关于凯氏定氮法测定蛋白质的几个问题

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关于凯氏定氮法测定蛋白质的几个问题盛成乐(山东省淄博商业学校摘要凯氏定氨法测定酱油中的全氮及原料中的蛋白质是一

淄博 2 5 2 ) 50 2为多少合适呢？碱的用量取决于消化时浓 H S 4 2O的用量和碱的浓度，一般经验认为碱的用量为中和硫酸后再加 4%。例如：消化时加入浓 H S 40 L 0 2O 1m, NO a H的浓渡为 4%,则 N O 0 a H的用量为首先计算中和 1mL浓 H2O需要 4%Na的量： 0 S4 0 OH

种经典的方法。但此法有些问题常常被忽视，影

响实验的进行和测定结果。该文就粗蛋白、蒸僖时碱的用量和溶液的颜色变化、硼酸吸收灌颜色的变化等问题加以阐述。

美t词凯氏定氮法中田分类号

粗蛋白蒸值

硼酸C

" 02 I 21 S 1

文献标识码

HS4 2O的摩尔浓渡为 1 .m l,4%N O 84 o L 0/ a H摩尔浓度为 1m l。化学反应式如下： 0oL/2 OH+ H2 O4=NaS+ 2 O Na S 2 O4 Hz

文章编号

0 5—5 7 2 0}0 0 4—0 2 4 0 1 f0 2 2— 0 3 2

1凯氏定氮法的原理和过程

假如浓硫酸在消化时没有消耗，两者反应时 2摩尔 NO a H和 1摩尔 H S 4 2O反应，设需要 N O的量 aH为 xH,则 2 1x/8 4 0:3 .m l L/0=11 .×1 x 6 8 L

利用硫酸及催化剂与样品加热消化，使蛋白质分解，其中 C、H形成 C 。和 o逸出，而蛋白质中的氮则转化成 (/ ) O,在强碱条件下加热蒸馏， N- 2 4 h S 其中 N 3 H被硼酸吸收为 ( H ) N 42 7 O,然后用标准

再计算使溶液为强碱性时需要 N O a H的量：3 . 6 8x加%: 1 7 mL 4. 2

的盐酸溶液滴定，根据盐酸的消耗量和浓度计算出氮的含量，乘以蛋白质系数，即为蛋白质含量。 反应式如下：2 a—a十一 00 0 H+1 1 S 4 (,2O+6 2 3- O= NH )S 4 03十+ 1 2 I 1 S十+1 o 2 Oz 6N

最后计算蒸馏时加入碱的量：3 8+ 1 7 6. 4. 2: 5 . 2 1 5 mL

3 2溶液的魔色变化 .

消化后溶液的颜色为蓝绿色，这是催化剂中硫酸铜的颜色。当加入氢氧化钠后溶液为浅蓝色，这是硫酸铜与

氢氧化钠反应后生成氢氧化铜浅蓝色沉淀的缘故。当加热蒸馏不久，溶液开始变为黑褐色，这是因为在加热条件下氢氧化铜分解生成氧化铜黑褐色沉淀的缘故。反应式如下：2 O Na H+C S 4 u O1)+NaS 4 u O=C ( 1 2 2O

( )9+2 a H=2 a N 2 0l N O NH十+NaS 4 I 0 z O+2- I 2 2 m+4 3= ( ) H m 2 07 o+ ( )B 07 HC+5 O=2, I H3 O N z,+2 l NH C+4 B 3

根据原理测定过程可分为消化、蒸馏吸收、滴定三个过程。 2凯氏定氮法测定的蛋白屏—粗蛋白

C O 2 u u( H)=C O++H O 2 4硼酸吸收液颜色的变化蒸馏吸收时的吸收液为硼酸，浓度为 2%~4 %。硼酸是一种弱酸，K=5 8 0。蒸馏吸收时所 a .×1 00用指示剂是甲基红—谟甲酚绿，其变色范围是： p<40橙色；pI .灰色；p H . I=5 1 - H>62蓝色。 . 正常情况下，当加入该指示剂后硼酸溶液显橙色，蒸馏时氨气被硼酸吸收变成硼酸铵，溶液变成蓝色。但实验中常常会出现加入指示剂后硼酸溶液就变蓝色， 是因为配制硼酸溶液时混入碱性物质或蒸馏水偏碱性。测定中应该注意。5讨论

根据测定原理，在消化过程中除蛋白质中的氮转化成 ( I ) O外，样品中非蛋白质中的氮也能转 N- 2 4 h S

化成 ( H ) O,计算氮的含量时，认为所有的氮 N 4Ss 2都来源于蛋白质，因此，测定结果比实际值偏高。所以，用凯氏定氮法测定的蛋白质为粗蛋白。 3慕溜时碱的用量及溶液颜色的变化3 1碱的用量 .

蒸馏时必须加碱 (可加入 N O,加入碱的作 a H)用一是中和硫酸，二是使溶液处于强碱性，这样才能使 ( I ) O变成 N被蒸馏吸收。那么碱的用量 N- 2 4 h S H3关于凯氏定氨法测定置白质的几个问题一盛成乐

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5 1凯氏定氮法测定的蛋白质虽然是粗蛋白，但所 .有样品中蛋白质的测定都采用此法，因此，同样具有真实性和可比性。 52蒸馏时碱的用量经计算后准确加人，即会避免 .因加人量过少影响蒸馏，也会避免因加人量过多而浪费试剂。

物质的混入，盛装硼酸吸收液的容器应刷洗干净。 参考文献1黄伟坤 .品检验与分析 .

食轻工业出版社，18 99 2川村亮[日] .品分析与检验法 .食轻工业出版社，1 8 96 3华中师范学院等 .分析化学 .高等教育出版社，18 97 4李东风 .品分析 .食中国商业出版社，19 98 5王叔淳 .品卫生检验技术 .食化学工业出版社，18 98

5 3硼酸吸收液配制时应用中性蒸馏水，避免碱性 .

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Ke od K d a l cu epoen i ia o;b r cd yw rs j d h; rd rti;ds l t n o c i tl i i a

FUDR⑩ ONEY

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