10_羟基喜树碱的提取方法及工艺优化研究(2)

148 中国医药生物技术 2010年4月第5卷第2期 Chin Med Biotechnol, April 2010, Vol. 5, No. 2

表 4 乙醇回流提取正交试验安排及结果

因素试验号 A B C D HCPT（g/g，%）

1 2 3 4 5 6 7 8 9 K2 K3 R

1 1 1 2 1 2 2 1 1 3 3 3 2 1 2 3 2 2 3 1 2 3 1 2 3 1 3 2 3 2 1 3 3 3 2 1 0.916 1.000 1.0040.865 1.019 0.9750.092 0.039 0.021

0.912 1.050 0.046

0.303 0.416 0.421 0.317 0.272 0.327 0.282 0.312 0.271

表 6 乙醇超声提取结果

试验号

时间（min）

溶剂倍数 HCPT（g/g，%）

1 30 15 0.342 2 30 20 0.355 3 60 15 0.395 4 60 20 0.429

回流提取的效果较差，可能是 10-羟基喜树碱 E 环的 α-羟基内酯结构遇碱开环生成钠盐后，再遇酸不能完全还原为 10-羟基喜树碱的缘故；以 75% 乙醇作溶剂进行超声提取，有利于喜树细胞培养物中 10-羟基喜树碱的提取，收率高且工艺简单。由于超声波可以使液体流动，并产生空化现象，从而有利于将 10-羟基喜树碱从喜树脱分化组织中快速地浸提出来。喜树细胞培养物中 10-羟基喜树碱提取的最佳工艺为 20 倍量的 75% 乙醇超声提取 60 min。

参考文献

[1] Zhang DY, Zhao XQ, Yu F, et al. Callus induction of Camptotheca

acumianta and camp tothecin production. J North Normal Univ (Nat Sci Ed), 2002, 34(1):45-48. (in Chinese)

张冬艳, 赵心清, 于放, 等. 喜树愈伤组织诱导及喜树碱的产生. 东北师大学报(自然科学版), 2002, 34(1):45-48.

[2] Zhang ZX, Zhang SX, Song GB. Study on the Camptothecine

extraction technology of Camptotheca leaves. Biotechnology, 2003, 13(5):24-25. (in Chinese)

张志信, 张仕秀, 宋关斌. 从喜树叶中提取喜树碱工艺研究. 生物技术, 2003, 13(5):24-25.

[3] Guo ZJ, Ma CJ. Study on natural Camptothecin and

10-hydroxycamptothecin column chromatography separation. ACTA Chin Med Pharmacol, 2005, 33(4):10-11. (in Chinese)

郭忠军, 麻长娟. 天然喜树碱和10-羟基喜树碱柱层析分离工艺研究. 中医药学报, 2005, 33(4):10-11.

[4] Zu YG, Tang ZH, Yu JH, et al. Camptothecin and

10-hydroxycamptothecin accumulate differentially under specific developmental control in Camptotheca acuminata. Acta Botanica Sinica, 2003, 45(4):494-499.

[5] Ming X, Wei ZH, Xu QH. A process for the extraction of

Camptothecine from fruits of Camptotheca acuminata decne. J Shenyang Agric Univ, 2005, 36(1):101-103. (in Chinese)

明霞, 魏忠环, 徐清海. 从喜树果实中提取喜树碱工艺研究. 沈阳农业大学学报, 2005, 36(1):101-103.

K1 1.140 0.902 0.9420.959 ∑Xi = 2.921

表 5 碱水回流提取正交试验安排及结果

因素试验号 A B C D HCPT（g/g，%）

1 2 3 4 5 6 7 8 9 K1 K2 K3 R

1 1 1 2 1 2 2 1 1 3 3 3 2 1 2 3 2 2 3 1 2 3 1 2 3 1 3 2 3 2 1 3 3 3 2 1 0.731 0.889 0.815 0.814 1.013 0.821 0.868 0.840 0.801 0.835 0.862 0.891 0.094 0.023 0.018 0.026

0.231 0.242 0.258 0.372 0.318 0.323 0.286 0.261 0.254 ∑Xi = 2.545

NaOH 溶液回流提取 3 次， 为 A2B1C2D3，即 15 倍 0.3% 0.5 h/次，结果见表 5。 2.4 乙醇超声提取

由表 6 可以看出，与乙醇回流提取最佳工艺相比，乙醇超声提取 10-羟基喜树碱的得率更高。

3 讨论

通过考察不同的提取方法对 10-羟基喜树碱提取的影响，结果表明：乙醇回流提取时以 75% 乙醇作溶剂效果较好，可能是高浓度乙醇不易穿透脱分化组织的细胞壁；碱水