习题——高效液相色谱法[1]

主要关于运用高效液相色谱法做实验以及相关作业

7. 高效液相色谱法



思考与练习7.1



（1）高效液相色谱同气相色谱法一样具有选择性高、分离效率高、灵敏度高，分析速度快的特点。
其不同点是气相色谱法所采用的流动相是气体，样品需加热或裂解，只能分析低分子量、低沸点有机化合
物，永久性气体，分离机理是依据吸附、分配两种原理进行分离；而液相色谱所采用的流动相是液体，样
品需制成溶液，可分析低分子量低沸点样品，高沸点、中分子、高分子有机化合物，离子型无机化合物，
热不稳定，具有生物活性的生物分子；分离机理是依据吸附、分配、筛析、离子交换、亲和等多种原理进
行分离。



（2） 应用凝胶色谱法分析比较合适。



（3）常用的固定相为全多孔型和表面多孔型硅胶微粒固定相。在选用时应注意：根据分析样品的特
点及分析仪器来选择合适的吸附剂，选择时考虑的因素主要由吸附剂的形状；粒度、比表面积等。



（4）洗脱液即指流动相。高效液相色谱对洗脱液的要求为：①选用的溶剂应当与固定相互不相溶，
并能保持色谱柱的稳定性；②选用的溶剂应有高纯度；③选用的溶剂性能应与所使用的检测器相匹配；④
选用的溶剂性能应对样品由足够的溶解能力；⑤选用的溶剂应具有低的粘度和适当低的沸点；⑥应尽量避
免使用具有显著毒性的溶剂。



（5）可分为正相分配色谱法和反相分配色谱法



（6）采用化学键合相的液相色谱法称为键合相色谱。



（7）键合相固定相的类型有：①烷基，主要用于恩来中等极性化合物，溶于水的高极性化合物；②
苯基，用于分离非极性至中等极性化合物；③酚基,用于分离中等极性化合物，保留特性相似于C8固定相，
但对多环芳烃、极性芳香族化合物、脂肪酸等具有不同的选择性④醚基，用于分离酚类、芳硝基化合物；
⑤二醇基，用于分离有机酸及其齐聚物，还可作为分离肽，蛋白质的凝胶过滤色谱固定相；⑥芳硝基，用
于分离具有双键的化合物；⑦腈基，用于分离极性化合物；⑧胺基，正相用于分离极性化合物，反相用于
分离单糖、双糖合多糖碳水化合物，阴离子交换可分离酚、有机羧酸和核苷酸；⑨二甲胺基，正相用于分
离极性化合物，阴离子交换可分离弱有机碱；⑩二胺基，正相分离相似于胺基柱的分离性能，阴离子交换

可分离有机碱。



思考与练习7.2



（1）高压输液系统、进样器、色谱柱、检测器、工作站



（2）贮液器、高压输液泵、过滤器、梯度洗脱装置



（3）恒压泵、恒流泵



（4）高压梯度、低压梯度




（5

主要关于运用高效液相色谱法做实验以及相关作业

）六通阀进样器、自动进样器



（6）被测组分定性检测、光谱定性信息



（7）示差折光、通用型、参比池、测量池



（8）溶剂的干扰 、 温度变化、梯度洗脱



（9）A



（10）A



（11）D



（12）其原理为：取样时，用平头微量注射器注入样品溶液，样品停留在定量管中，多余的样品溶液
溢出，进样时，将进样器阀柄顺时针转动60°，流动相与定量管接通，样品被流动相带到色谱柱中进行分
离分析。



（13）HPLC要求检测器：①具有高灵敏度和可预测的响应；②对样品所有组分都有响应，适用范围广；
③温度和流动相流速的变化对响应没有影响；④响应与流动相的组成无关，可作梯度洗脱；⑤死体积小；
⑥使用方便、可靠、耐用、易清洗和检修；⑦响应值随样品组分量的增加二线性增加，线性范围宽；⑧不
破坏样品组分；⑨能对被检测的峰提供定性和定量信息；⑩响应时间足够快



（14） 液相色谱仪的日常维护包括：

A.贮液器

①完全由HPLC级溶剂组成的流动相不必过滤，其他溶剂在使用前需过滤

②过滤器使用3-6个月后或出现阻塞现象时要及时更换新的

③用普通溶剂做流动相贮液器时应不定期废弃瓶子，买来的专用贮液器也应定期用酸、水和溶剂
清洗。

B.高压输液泵

①用高质量试剂和HPLC级溶剂

②过滤流动相和溶剂

③溶剂使用前必须先经过脱气

④每天开始使用时放空排气，工作结束后从泵中洗去缓冲液

⑤不让水或腐蚀性溶剂滞留泵中

⑥定期更换垫圈

⑦需要时加润滑剂

⑧平时应常被泵密封垫、单向阀、泵头装置、各式接头、保险丝等部件和工具

C.进样器

①对六通阀而言，保持清洁和良好的装置可延长阀的使用寿命

②进样前应使样品混合均匀

③样品瓶应清洗干净

④自动进样器针头应有钝化斜面，侧面开孔，针头一旦弯曲应该换上新针头，不能弄直了接着使
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