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广西农业科学

20年第4期 02

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一

株土壤炭疽杆菌的分离培养及理化特性鉴定磨龙春郭建刚黄夏 (西区兽医防检站南宁广 500 ) 3 0 1

刘杰标韦庄备周立平周善强(西河池地区兽医站 )广

炭疽病是人畜共患的急性传染病之一。广西最早有文献记载炭疽流行是 13年， 9 2家畜炭疽发病在 14年前已有明确记录。 99炭疽杆菌在接触空气后能形成抵抗力很强的芽胞，可在被污染的土壤中存活数十年，因而土壤是传播炭疽的主要因素。炭疽杆菌的分离培养在临床诊断、防疫检验等方面非常重要。 在未经使用抗菌素治疗的病死畜上易分离到炭疽杆菌，但在污染严重的土壤中则很难分离到炭疽杆菌，最敏感的分离方法仍是一个世纪前 P s u应用的 at r e方法。据此法，们从天峨县一炭疽疫点污染的土根我

兰氏染色高倍镜下观察细菌形态。 荚膜染色： 2￣3小时死亡小白鼠肝、取 4 6脾涂片，经多色美兰染色，高倍镜下观察荚膜形态。

串珠试验：将待检菌株接种于 2毫升营养肉汤中，7培养 l小时，出按 2 3 C 8取单位/毫升加入青霉素混合均匀，置 3培养 4小时后涂片，再 7 C革兰氏

染色，用高倍镜观察菌体。 动力试验：取待检菌株穿刺接种半固体培养基，3℃培养 7小时后观察结果。 7 2

生化试验：取待检菌株接种生化微量鉴定管，置3培养 2小时后观察结果。 7 C 4

壤材料中分离到一株炭疽杆菌，并对分离到的菌株进行了理化特性鉴定。现报告如下：

青霉素抑菌试验：用青霉素药敏试纸贴于涂布有待检菌的琼脂平板表面，将平板置 3’培养 8 7 C小时，观察结果。 A cl氏沉淀试验： 2￣3 s i o取 4 6小时死亡小白鼠肝、脾剪碎加 5倍生理盐水， 10水浴中煮沸 3在 0 C 0分钟，用滤纸反复过滤，直至滤液透明。将滤液用毛

1材料与方法1 1待检样品 .从天峨县炭疽疫点一病死马剖杀地，分四个采样点各取 l厘米深的表层土壤一份， 0合计 4。份 12分离方法 .制备土壤混悬培养液。称取土样 10 0克放入装

细吸管重叠在小试管中的炭疽沉淀素血清上，两层间不能有气泡，同时用标准炭疽沉淀抗原及生理盐水作对照，置室温静置 3

￣分钟后观察。 .5 -

有玻璃珠的三角瓶中，加入 2倍的灭菌肉汤培养液，振摇约 2分钟， 0使土壤与肉汤充分混合后， 3 置 7 C

药敏试验：用常规药敏纸片法，用青霉素、氨苄青霉素、丁胺卡那、庆大霉素、磺胺甲基异恶唑进行药敏试验。

恒温箱中培养 2 4小时后待用。 动物接种。取经 3℃培养 2小时的土壤混悬 7 4液置 6℃水浴中加热 3分钟， 5 0杀死非芽胞菌，然后给小白鼠腹部皮下接种 0 5 .毫升/ 只。对位硝基苯甘油培养基培养。取接种土壤混悬液后 3- 7小时死亡小白鼠的肝、 6￣2 -脾接种对位硝基苯甘油培养基， 3 t恒温箱中培养 2置 7 C 4小时。 接种肉汤、普通琼脂、血平板培养基：从经 3￣ 7 C培养 2 4小时的对位硝基苯甘油培养基上，挑取具

2结果2 1培养特性 .肉汤培养基培养，絮状沉淀，呈肉汤透明清亮， 不形成菌膜和壁环。

琼脂培养基培养，菌体生长良好，菌落呈慧星状有小尾突起、扁平、表面粗糙、呈灰白色、干燥、边缘不整齐。在低倍镜下观察，可见菌落呈卷发状。血平板培养基培养，菌落生长良好，培养 1~ 8 2小时观察菌落周围无明显溶血环， 4延长培养时间

有特殊形态的单个菌落分别接种肉汤、普通琼脂、血平板培养基， 3℃恒温箱中培养 2置 7 4小时后观察结果。

13细菌鉴定 .

至 3小时后， 6出现轻微溶血，挑菌落有特殊的拉丝现象。

镜检： 2 -3小时死亡小白鼠肝、取 4￣6 -脾涂片，革