《代农业科技} 0 9年第 1现 20 5期

林业科学

蝴蝶兰组织培养研究进展张东旭张洁 z张学兵董国兴(华乐种苗有限公司，北涿州 0 2 5 河北农业大学生命科学学院 ) 河 77 0:

摘要通过不同培养基、同激素及添加物对蝴蝶兰各培养再生途径的影响进行了概述，蝴蝶兰的组培技术研究提供参考。不为 关键词蝴蝶兰；织培养；究进展组研中圈分类号 Q9 3i￥ 8 .1 4 .;6 23文献标识码 A文章编号 10— 7 9 2 O ) 5 0 9 - 3 0 7 53 (O9 1— 11 0

蝴蝶兰 (h l npi属热带或亚热带的兰科植物，受 P a eos) a s深人们的喜爱，究和开发蝴蝶兰的组织培养具有重要的意研义【组织培养是蝴蝶兰快速繁殖的有效方式， 1 1。目前主要有 3

大量的再生植株，由于蝴蝶兰种子苗是一种杂交品系。但因此后代变异率高，了少数自花系列较稳定以外，以形成除难品质均一的大规模栽培品种。2原球茎 ( LB)生途径 P再

条途径：是利用蝴蝶兰杂交种子在无菌条件下诱导发芽 .一获得再生植株二是从离体器官诱导产生原球茎 ( rtc r: P oo om le b d, i— o y以下简称 P B)通过原球茎的增殖、 k L,分化获得再

17 9 4年， two g等利用蝴蝶兰茎尖诱导出原球茎 Iu n n( L,由原球茎 ( L分化成幼苗，后形成完整的再 P B)再 P B)最

生植株，即原球茎再生途径/;是通过离体器官诱导产生 3三，丛生芽，通过培养丛生芽获得再生植株，即器官再生途径。1无菌播种再生途径

生植株，而成为蝴蝶兰种苗生产最有效的方式之 - I。从 5/大量的研究结果表明。诱导蝴蝶兰原球茎采用的外植体主要有茎尖 1根段[、梗苗根尖【、梗腋芽 I叶片【 2、 3]、 1花 6 1 1花 7 1、 1 2 91 -胚嘲、葶节间、梗节或花梗节间切段嘲和种子花花等。 大量的研究报道表明，同外植体的诱导率存在差异，勇不陈等嘲杨美纯等[认为茎尖为外植体诱导原球茎状体发生则、 2 2 1

蝴蝶兰经人工授粉可获得种子，种子个体极其微小

.但

结构简单，没有胚乳，有 1层极薄的种皮，常在自然状只通态下很难萌发 .需经组织培养无菌播种才能获得植株。蝴在蝶兰开花时选择优良植株进行自交或杂交授粉，生长 4 6 -个月后尚未开裂的蒴果可用于试管无菌播种。由于蒴果内

诱导率较高，潘学峰等i、象男等认为蝴蝶兰作为单而 a r黄]茎性气生兰 .用茎尖作为外植体有可能丧失母株，不适宜用来做诱导 P B, L秦凡等1以茎尖、片为外植体进行了研究， 3 I叶茎尖的诱导率为 7%,片的诱导率为 3 .%。 0叶 78同时还发现诱导原球茎的叶片与切取的部位以及在培养基上放置的方

种子数量达几千万之多 .蒴果便可繁殖出成千上万的植 1个株[通过无菌播种人工培养，够在短期内获得大量幼小 8 1。能植株，是现阶段经济有效的快速繁殖方法，也是工厂化育苗

的重要途径。种子无菌播种 1d后胚明显膨大，鹅黄色， 0呈陆续变成绿色， 1个月的时间形成原球茎 )随后，球体约。原拉长，同时原球体上伴随着长出白色根毛状物，着在顶端接

式有关，中，基部诱导率明显高于叶片中部和叶尖部其叶位，放在培养基上的叶片原球茎的诱导率明显高于反放正和斜放在培养基上的叶片，反放和斜放在培养基上的叶片几

生长点处长出芽鞘，鞘不断长大，成第 1片鞘叶。 2芽形至个月时。于第 1片鞘叶对面长出第 2片鞘叶，着鞘叶的生随长，￣ 2 3个月的时间在 2片鞘叶之间长出真叶。后，移到最转新的培养基上形成再生植株 0 1。

