细胞培养无菌操作和培养技术(2010-9-25)
时间:2025-07-12
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第二部分 细胞培养技术
林 红 9-25-2010
一 细胞培养无菌操作
常用仪器设备 培养器皿 培养基 血清 其他细胞培养试剂
常用仪器设备
超净台或生物安全柜:细胞操作 CO2 培养箱:细胞培养 液氮罐:细胞长期冻存 37℃ 水浴:培养溶液预热,细胞复苏 倒置显微镜:观察细胞 离心机:收集细胞,细胞常用300g转速 5min 冰箱:细胞培养溶液分装储存 负压吸引器:细胞培养废液吸取
超净工作台
超净台或生物安全柜
水平风超净台
垂直风超净台
超净工作台(超净台,clean bench)
是为了保护试验品或产品而设计的,通过吹 过工作区域的垂直或水平层流空气防止试验 品或产品受到工作区域外粉尘或细菌的污染。
生物安全柜(Biological safety cabinets,BSCs)是
为操作原代培养物、菌毒株以及 诊断性标本等具有感染性的实验 材料时,用来保护工作人员、实 验室环境以及实验品,使其避免 暴露于上述操作过程中可能产生 的感染性气溶胶和溅出物而设计 的。
实验前准备
预热实验用相关试剂(培养基、PBS、D-Hanks 液、实验用水) 预融实验用液体(血清、胰酶、双抗、实验添加 剂) 检查离心机、水浴箱、显微镜、超净台、培养箱 是否处在正常状态 用75%酒精涂手,清洁操作台 检查超净台内各种实验器材(离心管、滴管、移 液器、酒精灯、镊子、记号笔、培养瓶等)
使用前需打开无菌工作台及净化室的紫外 灯,消毒半小时以上。 进入净化室前先关闭紫外灯,打开超净台 风机,等待30 min 以上,以排尽臭氧。 穿好隔离衣,戴好口罩,帽子,换鞋。 风淋 1- 2 min。 75 %酒精擦手。
点燃酒精灯,注意酒精液面;超净台内应 避免放入过多的物品;使用的吸管,滴管, 试管,培养瓶等均事先灭菌。 打开各类瓶盖前先过火,以固定灰尘;打 开的瓶口、试管口过火焰,镊子使用前应 经火焰烧灼。 水平式风机的超净台,应使瓶口斜置,应 尽量避免瓶口敞开直立。
每次从试管或者培养瓶中倾倒培养液的时 候,都要使用火焰灼烧瓶或者管的盖子。 当转移培养物时,也应该常规性的灼烧。 灼烧的目的不是消毒,是为了加热试管以 产生自瓶口处上升的热对流空气。这种热 的空气“保护伞”能够防止携带有污染性 质细菌的尘埃落入试管。
培养器皿
Culture flask
Culture Plate
移液管和移液器