细胞实验步骤

一 实验准备工作

1 材料和试剂

RPMI1640培养基：美国Gibco公司；

胎牛血清：Hyclone公司；

佛波酯（PMA）：sigma公司；

MTT：Biomol分装；

二甲基亚砜（DMSO）：sigma公司；

磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钾、氯化钠、碳酸氢钠（分析纯）： 细胞因子测定ELISA试剂盒：

硫酸铜、重铬酸钾、浓硫酸、单蒸水、三蒸水、医用酒精

2 主要仪器与设备

24、96孔细胞培养板：coning公司

多功能酶标仪

移液器

超净工作台

CO2细胞培养箱

过滤器

电子天平

恒温振荡培养箱

台式低速离心机

恒温水浴箱

冰箱（-20℃低温冰箱，-80℃超低温冰箱）

显微镜、倒置显微镜

细胞计数器

一次性培养瓶

高压灭菌锅

干燥箱

3 主要试剂配制

（1）10×PBS缓冲液：称取氯化钠80g，磷酸氢二钠28.64g，氯化钾2.25g，磷酸二氢钾2.05g于烧杯内，加入一定量的三蒸水使其溶液，最后用容量瓶定容至1L。控制其PH值在7.2-7.4之间。若出现未完全溶解，60℃水浴助溶。再过滤（0.22um微孔滤膜过滤除菌）备用。临用前稀释10倍，制成1×PBS，高压灭菌后4℃保存备用。

（2）MTT溶液：称取50mg MTT粉末放入小玻璃瓶中，加10ml 1×PBS，60℃