乎不能诱导原球茎。张元国等 I以无菌植株的茎尖、片、 q叶根为外植体进行研究表明，茎尖诱导率较高，要选择好培养只基且切割得当，导率可达 10而叶和根诱导率太低。诱 0%,陈勇等【无菌苗的幼叶、尖、尖和花梗等为外植体，引取茎根以茎

魏翠华等/究发现， 9 1研添加香蕉汁对蝴蝶兰种子发芽、 原球体形成以及叶片的生长具有促进作用，解乳蛋白对水种子萌发有抑制作用，比较光照和黑暗 2种培养条件，种子

尖诱导效果最佳。尖的原球茎诱导效果

最差。根潘学峰等田认为以叶片为外植体则诱导率较低，般不高于 2%,与秦一 0这凡等、元国等、勇等报道的结果是相似的。张陈但彭立新等{ 1 9 1

萌发无明显差异。章玉平等㈣研究表明，外源植物生长调节剂对种子萌发有抑制作用，然物质如苹果汁、蕉汁、天香胰蛋白胨和活性炭对种子萌发具有促进作用。同杂交组不合的亲本基因型亲和力不同，种子播种的发芽率和生长对发育状况有很大影响。翠华等 1为在培养过程中种魏 9]认

以花梗腋芽、梗、叶片为外植体进行研究，果表明幼花幼结叶片原球茎体诱导率最高为 2%, 3其他 2种外植体诱导率均为零。因此，养条件、培蝴蝶兰品种不同，果也不尽相同。结 蝴蝶兰 P B诱导所采用的基本培养基一般包括 MS L、

1 2、、 5 KC、宝及其改良型等，勇等I姚丽娟/MS vw B、花陈 3]、等 t、雪华等[、静等圈研究结果均认为 12 2鲁 1] 2王 5 1/MS适合 P B增殖，蝴蝶兰的原球茎增殖培养以较低的无机盐浓 L即

子发芽的速度与接种到培养瓶中的微滴浓度有关，浓度高的，含种子量多，量少，芽就快些，示出发芽的“所水发显群体效应”。

度为好。胡海英等I用 MS和 KC培养基，但 3 3/曾宋君等用 G3培养基，进进等[用 B5培养基也有取得较好的诱导效李 1 q果。因此，适培养基的选择也不尽相同。最 激素常采用 6 B或 6 B一 A, - A和 NA配合使用。美纯 A杨等、秦凡等p研究均表明，一 A是决定原球茎状体发生的 1 6B

在种子培养过程中用的培养基主要有 K、/ MS C[ 12[ O l、M St Ky tt l” oo 1”和、

v旧培养基等。 w张晓申等 I研究表明，良 改

的 KC培养基中种子发芽率高达 9 .周俊辉等㈣认为改 12%,

良 KC培养基处理蝴蝶兰种子后生长出原球茎的增殖速度最快、势最强。长通过杂交种子无菌培养能在短时间内获得收稿日期 2 0 - 5 3 09 0— 1

主要因子。凡等㈨在以叶片为外植体进行研究时发现，秦 6 B浓度为 3O/

-A .mg L时产生原球茎数目较少，是，但原球11 9

林业科学茎颗粒大，呈绿色；- A浓度增到 1 .mgL时产生原球茎 6B 50/数不断减少，势弱，且长颜色偏黄，易玻璃化，极最后褐化死亡，

《代农业科技 ) 0 9年第 1现 20 5期殖，并取了成功。该途径的优点是它是一个芽到丛芽的增殖过程.整个过程均未通过脱分化过程形成愈伤组织，持了母株保

而 2 4 D对蝴蝶兰的体细胞胚胎发生有抑制作用。黄象 .-男等利于正交试验分析结果表明，一 A因素的极差 ( 6B R)最大，培养基因素次之， NAA和 AC因素最小，和杨美纯这等阎、秦凡等f研究的结果是一致的。 3 1 _

