生物技术综合实验讲义

时间：2025-02-24

生物技术综合实验讲义

首都师大生命科学学院

2005年6月

第一部分植物组织培养

1.1植物的组织培养技术………………………………………………………………3

1.2植物细胞的悬浮培养………………………………………………………………8

1.3植物原生质体的培养………………………………………………………………11

1.4叶盘法转基因烟草…………………………………………………………………15

1.5植物原生质体融合与体细胞杂交…………………………………………………17

第二部分基因克隆和植物基因工程

I DNA的制备和分析 …………………………………………………………………21 1 细菌质粒的制备 …………………………………………………………………22

1.1 .碱裂解法 …………………………………………………………………23

1.2 煮沸法 ………………………………………………………………………24

1.3小量一步提取法 ……………………………………………………………25

1.4 试剂盒法 ……………………………………………………………………25

2 植物DNA的制备 …………………………………………………………………28

2.1 CTAB法提取植物基因组DNA ………………………………………………28

2.2 SDS 法提取植物基因组DNA…………………………………………………29

II RNA的制备和分析…………………………………………………………………32 1 异硫氰酸胍—酚法制备植物总RNA………………………………………………34 2 Trizol法 …………………………………………………………………………36 3 RNA的定量和完整性分析…………………………………………………………37

3.1 甲醛变性电泳检测RNA完整性 ………………………………………………37

3.2 RNA含量和纯度的测定………………………………………………………38 Ⅲ DNA的克隆……………………………………………………………………………40 1 DNA的酶切 …………………………………………………………………………42 2 DNA片段的纯化回收………………………………………………………………44 3 体外重组……………………………………………………………………………46 4 重组DNA的转化和蓝白筛选………………………………………………………48 Ⅳ PCR相关技术 …………………………………………………………………………53 转基因烟草的PCR检测 ………………………………………………………………56 Ⅴ 分子杂交技术…………………………………………………………………………58 1 同位素标记探针的分子杂交 ………………………………………………………61 2 DIG标记探针的分子杂交……………………………………………………………62

第三部分重组蛋白诱导表达

3.1重组蛋白在E.coli中表达及纯化 ……………………………………………………67

第一部分植物组织培养

实验一植物的组织培养技术

一．实验目的：

1. 学习固体培养基的配制；

2. 掌握胡萝卜愈伤组织的诱导方法。

二．实验原理：

植物组织培养理论依据是植物细胞具有全能性。

植物组织培养是指用无菌培养的方法，在人工制备的培养基上培养植物体的一个离体器官、离体的一种组织，或单个细胞，这些离体的器官组织，或单个细胞在无菌条件下不断生长，并经过转移，能够一代一代的延续生长下去，它的方法与微生动物培养技术相似，全部在人工控制下进行。

组织培养技术内容是20年来已经从组织培养（组织块培养）发展到细胞培养、原生质体培养和细胞融合培养等等。并用之进行各种生理化及遗传操作研究。

三、实验剂试剂和设备