根据GenBank中20株猪圆环病毒(PCV2)核苷酸序列设计两对引物,建立的检测猪圆环病毒的多重PCR方法,其中引物P1、P2为PCV特异性,扩增938bp片段。P3、P4为PCV2特异性扩增490bp,因此本方法不仅可以扩增PCV片段,还可以同时区分PCV1和PCV2。该方法具有良好的特异性和敏感性,为猪圆环病毒的临床诊断与流行病学调查等研究奠定了基础。

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第2 8卷第 5期20年 06 9月

中国预

防兽

医学报

VO1 . 28. NO. 5 S pt 2 06 e . 0

C h n s ou na e n ie Veern r e i ie i e e J r lofPrve tv t i a y M d cn

猪圆环病毒多重 P CR诊断方法的建立崔尚金，全滟平李曦，,符芳，姜艳玲，张莉( 1中国农业科学院哈尔滨兽医研究所疫病诊断与流行病学中心/医生物技术国家重点实验室，黑龙江哈尔滨，10 0;兽 5 0 1 2北京市农林科学院畜牧兽医研究所 .北京 10 9 ) 00 7

摘要：根据 G n ak 0 e B n中2株猪圆环病毒 (C 2 P V )核苷酸序列设计两对引物，建立的检测猪圆环病毒的多重P CR方法，其中引物 Pl 2 CV特异性，扩增 9 8b、P为P 3 p片段。P 3、P为 P V2异性扩增4 0b,因此本方法 4 C特 9 p

不仅可以扩增 P V片段，还可以同时区分 P V1 P V。该方法具有良好的特异性和敏感性，为猪圆环病毒的 C C和 C 2临床诊断与流行病学调查等研究奠定了基础。 关键词：猪圆环病毒；多重P R C中图分类号：￥ 5 .592 8 26+. 文献标识码：B 文章编号：l0—59 2 0 )40 8—4 0 80 8 (0 60—5 10

Th s ab ih e to ut lx PCR fp r i e cr o i s e e t l m n fa m lp e s i o o c n i vr c uC I h n -n, UA npn L i F a g, I G Y nl g, H G L ! U a g i Q N Ya—ig, I u F n J S j x, AN a—n Z AN i i( .Nain lAn ma s ae Dig o i a d Epd mi ne,Nai n lk yLa o aoy o ee n r oe h oo y 1 t a i lDie s a n ss n ie c Ce tr o to a e b r tr fv tr ay Bi tc n lg, i

HabnV tr ayR sac ntueo AAS Habn 10 0,hn; . nma Hh sadyadVe r ayR sac ntue B in ri ee n ee hIsi t f ir r t

C . ri 5 0 1C ia 2 A i l ub nr n ti r eerhIstt, e ig en i j

Mu iia Acd myo r utr n oet, e ig 10 9,hn ) ncpl ae f i l ead F rs B in 00 7C ia Ag c u y r j

A bsr t tac:Th u l a e e e h e n c e rs qu nc om oog n die st 0 sr i l y a d v r iy of2 tansofPCV n I d PCV2 a e c a r ompa e o d sgn t ar r d t e i wo p is of tpe s cfc rme s.The im e s a a p i e h PCV r—pe i c e y—pe i p i i r pr r of PI nd P2 m lf d t e i viuss cf s gmen wih h sz o 38 p.The i t t t e ie f 9 b prm e s f P3 n m pl ed te PCV 2 y—p ci c e i r o a d P4 a i i f h tpe s e f s gmen i h ie of49 b i tw t t e sz 0 p.A ulil x PCR i ev l e s d h m tp e s d eop d ba e on t es wo p is fprm e s t yp n fe eni t V I n h e t ar o i r o t e a d difr tae PC a d PCV 2. tm ia i h CR e ci n m a e t e h d The op i z ton oft e P r a to k he m t o m or f cin l ee i e ty.Th e hnqu sbe n a le nt he ci i ldig ss a d e d m i ogca e eac e t c i e ha e pp id i o t lnca a no i n pie ol i lr s r h.

K y WO d: o c n i o i s mu t lx P e r s p r i e cr v r; c u l p e CR i

猪圆环病毒 ( oc ec cvrs P V)是迄今 P r n i o i, C i r u发现的最小的动物病毒。Tshr (92从猪肾细 i e 18 ) c胞系P 5 ( T C C L 3 )中分离到一种无囊膜、 KI A C— C L 3

二十面体对称的D A病毒，不引起细胞病变，接种 N猪也不表现任何临床症状和病理变化。Ca￣报道 l k” r 19年在加拿大西部的猪群中发生一种称之为猪断 91乳后多系统衰竭综合征 ( ot enn lss mi P s aigmu i t c w ty ewat gsn rm, P sn ydo e i MWS的疾病。随后，美国、 )

的。对 P V和P C MWS一系列研究表明，P V在猪的 C

体内长期演变过程中，产生了有致病性的变异株，称为P V;相应地将没有致病性的持续污染 P 1 C 2 K5细胞的毒株称为P V1 C是无致病性的，广泛 C。P V1

存在于猪群中，而P V是致病性的，能引起多种疾 C 2病综合征。流行病学调查表明，猪圆环病毒在世界各国的猪群中广泛存在，在临床上易与其他病原混合感染，表现出多种临床症状和病理变化。因此区

英国、德国等许多国家和地区都有此病的报道『, 2 ~1该病主要特征是进行性消瘦、多系统病理损伤，严重影响断乳猪生长发育，给养猪业造成相当严重的经济损失，因而引起各国的高度重视。进一步研究

分P V1 P V对于临床诊断与流行病学调查具有 C和 C 2重要的意义。‘。 1。本实验建立了猪圆环病毒的多重 P R诊断方法，该方法具有高度的敏感性、特异 C性。所设计的两对引物既能检测猪圆环病毒，又能区分基因型。通过对 P R反应条件的优化，确定 C

发现此病主要是由一种致病性的猪圆环病毒引起收稿日期：20—11 0 41—6

作者简介：崔尚金 (9 1) 1 7一，男，山东青州人，博士，副研究员，从事流行病学和诊断技术研究