医学本科微生物实验课教学内容

微生物学与免疫学教研室

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【基本要求】1. 进微生物实验室必须穿好白大衣，离室需脱下 反折。 2.实验无关物品一律禁止带入实验室。严禁在实 验室进食、饮水和喧哗打闹。 3.手拿培养物后或出实验室前要洗手；避免有菌 材料溅出；破损器材及时处理并报告。 4.实验操作过程中产生的废料要扔在指定容器内； 实验完毕清理台面，值日生认真打扫卫生，关 闭水电，门窗，洗手后离开实验室。2

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内作观念”的树立。

容

1.实验室生物安全； “有菌意识，无菌操2.细菌的人工培养以及细菌的形态学检查 (革兰染色)。 3. 细菌在自然界的分布，消毒灭菌及理化

因素对细菌的影响。

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细菌的人工培养充足的营养

嗜冷菌 嗜温菌 病原菌37℃ 嗜热菌

细菌生长繁殖 所需要的条件

适宜的温度

嗜酸菌

合适的PH值

嗜中性细菌

病原菌7.2~7.6

必需的气体环境

嗜碱菌

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根据细菌代谢是对 分子氧的需要与否

专性需氧菌

微需氧菌

兼性厌氧菌

专性厌氧菌

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二、细菌的人工培养培养细菌的目的，是从不纯的被检材料 中找出特定的细菌或全部细菌，这一过程 称为分离培养。如果只是培养性质明确的 一种细菌，则称为纯培养。为了从被检材 料中分离出所要检查的细菌，可以利用多 种性质不同的选择性培养基，检查各种不 同的目的细菌。

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细菌的培养基：(一)培养基的定义：培养基是人工方法 配制的含有细菌生 长繁殖所需物质的 营养基质。其必须 本身无菌，一般 PH调至7.2 ~7.6。

水

碳源因子

营养物质 生长

氮源

无机盐

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(二)制备原则:1.调配营养物质：蛋白胨(氮源),牛肉膏，氯化 钠，蒸馏水。 2.调配PH:加入缓冲剂，保持PH稳定。 3. 消毒灭菌。

满足a充足的营养物质b合适的PH值

就可制成基础培养基

c无菌

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(三)分类：1、按物理性状分类：+0.3~0.5%琼脂 +1.5~2.5%琼脂

半固体培养基观察细菌动力 短期保存菌种

液体培养基

固体培养基

大量繁殖细菌 细菌的分离和纯化

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固体平板培养基

液体培养基

固体斜面培养基

半固体培养基

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2、按用途分：(1).基础培养基：含有大多数细菌生长所需要 的基本营养成分。最常用的为肉汤培养基 (2).增菌培养基：在基础培养基中添加生长因 子(eg:血清等)或微量元素等其他营养物 质或特殊抑制剂。 如血平板：5-10%脱纤维羊/兔血，(60° C 左右加入血)。巧克力平板:80° C左右加入 血。

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(3).选择培养基：培养基中加入某种/些化学物 质，能抑制某类细菌生长而使另一类细菌 生长，从而将后者选择出来。 常用于肠道致病菌的分离与选择培养。 (4).厌氧培养基：用于厌氧菌的分离、培养和 鉴定。

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血平板

巧克力平板

MacConkey平板

X.L.D平板

Sabourand平板

Mycosel平板

几种常用培养基

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(5).鉴别培养基：根据各种细菌分解糖类和蛋白质的能 力及代谢产物不同，在培养基中加入底物和指示剂 来鉴别细菌。

1)蓝色半固体培养基(溴麝香草酚蓝)2)无色半固体培养基(醋酸铅) 3 )基础液体培养基

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细菌动力鉴别

细菌生化反应鉴别

鉴别培养基

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三、各种培养基的接种一)无菌操作 在医疗实践中或微生物试验中防止周围环 境中的微生物污染操作对象，同时防止操作对 象的微生物污染周围环境。1.四种接种方式：接种针用于穿刺接种细菌(半固体 培养基),接种环用于固体、液体培养基的细菌接

种。(相对无菌)2.任何一个实验，操作前均应在器皿上做标记：

时间，菌种，组别。培养皿一般标记在皿底。