光合细菌不同属类的分离培养

光合细菌不同属类的分离培养

光合细菌的分离培养

光合细菌（Photosynthetic Bacteria，略作PSB）是一大类能进行光合作用的原核生物的总称。除蓝细菌外，都能在厌氧光照条件下进行不产氧的光合作用。研究与应用的实践表明，光合细菌在高浓度有机废水处理与资源化、水产养殖的水质调控与促进健康生长、在农业生产中作为高效活性菌肥等方面，发挥着十分有益的和令人瞩目的作用。关于光合细菌的类群、形态与生理特征、在生态系统中的地位和作用等内容，请参考有关文献与专著。这里仅就光合细菌的分离、培养方法作一介绍。

1光合细菌的富集培养的一般方法

① 分离源

光合细菌四个科-红螺菌科(Rhodospirillaceae)、着色菌科(Chromatiaceae)、绿菌科(Chlorobiaceae)、绿色丝状菌科(Chloroflexaceae)的各种菌，广泛分布于地球生物圈的各处。作为光合细菌的分离源 ，一般可从富营养化的湖泊、池沼、海滩、以及水田、硫黄泉、灌水土壤、和污水厂活性污泥、畜牧场水沟等厌氧或缺氧环境采样。在较深的水体，可使用采水器采取厌氧层的水。在较浅的地方，可直接用吸管吸取带底泥的水。采样的同时记录水温、pH、有无H2S气味等项内容。将采集到的水样或泥样放在厌氧、低温条件下，带回实验室进行分离。

② 光合细菌富集培养基

用于光合细菌富集培养用的培养基有许多配方，这里仅介绍日本星野氏推荐的基本培养基I和基本培养基II。前者适合于红螺菌科的光合细菌，后者适用于着色菌科和绿菌科的菌。

基本培养基I： KH2PO4 0.5g K2HPO4 0.6g (NH4)2SO4 1.0g

NaCl 0.2g CaCl2·2H2O 0.05g酵母浸出汁 0.1g

1000mlMgSO4·7H2O 0.2g 微量元素溶液（见后）1mL生长因子溶液（见后）1mL 蒸馏水以上配制成的培养基pH值约6.7

根据需要，可在上述培养基中添加一些成分，如富集的是缺少同化型硫酸还原系的菌种，则可在基本培养基I中加入0.01%硫代硫酸钠；如是海洋

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性菌种，可加入3%NaCl等等。另外，如分离源中含有较多的硫酸还原菌时（尤其是采自海洋的样品），为了抑制硫酸还原菌的生长，可把基本培养基I中的(NH4)2SO4、MgSO4·7H2O替换成NH4Cl和MgCl2·6H20。 含单一有机化合物的基本培养基I配置方法如下：

① 在容积为20mL的螺口试管中，加入最终浓度为一定量（0.05～0.1%）的有机物。

② 加入基本培养基I至1/2试管的量，松松地旋上螺盖。

③ 121℃，灭菌15分钟。

④ 冷却后加入过滤除菌的10%抗坏血酸钠溶液0.1mL（最终浓度为0.05%），作为还原剂。

⑤ 用另行灭菌的基本培养基I注满试管，旋紧螺盖。

用同样方法可配制含各种不同的单一有机化合物的基本培养基I。 基本培养基II：

KH2PO4 1.0g，NH4Cl 1.0g，MgCl2·6H2O 0.2g，CaCl2·2H2O 0.05g，微量元素溶液（见后）1mL，生长因子溶液（见后）1mL，蒸馏水 1000mL，根据需要，可在该培养基中加入0.1%硫代硫酸钠、3% NaCl或0.05%乙酸钠等。

含一定浓度的H2S和CO2，并有特定pH的基本培养基II的配制，可参照表5-5进行。例如，要配制NO.1的基本培养基II，其中含0.1%Na2S·9H2O和0.2%NaHCO3，pH=6.4，具体方法如下：

①在螺口试管（容积为20mL）中加入半管量的基本培养基II，松松地旋上螺盖。

②121℃，灭菌15分钟。

③冷却后依次加入0.3mL1NHCl、0.5mL8%的NaHCO3溶液（过滤除菌）和1.0mL2%的Na2S·9H2O溶液（高压灭菌）。

④用另行灭菌的基本培养基II注满试管，旋紧螺盖。

将制得的用同样方法可配制含所需H2S浓度和pH值的各种基本培养基II。

装有培养基的试管充分振荡后，在冷暗处放置1昼夜，使培养基内完全呈厌氧状态。在这种状态下可保存1个月左右。

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表5-5 各种基本培养基II的配制方法 培养基编培养基中的浓度（%）*

号

NaHCO3 Na2S·9H20最终培养基20mL中应加入mL数 培养基的pH

6.4

6.7 1NHCl 1NaOH 1 0.2 0.1 0.3 2 0.2 0.1 0.2

3 0.2 0.1 0.15 6.9 4 0.2 0.1 0.1 7.1 5 0.2 0.1 0.05 7.3 6 0.2 0.1 7.6

7 0.2 0.1 0.05 7.9 8 0.2 0.05 0.15 6.6 9 0.2 0.05 0.1

10 0.2 0.05 0.05

11 0.2 0.05 6.9 7.0 7.2

12 0.2 0.05

13 0.2 0.05

14 0.2 0.025 0.05

15 0.2 0.025 0.05 7.5 0.15 7.8 6.9 7.1

16 0.2 0.025

17 0.2 0.025

18 0.2 0.025 0.05 7.3 0.1 7.5 0.15 7.9 * 最终培养基量20mL中，加入8%NaHCO3溶液0.5mL时，其最终浓度为0.2%；若分别加入2%Na2S·9H2O溶液1.0、0.5、0.25mL，它们的最终浓度分别为0.1%、0.05%、0.025%。

微量元素溶液：

EDTA-2Na 2000mg， FeSO4·7H2O 2000mg， H3BO3 100mg，

CoCl2·6H2O 100mg，

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ZnCl2 100mg， MnCl2·4H2O 100mg，Na2MoO4·2H2O 20mg，

NiCl2·6H2O 20mg，

CuCl2·2H2O 10mg， Na2SeO3 1mg， 蒸馏水 1000mL，保存于暗处。 生长因子溶液：

维生素B1 50mg， 烟酸（维生素PP） 50mg， 对氨基苯甲酸 30mg， 维生素B12 5mg， 吡多酸（维生素B6） 10mg， 生物素 5mg， 蒸馏水 100mL， 保存于冷暗处。

③ 接种

适当的接种量对于有效地富集到目标菌种十分重要。因为过多的接种量会使培养基条件发生变化，导致富集培养失败。合 …… 此处隐藏：7546字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……