PCR技术在食品微生物安全性检测中的应用

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2 0 No3 ( 2 5期) 03 .总 2

0赵改名

王允祥

郭新海

P R ( oy r o C a Rec o )即聚 C Pl me￣ hi n at n i

表明该省存在李斯特氏菌病的可能性。李斯特氏菌共有 1 8个血清型，了格氏除李斯特氏菌和默氏李斯特氏菌包含有区别于其他李斯特氏菌的特异的。抗原和 H抗原外，他 1其 6个血清型分属于 5个种。其中L M包括 1 2、/ b、/ c 3、 b、 c 4、/ a 1 2 1 2、 a 3 3、 a

合酶链式反应，称无细胞克隆系统，由也是 美国的 K r Us等人于 18 ay Mu i 9 5年首创并由美国 Ce s公司开发的一项体外扩增 DNA l u 的方法。应用该方法可使极微量的 DNA片段在几小时内迅速扩增至百万倍，有特异具性强、敏度高和快速准确的优点，而一灵因经问世就得到了迅速发展和实际应用，分在

4 b、 b、 c 4 4、 a 4 4、 d、 e 7共 1 3个血清型。L各 M血清型在流行病学上的意义不同】由于李。

子生物学和基因工程实验室，疾病检测、临床应用、品检疫、医鉴定、的医药和工商法新农业制品的开发等方面显示了巨大的潜力和用途，在原有基础上结合各种分子生物并学技术衍生出了许多改良技术。本文仅就 P R技术及其在食品微生物安全性检测中 C应用的研究进展进行综述。

斯特氏菌类型复杂，食品中单核细胞增多对症李氏杆菌的检测，去一直缺乏简单快速过的分离鉴定技术。克隆培养的标准方法往往需要 3 4周才能得出结果；清学检测方法~血 ( E IA等 )也存在着特异性和敏感性差如 LS等问题。

据报道， ne等人采用 P De er CR技术对食品中李氏杆菌的溶血。一基因进行扩增，结果可在 1 h内完成整个检测过程，样品中 2且只需要含有 5 5 - 0个细菌即可被检出 1。研 4该 1究显示了 P R技术在李斯特氏菌快速检测 C

1单核细胞增多症李斯特氏杆菌 单核细胞增多症李斯特氏菌 ( ie a L

s f— ti mo o yo ee,简称 L )是食品卫生上重 n—ctg n s M

要的病原菌。 12 9 9年首次报道证实了李斯特氏菌对人的致病性， 9 6年 Gr 16 a y氏首次发表

中的优势。我国学者商海涛等 1 ( 9 9利用 3 19 ) 1复合因子血清的多克隆抗体包被磁性球，对食品中的单核细胞增多性李斯特氏菌进行

李斯特氏菌引起人和动物感染的报道。近年来，美因食品感染的李斯特氏菌病患者呈欧上升趋势，临床死亡率高。wHo将其列为且 9 0年代食品中四大致病菌之一『。陈伟伟等】 1[( 0 0从我国福建省采集的 2 5份各种食 2 20 ) 1 6品样品中，用 P R方法检测出 1 C 7株李斯特氏菌，中 2株 L含有李氏溶血素 o( i 其 M Ls— t￣ s HI)和内化素基因 ( t nl, 1, e yi O, y i f n I e anI ) nr i n

免疫磁性分离，与 P R方法相结合，立并 C建了检测食品中单核细胞增多性李斯特氏菌的 MIA方法。对菌液、模拟样品的检测表 P明，方法能够有效地克服食品基质、养该培基成分和杂菌对 P R检验的干扰作用。食 C品样品在 E增菌液中增菌 1 h后，检测的 B 2

曼里皇

目

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2 0 No3 ( 2 5 03 .总 2期)敏感度达 5 F/,以在 2 h内完成检测， c ml可 u 0 且检测结果与国家标准检验方法检测结果一

此三对引物都能快速、异地从肉食品样品特中检测出肉毒梭状芽胞杆菌 1。我国王颖群 5]等 11 ( 9 7用自己设计的特异引物， A— 78 19 ) 1]以 G型肉毒梭菌及破伤风梭菌的培养物经热裂解提取的 DNA为模板， P R扩增发现经 C A、 E、 B、 F和 G型肉毒梭菌均出现 2 4 p的 6b特异扩增带，而 c、型肉毒梭菌及破伤风 D梭菌未见扩增带，异性很好。以 A、 E和特 B、

致。北京市卫生防疫站的陈倩和付萍 1 4 i

( 9 8应用两对引物 ( Y1 2和 Il—2通 19 ) HI— n1 )

过 P CR方法检测速冻食品中的单核细胞

增多性李斯特氏菌，结果发现阳性率为 1%, 2

与常规方法检测结果一致。这些研究都发现P CR方法具有简便、速、异性和灵敏度快特

高等特点，极有前途的快速检测李斯特氏是菌的方法。

F型肉毒梭菌感染食品制备的模拟标本，对增菌培养后检测，检出限为 1￣1个菌/, 0 0 g整个过程可 3h 6 r内完成，现了对食品中肉实毒梭菌的快速、感、异性地检测。敏特 4大肠杆菌肠出血性大肠杆菌 ( neo e r ai e t h mor gc r hE c ei i oi HE是指能够引起人类出血 s r ha l E C) h c c,

2金黄色葡萄球菌1 5]金黄色葡萄球菌肠毒素 ( E)引起人 S可类食物中毒，其内毒素——中毒休克综合症毒素 ( s )引起中毒休克综合症，生 Ts T1可产的脱皮毒素 ( T E B)一系列脓疱性葡 E A、 T与萄球菌感染有关。 Ih no o e sn等 ( 9 0建立了 19 )检测上述毒素基因的 P CR技术，可在较短的时间内检测出葡萄球菌毒株，且具有极并高的特异性、感性。敏 3肉毒梭状芽胞杆菌 肉毒梭状芽胞杆菌产生的肉毒神经毒素，天然物质中毒力最强。依据抗原性不在同，肉毒毒素分为 A、 c、 E、 B、 D、 F和 G七型，分别由 A~型肉毒梭菌 ( otdu G Clsiim r b tf u )生，中 A、 E和 F型引起人 ou n m产 i其. B、类肉毒中毒，肉类食品食物中毒，别是是特肉类罐头食品食物中毒的主要原因，死率致很高。 9 5年以来还陆续发现 C.uyiu和 18 b tr m c C.aa b rt某些株分别产生 E和 F型毒素而 i的引起人类肉毒中毒。但肉毒梭菌一直缺乏有效的快速检测方法，常规方法从食物中分 …… 此处隐藏：4793字，全部文档内容请下载后查看。喜欢就下载吧 ……