的特性，对减少品种变异是极其有利的。蝶兰器官再生途蝴径材料通常是取花梗下端的休眠芽作为外植体，通过激素、培养条件等因素的控制，导丛生芽，终获得大量的再生植诱最

株[34。优点是不损伤母株，取花梗后， 2 83其 9,,]切不仅不影响

周俊辉等 I王静等 1、晓青等[、芳等[均认为适 、 3叶 2 1 3王 4 j 3 5 1宜浓度的 6 B配合低浓度的 NAA更利于 P B增殖。象 -A L黄男等p认为 6 B浓度对原球茎的增殖速度有显著地影响， 0] -A 较高的细胞分裂素/长素比值有利于增殖，生而较低的细胞分裂素/生长素比值则有利于生根。因蝴蝶兰品种及选用但的外植体不同，以最佳激素浓度也不尽相同。所 蝴蝶兰的组织培养过程中易褐化[, 3褐变的主要原因是 6 1

母株的正常生长与花芽分化，而且还能从整体上进一步了解新品种的特征特性，别是对新引进的新品种，以待其开花特可和确定其观赏价值后再进行大量繁殖，以避免不必要的浪费。 花梗基部的休眠芽为花芽，在培养过程中可能有 2种发育方向：是形成花芽：是形成营养芽。不同的发育方一二其向主要受温度和不同激素等因素的影响，果培养的温度如低 (于 2℃ )则容易向花芽方向分化，育成花葶 (低 0,发以带

材料伤口分泌出酚类化合物，多酚氧化酶的作用下转变在成醌类物质引起的1,究表明活性炭p 1、子汁I, 3研 7] 0l椰 3柠檬 1

1酸、 c9 V[等物质能起到一定的缓解褐化作用。 2 1同时，H值对 p褐化也有重要影响，冬云等研究表明，王当培养基 p值 H

腋芽的花梗节段为材料诱导花葶，可获得较多的不定芽诱导起始材料㈣)在高温条件 (;高于 2￣下培养易形成营养 8C)芽[ -]冬云等p利用黄花蝴蝶兰的花梗腋芽为外植体。 2 4。 9 7王一嘲

进行诱导，增殖倍数最高可达 1倍， 2代容春等以蝴蝶兰无菌幼苗 (高约 1 c为外植体， MS 12、 i、 株 . m) 5用、/MS Wht B5 e培养基进行培养，结果表明， 12以/ MS促进分株最为明显。在细胞分裂素与生长素的配比中，一 A与 NAA、 A或 6B I B

为 45 50时， .￣ .培养物排出的褐变物质较多 .H值为 5￣ . p . 55 4时排出的褐变物质较少。 组织培养中常用的有机添加物如椰子汁、香蕉和马铃薯等

是一类含有氨基酸、物质、生素、素和酶等有机物且矿维激成分较为复杂的天然复合物。多数研究证明，它们对细胞和组织的增殖和分化有明显的促进作用，多研究人员在许天然有机添加物的选择与应用方面做了大量的工作 q。伺

I AA配比均能诱导分株增殖，以 6 B尤一 A与 NAA配比分株

效果为佳。 6 B与 NAA的配比进行研究发现，一 A浓对一A 6B度过高、过低均不利于分株增殖； NAA则要求较低的浓度。 潘学峰等[以蝴蝶兰的满天红品种为材料，已开花的矧取

松林等p研究发现上述有机添加物对 P B分化、苗等有良 9 l L幼好的促进作用， 3种添加物中，子汁和马铃薯优于香蕉，在椰而添加椰子汁的培养基对 P B分化幼苗的影响与马铃薯的 L

花梗，其下端休眠芽作为外植体进行丛生芽诱导，选结果表明。随着 6 B - A浓度的不断增加，新增的芽数也随之不断增多，殖的倍数不断提高。单独使用生长素不能使外植体增但

差异较小，马铃薯将可能是低成本的有效添加物。研究中发现添

诱导出丛生芽，有在生长素和细胞分裂素同时存在时，只才能诱导出丛生芽。中以 6 B ./+其 _ A1 5 L NAA0 5/的处理 2 mg . mgL 0组合效果最佳，增

殖倍数可达 30 .0倍，诱导出的丛生芽不所仅生长健壮，而且颜色鲜嫩，有利于进一步增殖与培育壮苗。

加香蕉的培养基能显著提高幼苗的干质量，不利试管苗叶但的生长和根的分化。秦凡等 l结果也表明椰子汁、试验马铃薯对增殖有促进作用。勇等[椰子汁、果汁、铃薯陈 3 1用苹马

