物学实验技术 思考题答案

1. 用油镜观察时应注意哪些问题？在载玻片和镜头之间加滴什么油?起什么作用？
答：应该先用擦镜纸将镜头擦干净,以防上次实验的污染.操作时,先低倍再高倍.用完要擦 掉油.加香柏油,作用是增加折光率,也就是增加了显微镜的分辨率.油的折光率和分辨率成反 比(有公式),同时与波长成正比.

2. 列表比较低倍镜、高倍镜及油镜各方面的差异。为什么在使用高倍镜及油镜时应特别注意 避免粗调节器的误操作 答：使用高倍镜和油镜时镜头距离标本较近，而粗调节器的调节幅度较大，粗调节器的误 操作会使镜头大幅度向标本移动， 很容易损坏标本和镜头。 一般先用低倍镜找到物象后换到高 倍镜，就只需要用细调节器了。

3. 什么是物镜的同焦现象？它在显微镜观察中有什么意义？
答：在一般情况下，当物像在一种物镜中已清晰聚焦后，转动物镜转换器将其他物镜转到 工作位置进行观察时，物像将保持基本准焦的状态，这种现象称为物镜的同焦。利用这种同焦 现象， 可以保证在使用高倍镜或油镜等放大倍数高、 工作距离短的物镜时仅用细调节器即可对 物像清晰聚焦，从而避免由于使用粗调节器时可能的误操作而损坏镜头或载玻片。

4. 影响显微镜分辨率的因素有哪些？
答：物镜的 NA 值（物镜的数值孔径）与照明光源的波长

5. 根据你的实验体会,谈谈应如何根据所观察微生物的大小,选择不同的物镜进行有效地观 察
答：细菌用油镜，真菌用高倍镜。都是先用低倍镜找到目标后，再用高倍镜调到合适的视 野和合适的清晰度。
答：放线菌、酵母菌、多细胞真菌相对较大，用放大 40 倍的物镜就可以看了，细菌小， 要用放大 1000 倍的物镜看，感觉还很小。病毒那就要用电子显微镜看了。

6. 哪些环节会影响革兰色染色结果的正确性？其中最关键的环节是什么？
答：涂片环节、加热固定环节、脱色环节；其中最关键的环节是脱色环节

7. 进行革兰氏染色时，为什么特别强调菌龄不能太老，用老龄细菌染色会出现什么问题?
答：着色不均，染色效果不好。阴性阳性不明显分不太清楚,问题是：不便于显微镜下观察 是阳性菌还是阴性菌

8. 革兰氏染色时，初染前能加碘液吗?乙醇脱色后复染之前，革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌
应分别是什么颜色?
答：不可以。因为碘与染料会结合成大分子，使得染料分子不能穿过细胞的细胞壁，对实 验结果造成影响。脱色后复染前，革兰氏阳性菌呈紫色，阴性菌无色。

9. 不经过复染这一步，能否区别革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌？
答：不行。在复染之前，革兰氏阴性菌是无色透明的，

在显微镜下很难观察到；或者脱色过度，也会造成阳性菌脱色，不经过复染，无法进一步区别。

10. 你认为制备细菌染色标本时,应该注意哪些环节? 答:1、

11. 为什么要求制片完全干燥后才能用油镜观察?
答:1、若未完全干燥,载玻片上的液体会污染油镜镜头。镜头非常精密,被污染后不利于下 次观察；2、若未完全干燥，水滴会影响油与玻璃之间折光率，造成视野不够清晰。

12. 如果涂片未以热固定,将会出现什么问题?加热温度过高、时间太长，又会怎么样呢？
答:如果没有加热固定的话， 水分蒸发太慢或者在染色时菌体会被冲洗掉； 如果加热时间过 久，菌体变形或形态破坏，无法染色。

13. 制备培养基的一般程序是什么？
答：称量——溶解—调 PH 值—融化琼脂—过滤分装—包扎标记——灭菌——倒平板

14. 做过本次实验后，你认为在制备培养基时要注意些什么问题？
答：溶解配料的水要适量；PH 要调到 7.3 左右；要小心手提式高压锅的使用；倒平板时要 防止培养基被污染

15. 灭菌在微生物学实验操作中有何重要意义？
答：防止培养基被污染；防止杂菌影响实验结果

16. 试述高压蒸汽灭菌的操作方法和原理。
答：高压灭菌的原理是：在密闭的蒸锅内，其中的蒸汽不能外溢，压力不断上升，使水的 沸点不断提高，从而锅内温度也随之增加。在 0.1MPa 的压力下，锅内温度达 121℃。在此蒸 汽温度下，可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢。 操作方法：加水——装料、加盖——排气——升压、保压、和降压——取料

17. 高压蒸汽灭菌时应注意哪些事项？
答：第一，无菌包不宜过大，不宜过紧，各包裹间要有间隙，使蒸汽能对流易渗透到包裹 中央。第二，布类物品应放在金属类物品上，否则蒸汽遇冷凝聚成水珠，使包布受潮。阻碍蒸 汽进入包裹中央，严重影响灭菌效果。第三，定期检查灭菌效果。

18. 如何确定平板上某单个菌落是否为纯培养？请写出实验的主要步骤。
答：通过观察菌落特征；单个菌落再次划线分离。

19. 试述如何在接种中，贯彻无菌操作的原则?
答：保持操作台的无菌状态与在无菌室操作；操作前，要进行手的消毒；接种环要加热灭 菌；接种物品要标记。

20. 以斜面上的菌种接种到新的斜面培养
基为例说明操作方法和注意事项。

21. 为何要用乳酸-石炭酸溶液作霉菌水浸片?
答：用 …… 此处隐藏：667字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……