数据分析的可变性

流式细胞仪的检测结果以一长串简单的二进制数字记录在计算机的文件中，如何准确、客观地分析这些数字是计算机软件所应具备的基本功能。使用这些软件首先应该提出特定的问题，然后在软件的帮助下解决问题，并以流式细胞术所特有的形式表达出来。

如果我们的问题是：“表达某种蛋白的细胞所占的百分率是多少?”，那么在数据分析时首先应当选定这群特定的细胞，在流式细胞术中称为“设门(gating)”。这个过程也成为流式数据分析中的第一个可变因素。细胞可以根据其特定的前向散射光和侧向散射光特征来设定，设定淋巴细胞最常用的方法即是如此。然而根据散射光特性来设门是非常主观的。因为我们至今仍不十分清楚细胞被激活或浸润组织后，散射光特性的改变模式，同时我们不能像荧光信号一样对散射光信号进行很好的质控。所以目前比较公认的方法是用一个荧光参数辅助一个散射光参数来进行设门，通常情况下，这个荧光参数来自荧光标记的CD45抗体。因为CD45在不同的白细胞亚群、不同的发育成熟阶段的表达量有差异，因此“侧向散射光/CD45”双参数设门方案已被广泛地应用于CD4绝对计数时淋巴细胞群的设定(淋巴细胞的CD45强表达，侧向散射光较低)和白血病患者骨髓标本中原始细胞的界定(原始细胞上CD45弱表达，侧向散射光与淋巴细胞相近)。 数据分析时的第二个可变因素为如何确定阳性细胞和阴性细胞的分界线。通常的做法是用一个阴性标本作为参照，这就要求准确、