5.水中大肠杆菌的检测(多管发酵法)

环境微生物实验讲义

水中大肠杆菌群书的监测（发酵法）

一、 试验目的：

1. 了解和学习水中大肠杆菌的测定原理和测定意义。

2. 学习和掌握水中大肠杆菌的监测方法。

二、试验原理：

水的微生物学的检验，特别是大肠杆菌的检验，在保证饮水安全和控制传染病上有着重要意义，同时也是评价水质状况的重要指标。国家饮用水的标准规定饮用水中大肠杆菌群书每升中不超过3个，细菌总数每毫升不超过100个。

水中大肠杆菌的检验方法，常用多管发酵发和滤膜法。多管发酵发可运用于各种水样的检验，但操作繁琐，需要时间长。滤膜法仅用于自来水和深井水。操作简洁快速，但不适用于杂质较多，易于阻塞滤孔的水样。

三、 试验材料：

1. 培养基：乳糖蛋白胨培养基，伊红美蓝培养基

2. 器材：灭菌三角瓶、无菌平皿、无菌吸管、无菌试管等。

四、 试验内容

第一天 ：

1. 水样的采集

环境微生物实验讲义

自来水洗将自来水龙头用酒精灯火焰灼烧灭菌，在开放水龙头取水流5ｍｈ，以灭菌山角瓶接水取样以备分析。

2. 用发酵法检查大肠杆菌

（1）生活饮用水的检验

①初步发酵试验：在2个各装有50ｍｈ的3倍乳糖蛋白胨培养液的三角瓶中，以无菌操作各自加水样10ｍｈ。摇匀后，37℃培养24ｈ

第二天 ：

②平板分离：经24ｈ培养后。特产酸产气及只产酸的发酵管，分别划线接种于伊红美蓝琼脂平板（EMD培养基上），37℃培养18～24ｈ。大肠杆菌群在EMD平板上，菌落呈紫黑色，具有或略带或不带有金属光泽，或者呈淡紫红色，仅中心颜色较深，挑取符合上述特征的菌落进行涂片，革兰氏染色，镜检。

第三天 ：

③复发酵试验：将革兰氏阴性无芽孢杆菌的菌落的剩余部分接于单倍乳糖发酵管中，为防止遗漏，每管可接种来自同一初发酵管的平板上同一类型菌群1～3个，37℃培养24ｈ，如果产酸又产气者，即证实有大肠菌群存在。 第四天 ：

④报告：根据证实有大肠菌群存在的复发酵管的阳性管，查附录1或2，报告每升水样品中大肠菌群数（MPN）

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五、 思考题

记录试验结果，并对所测样品作出评价。