高效液相色谱法测定牛组织中雷复尼特的残留量(2)
发布时间:2021-06-05
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第1期
杨芬。等:高效液相色谱法测定牛组织中雷复尼特的残留量
7l
2.4样品处理
称取牛组织样品(肌肉、肝、肾)各109,加入
乙腈20mL,在10000r/min下均质1IIlin制备匀浆。匀浆在4000r/越n下离心5min,沉淀物再加入10
mL乙腈提取一次,合并提取液。通过乙腈预淋的层析柱(层析柱为100×lOmm具塞玻璃柱,由下至上依次为:少许玻璃棉+3cm中性氧化铝柱)。再用5mL乙腈淋洗柱子,滤液收集于磨口烧瓶中。加入正
丙醇5mL,于40℃水浴上旋转蒸发至于.以流动相
l
mL溶解。备用。3结果与讨论
3.1色谱条件的选择
参照相关文献,采用乙腈_pH2.5的水(83:17,
t,:秽)为流动相,流速为1.5mI./minc5'6】,在实验条件
下。雷复尼特可与组织中内源性物质较好的分离且保留时间适当,雷复尼特保留时间为12.80min(如图
l,2)。对流出的峰进行紫外扫描。发现雷复尼特的
紫外最大吸收峰在282姗处.为此应用二极管阵列检测器,选择282姗处检测雷复尼特,提高了检测
灵敏度。
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圈2■复尼特肌肉样品色谱田(0.01旧/gI
3.2净化条件的选择
在样品净化处理条件的选择中.分别采用了液液萃取法、C螗柱法、氟罗里硅土柱法及中性氧化铝柱法,结果发现,经中性氧化铝柱净化处理后的样品回收率高且杂质少,因此采用中性氧化铝柱法。
3.3方法的线性相关性
将储备溶液用流动相稀释成浓度分别为O.05、0.2、0.5、1.0、2.0、4.o灿g/hIL的标准溶液,进样体积20斗L,以峰面积为纵坐标,样品浓度为横坐标,计算回归方程,得Y=10.8llX+0.102
l。r=0.9999,
可见,在0.05 ̄4.O斗咖L范围内,线性关系良好。
3.4方法的提取回收率
向牛空白组织(肌肉、肝、肾)中添加雷复尼特标样溶液,配制成组织浓度分别为0.0l、0.1、0.4
斗g/g3个浓度的样品,按“样品处理”项下处理后进
样。与直接将对应浓度的标准品进样所得的峰面积相比,计算样品的提取回收率。每一浓度进行7样本分析.结果3个浓度下肌肉组织中样品的提取回收率分
别平均为78.3%,85.8%和95.1%;肝组织中样品的
提取回收率分别平均为73.3%,83.9%和91.9%;肾组织中样品的提取回收率分别平均为74.3%。81.9%
和92.8%。
3.5方法的准确度及精密度
向牛空白组织(肌肉、肝、肾)中添加雷复尼特
标样溶液,配制成组织浓度分别为0.0l、0.1、0.4pg/g
的3个浓度的样品.按“样品处理”项下处理。连续
测定3d。根据标准曲线,计算样品的测得浓度,与配
制浓度对照。求得组织样品测定方法的准确度与精密度,结果见表l。试验数据表明,生物样本的分析方法符合有关规范要求。
裹1■复尼特测定方法准确度与精密度
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4结论
关于雷复尼特在组织中残留量的测定。国内文献
报道较少,笔者采用乙腈一pH2.5的水(83:17,移:t,)
为流动相.使雷复尼特与组织中内源性杂质得到很好的分离,保留时间合适。峰形较佳。样品净化处理采用中性氧化铝柱法.样品回收率高且杂质少。该方法快速、简便、准确、灵敏.可用于牛组织中雷复尼特
72
精细化工中间体第38卷
残留量的测定。参考文献:
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(上接第49页)
由上图可知.催化剂用量对双酚芴的收率也有较大影响,收率随着催化剂用量的增加而增加,当催化
剂用量为18g时,双酚芴收率较高,之后再增加催
2)后处理采用洗涤除酸,真空脱酚,后采用复
合溶剂溶解,重结晶,真空干燥的方法,用于双酚芴的精制,效果较好。
参考文献:
H
1J
化剂,收率反而下降,因此,催化剂用量过大不利于反应进行,催化剂巯基丙磺酸的优惠用量为18
3.5稳定性实验
g。
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在前面确定的优惠合成工艺条件下。对其进行重复性实验。结果显示:固定芴酮的量为0.5mol时,,l(苯酚):n(芴酮)=5:l、巯基丙磺酸用量为18g、反应
温度为80℃,反应时间5h,该工艺有较好的稳定性,
口
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平均收率为93.4%。
4结论
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1)通过实验,得到巯基丙磺酸催化合成双酚芴的优惠工艺条件:固定芴酮的量为O.5—nol时,n(苯酚):n(芴酮)=5:l,催化剂巯基丙磺酸用量18g,在
80℃反应5h,双酚芴的收率为93.4%,纯度为99.3%以上。
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