不同方法对石榴果皮总RNA提取效果的影响 (2)

河南农业科学

不同方法对石榴果皮总 RNA提取效果的影响张四普汪良驹，东伟。~,李( .南省农业科学院园艺研究所，南郑州 4 0 0; .京农业大学园艺学院，苏南京 2 0 9; 1河河 502 2南江 1 0 5 3新郑市林业局，南新郑 4 l 0 ) .河 5 1 0

摘要：较了 3种 R比 NA提取方法提取石榴果皮 RNA的效果。结果表明：良 C AB法提取的总改 T RNA OD值在 1 9 . 1左右，率为 4 g g T i l法提取总 R 得 8/;ro z NA OD值在 1 1左右，率为 .5得 8￣/;剂盒提取得到的总 R 6t g试 g NA值在 1 2 OD . 4左右，率为 1 4 t/。分别反转录为 c得 2 g g p DNA, 根据不同植物花青素合成关键酶基因保守序列，计简并引物进行 R—P R,中只有改良设 T C其 C B法得到的 c NA有扩增条带。表明改良 C B法比较适合富含多糖和酚类物质石榴果皮 TA D TA总 RNA的提取。

关键词：石榴；CTAB;RNA

中图分类号： 65 4￥ 6 .

文献标识码： A

文章编号：1 0 0 4—3 6 (0 0 1~0 9 0 2 8 2 1 ) 0 0 7— 3

Efe to fe e tM e h d n Ex r c i n o f c fDif r n t o so ta t f oTo a t lRNA r m he Pe lo m e a t f o t e fPo gr na eZHANG S— u~。 ANG a gj孙， n— i i W p Lin—u LIDo g we。(1 I tt e ofH ori u t e, e n A c de y ofA grc t r lSce e Zhe gz ou 4 00 . ns iut tc lur H na a m iulu a inc s, n h 5 02,Chia; n

2 Colg fHo t ut r, nigAg iut rlUnv r i, nig 2 0 9 Chn; . l eo ri l e Najn rc lu a ie st Na j 1 0 5, ia e c u y n3 X i he r s r . nz ng Fo e t y Bur a Xi h ng 4 i e u, nz e 51 00, Chi ) na

m gr n t pe l e e o p r d.

The e u t e w r c m a e r s l Ab ta t s r c:Thr e e RNA e r c i n xt a to m e ho f o t ds r m po e a a e

s owe ha h h d t tt e OD l e oft t lRNA s 1 91 b d f dCTAB,t ey e s4 g g t e va u o a wa . ymo i e i h il wa 8￣/;h d

0D au ft t l v leo o a RNA s 1 1 yTrz l t o wa . b io h d,t e yed wa 6/ t e 0D au ft t l 5 me h il s8 g g;h v le o o a RNA s1 2 y RNA x r ce i,t e yed wa 2,g g; h DNAs we e g tb e e s wa . 4 b e ta t d kt h il s 1 4u/ t e c r o y r v reta s rp i r n c i ton. A a r o ge r t i e s w a e i e s d o he c p i fde ne a e prm r s d sgn d ba e n t ons r e o an ofC H S e v d d m i t a s o ft e k y ge s o nt oc n di ynt ssofe g l nt . O nl hec h t wa ne o h e ne fa h ya i n s he i i htp a s y t DN A r m h fo t e i pr v d CTA B d o m p iid ba d bv RT— PCR,t t r a o b nd . h m p o d m oe ha ne a lfe n he o he s h d n a s So t e i r ve CT A B e ho a u t b e f N A x r c i n ofp m t d w s s ia l orR e t a to om e r n t e 1 g a a ep e. Ke r s:Po e a a e;CT A B;R N A y wo d m gr n t

石榴系石榴科石榴属落叶灌木或小乔木 。石榴叶片、皮、汁、子、均具有独特的医疗价果果种根

性好的总 RNA是后续 RT—P CR、 rh r No t en杂交、

c NA文库构建等分子生物学研究的基础。虽然目 D 前提取植物

总 R A方法有多种[,由于不同植 N 但物组织成分的差异，尤其是酚、多糖等次生物质含量的差异，导致同一种提取方法对不同植物的提取效会果差别很大 l8。鉴此，别对改良的 C AB法、 r 5l _分 T T一

值。近年来，研人员发现，榴中含有延缓衰老和科石

减缓癌变进程的高水平抗氧化剂。这些必将为石榴研究、发和产业化发展提供良好的契机 l。石榴开 2]果皮中富含多糖和次生代谢物质，取纯度高、整提完

收稿日期： 0 0一O 21 6—1 O基金项目：苏省农业资源开发项目( 0 9 1江 20 1)作者简介：四普 ( 9 3 )男，南扶沟人，士，要从事果树分子生物学研究。 E—ma:p 3 5 1 1 1 6 c r张 17一，河博主 i s z5 4 0@ 2 .o l n *通讯作者：良驹 ( 9 4一，,徽黄山人，授，士生导师，要从事果树生长发育调控研究。E— i wl na . d .n汪 16 )男安教博主 ma: j i e u c l@ u

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21 0 0年第 1 O期

i l和商品 R A提取试剂盒的提取效果进行了对 z法 o N比研究，探讨适合石榴果皮 R A提取的方法。以 N 1材料和方法1 1材料 .

按 1 ro液加 05 Ti l mL z . mL异丙醇的比例加人异丙醇，温放置 1 mi,2 0 g离心 1 mi。 ( )上室 0 n 1 0 0 0 n 4弃清液， mL Tr o液中加入等体积 7乙醇，旋 1 il z 5涡

混匀，℃下 7 0 ri心 5 n 5小心弃去 4 0/ n离 5 ra mi。( )上清液，后室温或真空干燥 5 1 ri,意不要然~ 0 n注 a

供试材料取自南京农业大学石榴种质资源圃。 于石榴着色期取样，打孔器取表面不同部位的果用皮，液氮速冻保存于一8℃冰箱备用。提取液中所 O用的溶液除含 Tr i外，用 0 1 DE C处理并 s的均 . P

过分干燥，则会降低 R否 NA的溶解度。然后将R NA溶于 RNaefe s—re水中，要时可 5~ 6℃水必 5 O浴 1 n。 0mi

1 23 R . . NA提取试剂盒试剂盒包括以下成分： 溶液 A、液

B、液 C、液 D、心吸附柱、用溶溶溶离通洗柱液、 RNA洗脱液。 ( ) 10mg石榴果皮液氮 1将 0

高压灭菌， Tr含 i s的溶液用 DE C处理水直接配 P制。将玻璃器皿 1 0 6℃干热灭菌 6 h以上，塑料制品等用 0 1 D P .% E C水溶液浸泡过夜后高压灭菌。1 方法 .2

研磨后在 l mL溶液 A中匀浆。 ( ) 2加入 0 3 . mL溶液 B和 0 2 . mL氯仿，振荡混匀并离心。( )上清 3在中加入 0 5倍体积溶液 D混匀。( ) . 4转移到离心吸附柱中并离心 3。 ( )通用吸附液洗离心吸附 0 S 5用柱 1 2次。 ( ) 1 0 ~ 6用 0 L RNaefe s- e水洗脱即得 rRNA。

1 2 1改良 C AB法 ( )取 1 0 . . T 1 0 mg石榴果皮在

液氮保护下研磨成粉状，移至预冷的 2转 mL离心管中，入 1加 预冷的 Wahn ufr 10 o/ mL si b f ( 0 g e mm l L

Ti r s—HC, . 5 lL山梨糖醇， 10 3 mo/质量分数为 1 O P G 60, E 0 0体积分 …… 此处隐藏：5990字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……