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医学动物防制 2011年12月第27卷第12期 JMedPestControl,Dec2011,Vol 27 No 12

doi:10 3969/j issn 1003-6245 2011 12 011

综 述

唐保晖

艾滋病病毒检测方法研究进展

摘要:艾滋病病毒(HIV)检测的主要目的是用于确定个体HIV感染状况及血液筛查,防止输血传播HIV,监测不同人群HIV感染率及其变化趋势,监测病程进展或抗病毒治疗效果。目前HIV的检测方法主要是使用血清学方法,用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测病人血清中的HIV抗体进行初筛,再用免疫印迹WB实验进行确认,依据HIV抗体检测结果确定是否感染HIV病毒。随着分子生物学技术的飞速发展,HIV的实验室诊断方法取得了很大进展。为此,本文对艾滋病病毒检测方法的进展作一综述。

关键词:艾滋病;HIV;检测

中图分类号:R512 91 文献标识码:A 文章编号:1003-6245(2011)12-1108-03

艾滋病病毒(HIV)即人类免疫缺陷病毒,主要侵袭人体免疫系统,导致人体发生多种疾病。HIV感染的诊断是艾滋病预防控制工作的重要组成部分,只有发现传染源才能更有效地控制艾滋病传播。要确定是否感染HIV,只有通过检测HIV的特异性抗体、抗原、核酸或病毒分离培养等,而目前血清学实验仍然是实验室检测HIV的主要方法,但随着分子生物学技术的飞速发展,HIV的实验室检测方法取得了很大进展。为此,本文对HIV抗体、抗原检测方法、核酸检测及免疫功能检测方法等的进展作一综述。1 常规HIV抗体检测的方法

HIV抗体检测分为筛查试验(包括初筛和复检)和确证试验[1]。

1 1 筛查试验

1 1 1 酶联免疫吸附试验(ELISA) 适用于大批量标本的检测,目前是各级疾控机构及大、中、小型医院实验室筛查HIV抗体的主要技术手段。可使用血液、唾液、尿液样品。ELISA的基本原理是将待测抗原或抗体先固定于固相载体表面,再用酶标记的抗原或抗体与已被固定的相应抗体或抗原发生特异性反应,加底物显色,用酶标仪测定结果。此方法是最常用的筛查方法,目前国内外主要使用第三代(双抗原夹心法)试剂,几乎不用第二代试剂。血源筛查仍以第三代ELISA为主,国际上有些国家和地区已将第四代ELISA试剂用于血源筛查。第四代ELISA试剂可同时检测P24抗原和HIV-1/2抗体。与第三代HIV-1/2抗体试剂相比,检出时间提前了4~9d。其优点在于可同时检测抗原和抗体,降低血源筛查的残余危险度[2]。

1 1 2 化学发光或免疫荧光试验 这类试剂采用发光或荧光底物,既可检测抗体,也可联合检测抗原抗体。HIV抗原或抗体包被于固相载体,加入待检样品和酶或荧光标记的HIV抗原或抗体,加发光或荧光底物,用发光或荧光仪测定结果。有效试验的阴性和阳性对照必须符合试剂盒规定。

1 1 3 快速检测(RT)及其它检测试验这类试验简便快速,适用于应急检测、门诊急诊检测。一般可在10~30min内得出结果。

1 1 3 1 明胶颗粒凝集试验(PA)是HIV血清抗体检测的一

作者单位:河池市疾病预防控制中心,广西547000

种简便方法。将HIV抗原致敏明胶颗粒作为载体,与待检样品作用。当待检样品含有HIV抗体时,明胶颗粒与抗体发生凝集反应,根据凝集情况判读结果。PA试剂有2种:同时检测HIV-1和HIV-2抗体以及分别检测HIV-1和HIV-2抗体。有效试验的阴性和阳性对照必须符合试剂盒规定。

1 1 3 2 免疫渗滤试验 斑点ELISA和斑点免疫胶体金(或胶体硒)快速试验,均以硝酸纤维膜为载体,HIV抗原点状固定在膜上,加待检样品。阳性结果在膜上抗原部位显示出有色斑点。反应时间在10min以内。有效试验的质控点必须显色。1 1 3 3 免疫层析试验 以硝酸纤维膜为载体,HIV抗原线状固定在膜上,待检样品(血液或唾液)沿着固相载体迁移,阳性结果在膜上抗原部位显示出有色条带。有效试验的质控带必须显色。免疫层析试验还可在固相载体的不同部位包被不同的抗原来检测HIV-1M亚型及O亚型[3]。虽然免疫层析试验灵敏度不及酶联免疫吸附试验[4]。但由于该法具有试剂无需冷藏、步骤简捷、无需任何仪器设备及容易解释结果等特点,适合于基层实验室筛查使用。

1 2 HIV抗体确证方法

包括免疫印迹试验(WB)、条带免疫试验、放射免疫沉淀试验(RIPA)及免疫荧光试验(IFA)等。

1 2 1 免疫印迹试验(WB) 目前国内最常用的诊断HIV感染的确认检测方法,也是《全国艾滋病检测技术规范(2009版)》中的首选确认方法,其敏感性和特异性均很高,用来对筛查试验阳性的标本进行鉴定。其基本原理是将提纯的HIV颗粒裂解为不同的组分,经聚丙烯酰胺凝胶电泳,病毒的不同蛋白在电泳中按分子大小排列开,在电场力作用下转移到硝酸纤维素膜上[2],再与特异性抗体孵育,洗去游离抗体,然后和酶标记的二抗孵育,再进行底物显色,根据出现显色线条的位置可判断有无针对病毒的特异性抗体。WB虽作为HIV抗体确认的首选方法,但依然有一定的局限性,有文献报导,操作不当和误判带型的假阳性率>2%[5]。另有文献报道4%~20%的样品经过HIV初筛复检阳性后,WB结果为 不确定 。相当数量的 不确定 样品与P24条带有关。一种可能的解释是与非特异性抗体有关[6]。1 2 2 条带免疫试验

条带免疫试验的原理和操作方法与免

疫印迹试验十分相似,区别仅在于条带免疫试验条膜上的抗原是重组或化学合成的多肽的抗原,而且是人工固定在条膜上

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