RNAi技术手册-化学合成

为广大生物专业读者介绍了siRNA化学合成的规格,类型

siRNA化学合成

2.1化学合成siRNA简介

化学合成siRNA是应用起来最方便的方法，客户只需提供siRNA序列或者GeneID、Accession Number、基因名称等。

百奥迈科(Biomics)公司的siRNA使用国外最先进的仪器合成，同时配备了高容量的HPLC纯化仪。单个靶点siRNA合成量一次性可放大到克(g)级，年产更达到公斤(Kg)级。产品经过严格质检，确保质量并提供质量检查报告。

化学合成的siRNA与生物合成siRNA相比，有以下优点：

z 操作简便，研究人员得到合成好的siRNA后，进行简单的稀释处理即可实验。 z 转染效率高，相对于分子量较大的DNA质粒，其转染效率高。 z 对细胞的或者组织的毒副作用小。

z 可大规模制备，本公司的合成规模可达到克级 (一次合成量1 - 100 g)。

z 特别适用于基因靶位点已确定，需要大量siRNA进行siRNA动物实验研究。

欢迎您使用Biomics的siRNA产品，我们始终为您提供优质热诚的服务！

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2.2 siRNA设计

siRNA序列的结构对RNAi实验的成功与否起着至关重要的作用。不同的siRNA序列，对基因的沉默效率差异很大。因此，理性设计有效的siRNA就成为实验成功的关键因素之一。 本公司推荐考虑如下设计思想：

z 从起始密码子下游50 - 100个nt开始，避免5'端或3'端的UTRs，搜索AA (N19) 序列。

因为这些区域结合了大量的调控蛋白，可能会影响siRNA发挥作用。 z 分析siRNA两端能量分布

z N19序列3'端垂悬两个dTdT，该垂悬不与mRNA序列互补，使有义链3’端更容易解链，

从而增加其沉默效率。

21个碱基的siRNA单链序列如：5'-GGCCAGAGGUUGAAAGUGAdTdT-3'

z 对mRNA目标区域进行二级结构预测，排除作用复杂的二级结构的siRNA序列。因为二

级结构越复杂，siRNA沉默效率越低。

下图表明设计的siRNA结构优势依次递增

a) < b) < c)

z 在NCBI数据库（http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi）中进行Blast对照，排除设计的序

列和其他基因的同源性，降低脱靶效应。

z 避免出现连续的多个G或C，GC含量最好在30 – 55 %之间。

z 设计中，对siRNA两端的错配可以高度容忍，但中间的5 - 11位碱基的错配，对沉默效

应会有较大影响。

本公司专业技术人员免费帮您针对同一个基因设计3 - 4对siRNA，您只需提供基因的

Accession Number、mRNA序列或者Gene ID等信息即可，设计好后交您确认，如果抑制效率达不到70 % (转染效率至少90 %)，我们免费重新设计和合成。

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2.3百奥迈科(Biomics) siRNA产品简介

● siRNA合成：

本公司拥有siRNA合成所有核心技术和专业合成团队，合成规模达到克级 (一次合成量1 - 100 g)，不但能够满足细胞水平实验小试，更能满足动物实验中中试放大的要求。 ● 标记

可对siRNA两条链的4个末端进行多种标记物的标记，包括FAM、Cy3、Cy5、胆固醇(cholesterol)、Biotin等，以便根据实验要求监测siRNA抑制特异性基因表达的效果。 ● 修饰：

提供siRNA的化学修饰，主要有2’-羟基甲基化修饰，磷酸硫代修饰，氟代修饰等。 ● 纯化：

HPLC纯化。 ● 长度：

19-23nt，亦可根据设计要求合成相应长度的siRNA。 ● 产品形式：

冻干粉

● 储存和稳定性：

建议在- 20 °C的环境中贮存，避免反复冻融，可保存6个月。荧光标记的RNA必须

避光保存。 ● 技术数据表：

技术数据表与siRNA oligo一同交付，包括名称、序列、浓度、OD和nmols的精确数量及纯化类型。 ● 个性服务：

按照客户要求分装。 免费设计。 ● 运输：

1.5mL冻存管，快递寄送。

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2.4 普通siRNA oligo

Biomics公司普通的siRNA oligo根据客户要求，采用脱盐、PAGE或HPLC纯化的方法，有效去除短、杂片段。客户只需用无RNA酶水稀释后即可使用。

我们为客户设计合成四个靶点的普通siRNA，提高筛选出潜在的特异性抑制效率高的序列的机会。

目录号 CS1004 CS1005 CS1010 CS1050 CS1100 CS1250

产品说明 规格 纯化方式 HPLC HPLC HPLC HPLC HPLC HPLC 

价格 ￥498 ￥598 ￥1098 ￥4798 ￥7999 ￥15000

普通 siRNA 4 OD 普通 siRNA 5 OD 普通 siRNA 10 OD 普通 siRNA 50 OD 普通 siRNA 100 OD 普通 siRNA 250 OD

2.5 荧光标记siRNA oligo

本公司可对siRNA两条链的4个末端进行多种标记物的标记，包括FAM、Cy3、Cy5、胆固醇(cholesterol)、Biotin。相对于未标记的siRNA具有转染情况可视的优点，通过流式细胞仪、荧光显微镜、激光共聚焦显微镜等可以观察到荧光标记的siRNA，方便优化转染条件、siRNA胞内定位等，同时可根据对转染过程的全程追踪来分析转染和蛋白表达下调的关系。研究表明，反义链5'端标记会影响干扰效果，其他三个末端修饰后对沉默活性几乎没影响，目前公认最好的是将荧光修饰标记在正义链的5'端位点。5'-荧光标记的siRNA有助于直接观察siRNA oligo的转染效率。本公司提供的5'-荧光标记的siRNA oligo通常用FAM进行标记。

目录号 CS2004 CS2005 CS2010 CS2050 CS2100 CS2250

产品说明

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