现代分子生物学实验原理与技术

现代分子生物学实验 原理与技术

第一章 绪论第一节 基因操作技术1.基因操作技术 基因操作技术(重组DNA技术、基因工 程)是在DNA水平上阐明生命现象的技术， 包括DNA的“切”、“连”、“扩”等。 “切”指限制性内切核酸酶切割DNA。 “连”指用DNA连接酶连接两个DNA 片段。 “扩”是指目的DNA在宿主/载体系统 中进行扩增。

2.实验方案 (1)基因操作实验的主要目的有三个： ①分离目的基因，获取DNA信息； ②分析基因结构； ③分析基因功能。

(2)试验流程设计 首先，应确定使用怎样的研究方案； 其次，根据试验规模和研究室情况； 最后，根据研究人员生活规律确定试验时间。

3.实验方法 在设计实验方法时应考虑 ①能否达到实验目的； ②是否符合实验室现状； ③是否符合自己的喜好。经费预算

实验目的

爱好

实验周期

实验方法

精度

仪器性能准确性

确 定 实 验 方 法 时 应 考 虑 的 因 素

速度

4.实验遵循的原则 ①忠于实验流程 ④设平行对照实验 ②关注实验要点 ⑤准确的试剂用量 ③准备充足的实验材料 ⑥数据整理 注意： ⑴第一次实验成功，第二次实验马虎。 ⑵实验精度：①必须严格按照实验流程进行的操作；②较严格的实验操作，允许5%的变动； ③允许20%变动的实验操作； ④不需要特别注意的实验操作。

⑶酶促反应不顺利时，若加入更多的酶或DNA,结果会 越来越糟。 ⑷不设平行对照实验往往是实验失败的原因。 ⑸样本标记的零乱也往往是实验失败的重要原因。

5.实验材料的准备 购买 利用公共服务机构 接受馈赠 写求助信要注意： ①你需要什么？ ②及时、真实的将相关信息告诉对方，不能隐瞒。 ③通常向论文通讯作者寻求帮助。 ④写信的稿纸是印有单位标志、名称、电话号码等 信息的公函纸。

第二节 实验室规则与安全⒈实验室规则 ⑴保持肃静 ⑵保持整洁 ⑶严格操作 ⑷注意节约 ⑸保证安全 ⒉实验室常识 ⑴使用贵重仪器如分析天平、分光光度剂、离心 机等倍加爱护，使用前熟知使用方法，使用时 严格遵守操作规程，发生故障时，立即关机。 ⑵凡挥发性、有烟雾、有毒和有气味的实验，均 应在通风柜内进行。

⑶配制试剂时，应对试剂纯度、结构式、分子质量等 特性熟悉，做到“有的放矢”。 ⑷量瓶是量器，不要用量瓶做容器。 ⑸洗净器皿应倒置架上，使其自然风干。 ⒊实验室安全 ⑴《实验室生物安全通用要求》查看 ⑵了解电闸、水阀煤气总阀门所在处，离开实验室检 查是否关好。 ⑶使用电器设备时严防触电。 ⑷使用高温高压锅灭菌时不得离人。 ⑸使用可燃物，特别是易燃

物，应特别小心。 ⑹凡使用腐蚀性试剂，必须谨慎操作，防止溅出。 ⑺废液特别是强酸强碱，应稀释后倒入水池。 ⑻有毒物品应按照实验室规定办理审批手续后方可领 取，使用时严格操作，用后妥善处理。

⒋实验室急救 ⑴触电①关闭电源； ②用干木棍将导线与被害者分开； ③将被害者移至木板上，与地面分离； ④急救者必须做好触电安全措施，手脚必须绝缘。

⑵火灾 隔绝氧气 ①起火物与水相容：水、湿布、沙土、灭火器等 ②起火物与水不相容：不可用水 ⑶烫伤 乙醇消毒，涂2%苦味酸或5%鞣酸，防感染 ⑷玻璃割伤或其他器械损伤 清理伤口，硼酸水洗净，涂碘酒，包扎 ⑸灼伤皮肤 ①强碱：大量清水稀释，涂5%硼酸或2%乙酸 ②强酸、溴：大量清水稀释，5%NaHCO3或5%氨水 ⑹煤气中毒 呼吸新鲜空气

思考题： ⒈什么是DNA重组技术？其实验的主要目的是 什么？ 答案 ⒉试分析有些人工作很辛苦，但总得不出理想实验结 果的原因。答案 ⒊如何获得你需要的实验材料(特别是未商品化的材 料)?答案 ⒋什么是《实验室生物安全通用要求》(GB 1948 9-2004)?据此生物学实验室可分几级？答案 ⒌实验室发生火灾时该如何处理？烫伤、灼伤时该如 何处理？答案 ⒍如何处理对环境有污染的试剂？答案

第二章 仪器操作与溶液配制第一节 常用器皿与仪器1、塑料制品 Eppendrof 管

2、微量移液器(枪)

使用方法 调节时，自大到小。由小值 调到大值时，应多调1/3圈， 再反调至设定值。

3、恒温水浴锅

多用于酶促反应，将Eppendrof管插入浮漂中 进行反应。

4、小型离心机

离心甩干是指短时间(1~3s)的离心操作，目 的是使附着于管壁的液体沉入管底。

5、离心干燥机

目的是使DNA样品快速干燥。

6、旋涡混合器

利用不对称的旋转将管内液体混匀。