结核患者血清IgG抗体适体的制备及特异性鉴定

目的筛选获得结核患者血清IgG抗体的特异性适体。方法纯化结核患者血清中的IgG抗体,以IgG抗体为靶标,利用SELEX技术进行筛选,筛选得到的ssDNA适体文库,进行克隆测序、亲和性检测、二级构象分析,并用于血清标本检测,进行适体特异性的鉴定。结果纯化获得了IgG抗体,浓度为1.3mg/mL。SELEX筛选10轮后,随机挑选12个适体进行亲和性检测和二级结构分析。结果显示,亲和性吸光度值大于1.0的

中国人兽共患病学报2 1, 27 ( 2) 01 1Chi e e J ur lo o s s n s na f Zo no e o 1 1 1 1

文章编号：0 2 6 4 2 1 ) 2 1 1—0 1 0—2 9 ( 0 1 1— 1 1 4

结核患者血清 IG抗体适体的制备及特异性鉴定 * g柏文娟，忠义刘忠华杨华秦莲花。胡，,,摘要：目的筛选获得结核患者血清 IG抗体的特异性适体。方法纯化结核患者血清中的 IG抗体， IG抗体为 g g以 g 靶标，用 S I X技术进行筛选，利 E E筛选得到的 sD s NA适体文库，行克隆测序、进亲和性检测、级构象分析，二并用于血清标本检测，行适体特异性的鉴定。结果纯化获得了 I G抗体，度为 1 3mg mI。S I X筛选 1进 g浓 ./ E E O轮后，机挑选 1随 2个适体

进行亲和性检测和二级结构分析。结果显示，和性吸光度值大于 1 0的适体有 4个。二级构象分析揭示，体与靶分子的亲 .适结合基础为口袋颈环鼓包结构和分枝的连接角度。对亲和性吸光度值大于 1 0的 4个适体， 2 .经 9份临床标本检测进行特异

性的进一步验证显示，中有 3个适体对结核病组与健康对照组的检测结果具有显著差异。结论其清 IG抗体的适体，有较高的特异性。 g并关键词：核病；g抗体； E X;体结 IG SI E适中图分类号： 3 2 1。 3 8 9 1文献标识码： R 9 1R 7 .1 A

初步筛选获得结核患者血

Pr p r to n a a a e s o g a t b d e e a a i n o p t m r f l G n i o i sf o TB te s a d is s c fc t d ntf c to r m pa i nt n t pe ii iy i e i i a i nBAIW e—u n HU o g y, U o g h a YANG a QI Lin h a nja, Zh n— iLI Zh n— u, Hu, N a— u(S h o f Pr—l i l e iie n i eS in e o c o n ri S z 0 1 1 3 C i ) c o l Pci c d c d L f ce c,S o h w U iP s y, u h

“2 5 2, h” o n a M。 n a t

ABS TRACT: ai To obt n DN A ionu 1otde a a e s p cfc l bndi o olg c e i pt m r s e iialy i ng t TB gG ntb dis, a a do I a io e n r n m DN A i a y lbr r

wa u jce o r u d fslcinb EIEX meh d a an tI G nio isp rf dfo TB p t n eu ( h o cn r— ss betd t o n so ee t yS t o g is g a tb de u ii rm ai ts r m t ec n e ta o e eto fI G n iodisw a . g p rm L). Af e r und ee ton,hi fi t t m e st B g a i i n o g a tb e s1 3m e t r1 o 0 sofs l c i gh a fniyap a r o T I G ntbode r — is we eob t ne ai d. Of4 a t m e s fom 2 r nd p a r r 1 a om ee t d ap a e s s s lc e t m r howe h g s r en y t d i h ab o b c o TB gG ntb I a iodis (> 1 e A .0) by i i botn- s r pt vdi h s r dih p o da es t m . Po ke nd s e l t e a i n— or e a s er xi s ys e c ta t m—oop a h a i fa a e s bndi o t ntbo e y t sw st e b s so pt m r i ng t hea i dis b hea— na y i fs qu nc sa e on t u t e n DN A M A N c g . O f4 a a e s (> 1. l ss o e e e nd s c d s r c ur s i pa ka e pt m r A 0) w e e s l c e o bui hem i e r e e td t l t x d— d s nd ih EII a w c SA e e ton s tm s r s c ie y The s r d t c i ys e, e pe tv l . e um a p e s m l sofTB te s ( pa int n一 1 3) a e lhy

i v d l ( nd h a t ndii ua s n一 1 6)

we e t s e n t e e s s e .Th e u t h we h tt e d fe e c so r u n e lh r u r t ts ial i n f r e td i h s y t ms e r s lss o d t a h if r n e fTB g o p a d h a t y g o p we es a i t l sg i— c y ic nt(< 0 5) by 3 fo i d s n a P .0 r m 4 m xe a dw ih EII c SA t c i yse s I c de e ton s t m . n oncuso l in,a s tofa t e p ame sa fn t o TB g an r fi iy t I G— tb i s i od e we e s c s uly s lc e r r uc es f l ee t d fom he i talr ndo DN A i a y a d c nsde a y p cfc bi i g a lt . t nii a m lbr r nd ha o i r bl s e ii nd n biiy K EY 0RDS:TB; g an i odes SEIEX; p a e W I G tb i; a tm r

结核病形势严峻，断对于结核病的防控具有诊重要意义。血清学诊断是结核病诊断的重要方法之一

的 j单一的抗原无法检测出结核患者的所有抗，

体。本研究在前期研究的基础上，一步以结核患进者血清中直接纯化的针对不同抗原的总 IG抗体 g为靶标，行 S L X( ytmai eouino i~进 E E: se t v lt fl s c o ga d ye p n nil n ih n )选，得结核患 n sb x o e t r me t筛 ae c获

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包括抗原、体检测[ J抗 1。但是，。稳定的高活性特

异抗体、原的制备难度限制了该方法的临床应用抗价值。近年来，着寡核苷酸适体技术的发展 l]随 4,

针对单一抗原的抗体适体已用于结核病的血清学诊断研究[。然而，体的抗体反应是针对多个抗原 6]机*上海市科委自然基金项目( 1 R1 3 2 0和上海市科委医药生物 1Z 400)处基金项目( 0 1 9 5 0 )合资助 14I510联通讯

作者：莲花， malqh 0 3 y h o c r. n秦 E i l l 1@ a o . o c: n作者单位：. 1苏州大学基础医学与生物科学学院，州 2 52;苏 l 1 3

者血清 IG抗体的高特异性适体并探讨其用于结 g核病血清学诊断的可行性。1材料和方法

1 1材料 .

2同济大学附属上海市肺科医院/海市结核病 ( ) .上肺重点实验室，海上 2 0 3 043

1 1 1血清来源纯化 IG抗体的 1血清， . . g 0份来

自上海市肺科医院结核初治患者；临床血清标本，结