微生物学课件2

Chapter 2 微生物的纯培养 及显微技术Sect 1一、前言 二、微生物操作基本技术——无菌技术 三、微生物的分离和纯培养 四、微生物的保藏技术

微生物的分离和纯培养

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一、前言1、 微生物研究对象：群体 2、研究基础： 1)纯培养技术：把特定的微生物从自然界混杂存在的状态中 分离、纯化出来的技术。 ● 培养物： 在人为规定的条件下培养、繁殖得到的微生物群 体称为培养物。 ● 纯培养物：只有一种微生物的培养物。 2)显微技术：包括显微标本的制作、观察、测定、分析和记 录。

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培养基

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二、微生物操作基本技术——无菌技术1、微生物培养的常用器具及其灭菌 1)常用器具：试管、玻璃烧瓶、平皿、接种环(针)、无菌操 作台、酒精灯等 2)灭菌：

●灭菌(sterilization):杀灭物体上所有微生物的方法。即采用 强烈的理化因素使任何物体内、外部的一切微生物永远丧失其生 长繁殖能力的措施。它比消毒要求高，包括杀灭细菌芽胞在内的 全部病原微生物和非病原微生物。如高温、辐射、超声波和激光 等。

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●消毒(disinfection):杀死物体上病原微生物的方法，并不一 定能杀死含芽胞的细菌或非病原微生物。即仅杀死物体表面或内 部一部分对人体有害的病原菌，而对被消毒的生物基本无害的措 施用以消毒的药品称为消毒剂(disinfectant) ●抑菌(bacteriostasis):抑制体内或体外细菌的生长繁殖。常 用的抑菌剂为各种抗生素。

●防腐(antisepsis):利用某种理化因素完全抑制霉腐微生 物的生长繁殖而对被消毒的物体基本无害的措施。如低温、缺氧、 干燥、高酸、高渗或防腐剂。细菌一般不死亡。

●无菌(asepsis):不存在活菌。

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(1)常用物理消毒灭菌方法 ● 热力灭菌法； ● 滤过除菌法； A、 热力灭菌法 ●干热灭菌法▲焚烧：废弃物、尸体； ▲灼烧：接种环、试管口； ▲干烤：玻璃器皿； ▲红外线：医疗器械。

● 辐射杀菌法； ●超声波杀菌法。

● 湿热灭菌法 Ⅰ)常压下： ●巴氏消毒法：61.6-62.8 ℃30min或71.7 ℃15-30s,主要用于牛乳消毒。

● 煮沸法；

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●间歇蒸汽消毒法：80-100 ℃ 15-60 min,37 ℃过夜，循环三次。主要适用于不耐热培养基灭菌。 Ⅱ)加压下：

● 连续加压灭菌：135-140 ℃下处理5-15 s ,主要适用于大规模的发酵工厂培养基灭菌；

●常规加压灭菌：121 ℃(压力：1kg/cm2 或15 磅/英寸)15~20 min,是一种最为广泛的灭菌方法。 ▲ 注意灭菌物体含菌量的影响，含菌量越高灭菌时间越长。 天然原料>化学试剂 ▲ 空气的排除程度，必须尽量驱尽锅内空气。是依靠温度而 不是压力来达到灭菌的目的。15 磅/英寸：纯蒸汽 121

℃;排除1/2 空气：112 ℃;

不排除空气： 100 ℃。

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灭菌锅

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▲ 灭菌对象体积；50 ml (12min), 2000ml (30min)▲ 灭菌对象pH值： pH<6.0 最易死亡；而pH6.0~8.0时，微生 物最不易死亡。 ▲ 加热与散热的速度。

B、 辐射杀菌法；● 紫外线：波长200-300nm的紫外线具有杀菌作用。其主要作用于DNA,使一条DNA链上相邻的两个胸腺嘧啶共价结合形成二 聚体，导致细菌变异和死亡。

●电离辐射： 高速电子、X射线、γ射线

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洁净工作台

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●微波：波长1mm~1mC、滤过除菌法● 赛氏滤器； ● 玻璃滤器； ● 薄膜滤器

D、超声波杀菌法● 是一种机械的作用因素，每秒超过2万次振动的声波即为超声 波。常用的超声波发生器能产生20-100千赫的声波。可使细菌细胞 壁裂解而死亡。

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超声仪

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(2)化学消毒剂：

●消毒剂的种类：酚类、醇类、重金属盐类、氧化剂、

表面活性剂、烷化剂。

●消毒剂的应用：病人排泄物与分泌物、皮肤、粘膜、

饮水、厕所、空气、手。

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3)接种操作

● 用接种环或接种针分离分离微生物或在无菌条件 下把微生物由一个培养皿转接到另一个培养皿进行培 养。

图-2-1 无菌操作转接培养物 A,靠近火焰；B,无菌操作箱紫外照射30min以上。

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三、微生物的分离和纯培养● 菌落：单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长 繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、有一定形态结构的 子细胞生长群体，称为菌落。 ●菌苔：许多菌落连成一片称为菌苔。 ●培养基：培养微生物的营养物质。常用的有：肉汤、LB培养 基等。

●固体培养基：用琼脂或其它凝胶物质固化的培养基。常用 1.5%琼脂。●平板：即培养平板的简称，它是指熔化的固体培养基倒入平 皿冷却凝固后，盛有固体培养基的培养皿。

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一)优势微生物分离纯培养

1、用固体培养基分离纯培养● 稀释倒平板法缺点：热敏感细菌易死亡； 影响严格好氧菌的生长。

● 涂布平板法注意：平板不能太干也不能太湿，同时不能损坏平板。

● 平板划线分离法★ 扇形； ★ 连续划线； 注意：不能损坏平板。 ★ …… 此处隐藏：226字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……