细胞培养无菌操作和培养技术(2010-9-25)

第二部分 细胞培养技术

林 红 9-25-2010

一 细胞培养无菌操作

常用仪器设备 培养器皿 培养基 血清 其他细胞培养试剂

常用仪器设备

超净台或生物安全柜：细胞操作 CO2 培养箱：细胞培养 液氮罐：细胞长期冻存 37℃ 水浴：培养溶液预热，细胞复苏 倒置显微镜：观察细胞 离心机：收集细胞，细胞常用300g转速 5min 冰箱：细胞培养溶液分装储存 负压吸引器：细胞培养废液吸取

超净工作台

超净台或生物安全柜

水平风超净台

垂直风超净台

超净工作台（超净台，clean bench）

是为了保护试验品或产品而设计的，通过吹 过工作区域的垂直或水平层流空气防止试验 品或产品受到工作区域外粉尘或细菌的污染。

生物安全柜（Biological safety cabinets，BSCs）是

为操作原代培养物、菌毒株以及 诊断性标本等具有感染性的实验 材料时，用来保护工作人员、实 验室环境以及实验品，使其避免 暴露于上述操作过程中可能产生 的感染性气溶胶和溅出物而设计 的。

实验前准备

预热实验用相关试剂（培养基、PBS、D-Hanks 液、实验用水） 预融实验用液体（血清、胰酶、双抗、实验添加 剂） 检查离心机、水浴箱、显微镜、超净台、培养箱 是否处在正常状态 用75%酒精涂手，清洁操作台 检查超净台内各种实验器材（离心管、滴管、移 液器、酒精灯、镊子、记号笔、培养瓶等）

使用前需打开无菌工作台及净化室的紫外 灯，消毒半小时以上。 进入净化室前先关闭紫外灯，打开超净台 风机，等待30 min 以上，以排尽臭氧。 穿好隔离衣，戴好口罩，帽子，换鞋。 风淋 1- 2 min。 75 %酒精擦手。

点燃酒精灯，注意酒精液面；超净台内应 避免放入过多的物品；使用的吸管，滴管， 试管，培养瓶等均事先灭菌。 打开各类瓶盖前先过火，以固定灰尘；打 开的瓶口、试管口过火焰，镊子使用前应 经火焰烧灼。 水平式风机的超净台，应使瓶口斜置，应 尽量避免瓶口敞开直立。

每次从试管或者培养瓶中倾倒培养液的时 候，都要使用火焰灼烧瓶或者管的盖子。 当转移培养物时，也应该常规性的灼烧。 灼烧的目的不是消毒，是为了加热试管以 产生自瓶口处上升的热对流空气。这种热 的空气“保护伞”能够防止携带有污染性 质细菌的尘埃落入试管。

培养器皿

Culture flask

Culture Plate

移液管和移液器