改良的降落PCR扩增中国地鼠目的基因

时间：2025-07-09

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山西医科大学学报 ( hn i dUnv 08年 l JS ax i)2 0 Me 0月，3 (0 9 1

文章编号： 10—6 1 (0 8 1—0 7—0 0 7 6 12 0 )0 86 3

改良的降落 P R扩增中国地鼠目的基因 C宋国华一庞文彪 .,农业大学动物科技学院 )

张锐虎刘田福岳文斌 (山西医科大学实验动物中心，太原 000;山西，, 30 1

摘要：目的

优化 P R程序， C尝试用降落 P R扩增中国地鼠目的基因。方法 C

设计了 4对引物，用普通 P R和改良的 C降落 P R省略了常规 P R中摸索最适 C C

降落 P R扩增中国地鼠 C X1C X、 A H、 A 6部分基因。结果 C O、O 2 N D 5 N DH

普通 P R只有 1对引物扩增出特异性条带， C而

降落 P R 4引物都扩增出特异性条带， C对并与中国地鼠目的基因大小一致。结论关键词：中国地鼠；降落 P R;退火温度； P R特异性 C C中图分类号： Q 8 71文献标识码： A

退火温度的过程，对中国地鼠一些 T值相近的基因可以使用降落 P R温度程序扩增， m C是一种行之有效的 P R方法。 C

M o fe o h wn P di d t uc do CR sa a r a h o a p iy tr e e e o ie uu rs u i a n pp o c t m lf a g tg n fCrc t ls g ie s

S G G o h a一，P NG We—i 1 HA u—u,L U a— l UE W e -i2 a oaoy Anm lC ne, h m i ON u -u l A n b o,Z NG R i l I Ti f,Y nbn (L b rtr i a e t S a c a h n u r

Me cl nvri,T i a【 0 J C ia; ol e fAnma c nead Tcnl y,h mcA i l rl iesy di iesy a u n6 0 O, hn lg aU t y 3 C e o i l i c n ehoo S a i c t a vri ) Se g u u Un t A s at Ob ci T mp f tre ee f reuu r esb o ie uho nP R T -C . Mem s C m n bt c: r j t e oa ly agt ns i tl gi u ym df dt cdw C ( D P R) e v i g

oC c s s i o t d o mo lP CR n a d TD- CR we eu e o a l y g n f i t l sg ie sw t ar rmesd i n a e n c n e v d g n o ig r— P r s t mp i e e o c u u r u ih 4 p isp i r e g e b s do o s r e e ec d n e d f s Cr e s s d g o so o s n u e u n e C in f n e s ss q e c OX1 C c, OX NADH5, 2, NADH6,e p c iey Reu t On y o e f g n sa l i y c mmo rs e t l . v sl s l n r me twa mp i e b o a f d n P CR. u a g tf g n swe ea pi e y TD- CR. C n l s n C mp r t lr o CR, ) P e o O s a c b t t r e r me t r 4 a m l id b f P o cu i o o a e wi c T n n P d ho l TI_ CR n e n tt e r h d b ta n a ig t mp r t r d TD- C i ab n f il t o e n e l g tmp r t r fs mep i r r e r s e n e l e e au e An n P R s e e i a c me h d wh n a n ai e ea u e o o r n s mes a en a . Ke r s Cr eu u r e s t u h o C a n ai g tmp r t r; P R p cf i y wo d: i t lsg i u; o c d wn P R; c s n e l e e au e n C s e i ct i y

P R作为一种体外扩增 D C NA的方法，目前在生物医药领域中应用越来越广泛。影响 P R的因 C

Mg 1、NT、 re为大连宝生物公司产品。引 C7d P Mak r

物由上海生工公司合成。1 2基因组 D . NA的提取 1 3设计引物 .取中国地鼠的尾巴，采用常规的酚一氯仿抽提法提取基因组 D NA。本研究根据 G nB n e e a k中的小鼠线粒体基因组全序列 (录号为 E 1 8 3 )大鼠登 F 03 9、(录号为 AY 6 4 0基因序列，用 Cutl登 7 94 )应 ls w a

素很多：C仪器性能、应体系、 PR反

反应条件，中其退火温度影响最大。退火温度与引物中嘌呤、啶嘧的数目有关，一般根据 Tm值来确定。在实验室日常工作中经常出现两种情况：一种是因未找到最佳扩增条件导致产生大量非特异性产物；一种情况另

是未扩增出任何产物。降落 P R(ocdwnP R, C tuh o C T—C是一种设计多循环以使相连循环的退火 DP R)温度越来越低，而达到最佳扩增条件的方从

18软件进行序列比对， .3在保守区用软件 Olo60 i . g设计了 4对引物，增目的片段长约 9 7—13 7扩 3 8b,物序列见表 1 p引。 1 4 P R扩增 . C 1 4 1普通 P R扩增程序 .. C P R反应体系：5肚 C 2 l反应体系中含 Ta q酶 ( a a 0 2 l基因组 rK r ) .5、D A约 1 g M 1 6mmo/、 N P . N 0n、 . lL d T s 2mmo 0 l

法 _j实验采用常规 P R及改良的降落 P R 13。本 C C两种方法进行扩增中国地鼠线粒体基因组中的C OX1C X1C 2 NA H5 NA H5NA H64个、 O一 OX、 D、 D一 D

基因片段，落 P R效果良好，立了能特异、降 C建敏感、速检测 4个基因片段的 T—C方法，报快 DP R现告如下。

几、下游引物各 0 5 l扩增程序：4℃预变性 5上 .; 9mi;后 9 n然 4℃ 3,8℃ ( 4 0S4或 6℃,4℃ ) n 4 1mi,

1材料和方法

7 2℃ 9 进行 3循环；2℃ 1 i。P R产 0S 5次 7 0r n C a实验动物为山西医科大学实验动物用 10 .%琼脂糖凝胶电泳检测。

1 1实验材料 .

物中心饲养的中国地鼠。 T q酶、 0×B f r a 1 uf、 e基金项目：山西省实验动物专项基金资助项目(0 5 1 20 K0 )

142降落式 P R t cd n (扩增程序 P R .. C ( u o ) ohw P C

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