汁、蕉汁及荸荠汁进行研究，到了与何松林等册相似的香得结论。 除上述各因素对 P B的诱导和增殖有影响外，元国 L张等㈣在试验中还发现，切割或针刺对原球茎状体诱导和增殖作用效果非常好，外植体切割能明显地提高原球茎状体诱导率，增殖时切割或针刺有利于增殖而控制分化，否则原球茎很容易分化和生根。时还发现原球茎状体增殖时有群同体优势效应，诱导出的原球茎状体不能过早切割转移， 刚增

而当 6 B - A浓度高于 1 ./ 50 L时，然诱导的丛生芽倍数 mg虽不断增加 .所长出的丛生芽生长瘦弱，至有些还有畸形但甚现象，不利于进一步增殖与培育壮苗。同时，在增殖阶段发现

采用接双芽比接单芽的增殖效果好。生侧芽的速度快且发整齐健壮，能是蝴蝶兰丛芽的发生也具有群体效应。可林宗铿等研究表明，丛生芽的增殖率随 6 B浓度 -A的增加而增加；同时，导芽的个体也随浓度的增加而变的诱

细小。关去茎尖对芽繁的影响试验结果表明，有去掉茎尖的

殖时切块应大于等于 3 mm,小易褐化，过导致 P B死亡。 L3芽繁再生途径

芽增殖率要明显的高于对照，可能是由于去掉顶端优势，这有利于诱导丛生芽。添加附加物方面，在代容春等㈣研究表

无菌播种再生途径和原球茎途径具有在较短的时间内

明，椰子汁使增殖系数达 61植株生长良好，多，株旺 .,根植盛，而水解乳蛋白、解酪蛋白及酵母汁均不能促进分株增水殖，反而有轻微抑制的作用。4参考文献【郑玉忠，振霞，泽华 .蝶兰组织培养研究进展 U.热带植物科 1]张陈蝴】亚学，0 6 3 ( )7— 4 2 0,5 1:1 7 . 【张福明，希玉，物组织培养简报摘编 (蝶兰种子苗 )]物生 2】徐植蝴Ⅱ.植理

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获得大量的再生植株的优点，蝴蝶兰繁殖途径已取得较快在的发展及较为广泛的应用。无菌播种再生途径由于蝴蝶兰但种子苗为杂交品系，代变异率高，后因此除了少数自花系列较稳定以外。以形成品质均一的大规模栽培品种。L途径经难 PB

过脱分化阶段同样也存在较高的变异率。遗传的稳定性问题一

直以来都是直接影响组培苗工厂化生产的原因之一m为了。

进一步减少变异，研究者们进行了大量的研究，怀宇等阎刘王和荣维等[ ) )出了利用器官再生途径来实现蝴蝶兰的快速繁人提l2 9

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2 .

(上接第 1 0页) 9 表 3菲白竹 5种基质配料基质菌土配料名细平菇生产采收后的菌土 5%+土 4 .%+复合肥 O3充 O园 97 .%,分拌匀，放发酵后使用堆粪土发酵后的干鸡粪 1%+园土 8%。分拌匀后使用 5 5充腐叶土发酵后腐树叶 3%+园土 6%+复合肥 O3充分拌匀后 O 97 .%,使用稻壳土堆放发酵后的稻壳 3% O+园土 6 .复合肥 0,分拌匀 97%+ .充后使用园土园土+合肥 O3充分拌匀届使用复 _%,

现在分蘖与高生长 2个因子上。蘖相差 1 .,分 1 7株差距 3%, 3

高生长相差 4m,距 2 .5都比较显著。 c差 1%, 0直观分析，要主原因：土、粪、菌干腐叶等有机质含量高，园土拌合后，与基质的有机质含量矿物质丰富，且疏松、气，利于插鞭的透有生根，芽萌发、蘖。土黏重，反之。鞭分园则4结语

菲白竹适于培育容器苗。容器栽培相当成功，早春在容器内竹根栽培育苗、鞭三节六芽容器扦插育苗成功率达 9%竹 0以上，强肥水管理，加育苗当年可望达到绿化工程用苗要求。

注：料以体积计；配复合肥为俄罗斯产的红马。

表 4菲白竹 5种基质容器根插育苗调查

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